豆腐柴提取物對(duì)果蠅壽命的影響研究

◎ 孫 翌，李京雨，劉冀捷，王虹懿，彭 景

（揚(yáng)州大學(xué)，江蘇 揚(yáng)州 225127）

豆腐柴（Premna microphylla Turcz）又名腐婢、觀音草、臭黃荊、土黃芪（浙江）、滿山香、止血草等，為馬鞭草科豆腐柴屬多年生落葉灌木，多生于山坡或林下等地，主要分布于熱帶及亞熱帶區(qū)域，如亞洲、澳大利亞、非洲等地，是一種重要的藥食兩用植物[1]。在我國(guó)，豆腐柴廣泛分布于華東、華中、華南、四川、貴州等省區(qū)，是一種較為多見(jiàn)的藥食兩用植物[2]。《中藥辭?！酚涊d，豆腐柴性寒、味苦澀、主治瘧疾、瀉痢、癰、腫痛?！侗静菡x》記載，豆腐柴味苦氣寒，專(zhuān)主溫?zé)嵝安?，?shí)熱蘊(yùn)結(jié)及癰瘡腫毒諸癥，可服食，可外敷[3]。民間常用來(lái)治療創(chuàng)傷出血、清熱解毒、跌打損傷、燒傷、毒蛇咬傷及痢疾等癥[4]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，豆腐柴具有增加體重但不增加脂肪含量、抗疲勞、抗炎、抗菌、抗氧化等作用。豆腐柴葉子中含有大量的果膠成分，可用來(lái)制作綠色果凍類(lèi)食品，具有很高的食用價(jià)值。果蠅模型是經(jīng)典的抗衰老模型之一，本實(shí)驗(yàn)以果蠅為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀察豆腐柴提取物對(duì)果蠅壽命的影響，以期為豆腐柴的開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 豆腐柴提取物的制備

取市售豆腐柴粉末120 g，加入蒸餾水于30 ℃水浴鍋中浸泡24 h后進(jìn)行過(guò)濾得到濾液，后經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到提取物，于50 ℃干燥箱中干燥，制成粉末。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

美國(guó)野生型Oregon K黑腹果蠅，由南京醫(yī)科大學(xué)提供。

1.2 方法

1.2.1 果蠅培養(yǎng)基

共制備4組果蠅培養(yǎng)基。普通培養(yǎng)基參考王彥平等人[5]的方法制備：玉米粉25 g，白糖25 g，瓊脂粉1.875 g，酵母粉0.7 g，水250 mL。實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基共設(shè)立低、中、高3種不同劑量，其豆腐柴提取物的濃度分別為1.2、2.4、3.6 mg/mL。

1.2.2 果蠅的處理及培養(yǎng)

取8 h內(nèi)羽化未交配的果蠅成蟲(chóng)，乙醚麻醉后雌雄分管培養(yǎng)，對(duì)照組用普通培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組設(shè)為低、中、高3組含不同豆腐柴提取物劑量的培養(yǎng)基，每組雌雄果蠅各60只，每根培養(yǎng)管中裝入20只果蠅，即每組有3管雌果蠅和3管雄果蠅共120只，在溫度（25±1）℃，相對(duì)濕度為50%～60%的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每4 d更換1次培養(yǎng)基。

1.2.3 壽命統(tǒng)計(jì)

每天統(tǒng)計(jì)果蠅的生存數(shù)和死亡數(shù)（對(duì)于飛走和非正常死亡的果蠅不計(jì)入統(tǒng)計(jì)），全部果蠅壽命的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的平均壽命，前半數(shù)果蠅壽命的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的半數(shù)死亡期，每組最后死亡的10只果蠅的算術(shù)平均數(shù)為果蠅的最高壽命。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

利用Excel和SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件方差分析對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x-±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 豆腐柴提取物對(duì)果蠅平均壽命的影響

由表1可知，低劑量組和中劑量組均能延長(zhǎng)雌性果蠅的平均壽命，其中低劑量組延長(zhǎng)幅度比中劑量組大，低劑量組與對(duì)照組相比具有極顯著差異（P＜0.01），中劑量組與對(duì)照組相比具有顯著差異（P＜0.05），高劑量組則減少雌性果蠅的平均壽命，與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。低、中、高劑量組均可以增加雄性果蠅的平均壽命，延長(zhǎng)幅度低劑量組最好，高劑量組最差，與對(duì)照組相比低劑量組具有極顯著差異（P＜0.01），中劑量組具有顯著差異（P＜0.05）。

表1 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅平均壽命的影響表s）

表1 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅平均壽命的影響表s）

注：*表示與正常組相比存在顯著差異，P＜0.05；**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

對(duì)照組 雌性 53 41.77±3.10雄性 54 36.48±3.05低劑量組 雌性 59 48.08±5.42** 15.11雄性 57 43.96±5.33** 20.86中劑量組 雌性 50 43.74±4.60* 4.71雄性 57 38.05±3.80* 4.61高劑量組 雌性 58 39.09±3.37** -6.43雄性 54 37.74±3.18 3.75

