液氮研磨和機械粉碎對云芝多糖提取的影響

王梓桐 林海

摘 要：云芝免疫調節(jié)多糖是云芝中生物調節(jié)活性突出的一類物質。本實驗是根據前人研究的基礎上參考真菌活性的提取工藝，分析液氮和機械破碎對云芝多糖的影響，選取出提取云芝多糖的最佳工藝。結果表明，在液氮研磨的條件下80℃時200