2.2 豆腐柴提取物對(duì)果蠅半數(shù)死亡期的影響

由表2可知，低、中劑量組可以延長(zhǎng)雌性果蠅的半數(shù)死亡期，低劑量組的延長(zhǎng)幅度最大，低劑量組與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組則可以降低雌性果蠅的半數(shù)死亡期，且與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。低、中、高劑量組均能延長(zhǎng)雄性果蠅的半數(shù)死亡期，其中低劑量組的延長(zhǎng)幅度最大，中、高劑量組延長(zhǎng)幅度相近，低劑量組與正常組相比具有極顯著差異（P＜0.01）。

表2 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅半數(shù)死亡期的影響表（s）

表2 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅半數(shù)死亡期的影響表（s）

注：**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

組別 性別 果蠅數(shù) 半數(shù)死亡期/d 延長(zhǎng)幅度/%對(duì)照組 雌性 27 39.74±3.03雄性 27 34.22±2.26低劑量組 雌性 30 44.33±4.18** 11.56雄性 29 39.52±2.53** 15.47中劑量組 雌性 25 40.08±3.28 0.85雄性 29 35.17±2.48 2.78高劑量組 雌性 29 36.24±1.79** -8.81雄性 27 35.15±2.03 2.71

2.3 豆腐柴提取物對(duì)果蠅最高壽命的影響

由表3可知，低、中劑量組可以延長(zhǎng)雌性果蠅的最高壽命，其中低劑量組的延長(zhǎng)幅度最大，低、中劑量組與對(duì)照組相比均具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組對(duì)延長(zhǎng)雌性果蠅的最高壽命有副作用，與對(duì)照組相比不具有顯著差異（P＞0.05）。低、中、高劑量組均可以增加雄性果蠅的最高壽命，低劑量組延長(zhǎng)幅度最大，中劑量組次之，高劑量組延長(zhǎng)幅度最小，低、中劑量組與對(duì)照組相比均具有極顯著差異（P＜0.01），高劑量組與對(duì)照組相比具有顯著差異（P＜0.05）。

表3 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅最高壽命的影響表（s）

表3 豆腐柴水提取物對(duì)果蠅最高壽命的影響表（s）

注：*表示與正常組相比存在顯著差異，P＜0.05；**表示與正常組相比存在極顯著差異，P＜0.01。

對(duì)照組 雌性 53 45.00±0.67雄性 54 40.60±0.97低劑量組 雌性 59 56.00±2.45** 24.44雄性 57 51.90±1.66** 27.83中劑量組 雌性 50 49.40±1.26** 9.78雄性 57 43.50±1.78** 7.14高劑量組 雌性 58 43.90±1.20 -2.44雄性 54 42.00±0.82* 3.45

3 討論

果蠅是一種真核多細(xì)胞生物，具有生命周期短、可在短時(shí)間內(nèi)大量繁殖、飼養(yǎng)簡(jiǎn)單、反應(yīng)靈敏等優(yōu)點(diǎn)，其代謝系統(tǒng)、生理功能、生長(zhǎng)發(fā)育等同哺乳動(dòng)物基本相似，所以在衰老與抗衰老研究中，果蠅以其自身的諸多優(yōu)勢(shì)成為研究抗衰老的實(shí)驗(yàn)材料。衰老是一個(gè)十分復(fù)雜的現(xiàn)象，研究表明衰老與機(jī)體的氧化損傷有關(guān)，是由于機(jī)體代謝產(chǎn)生的活性氧成分造成的損傷累積引起的[6]。前期有報(bào)道指出豆腐柴根的三氯甲烷-甲醇（2∶1）提取物可增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能[7]。此外，從豆腐柴葉中分離得到的一種三萜皂苷具有顯著的抗菌作用及細(xì)胞毒性[8]。XU等[9]研究發(fā)現(xiàn)豆腐柴根和葉中抗壞血酸及β-胡蘿卜素含量豐富，此二者均具有明顯的抗氧化作用[10]。謝娟平[11]研究了犁頭草、商陸、車(chē)前草、豆腐柴及箭葉淫羊藿5種天然植物的抗氧化能力，實(shí)驗(yàn)證明這5種天然植物均具有較強(qiáng)的抗氧化能力，但其中抗氧化作用最強(qiáng)的是豆腐柴。

在本實(shí)驗(yàn)的研究中，添加不同劑量的豆腐柴提取物的低、中、高3組實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，低劑量組對(duì)果蠅的平均壽命、半數(shù)死亡期和最高壽命的延長(zhǎng)幅度最佳。產(chǎn)生這一現(xiàn)象的可能原因是豆腐柴提取物具有的味道果蠅并不喜歡，所以濃度增大對(duì)于果蠅的攝入量會(huì)有影響。同時(shí)觀察得到不同劑量組對(duì)果蠅壽命的影響存在性別上的差異，高劑量組對(duì)雌性果蠅的壽命延長(zhǎng)具有不利的影響，而對(duì)雄性果蠅的壽命延長(zhǎng)能產(chǎn)生有利影響，造成這種差異的原因有待于進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)初步得到適當(dāng)濃度的豆腐柴提取物可以延長(zhǎng)果蠅壽命，具備一定的抗衰老作用，但仍需要進(jìn)一步研究從而闡明其內(nèi)在的影響機(jī)制，為豆腐柴今后的充分開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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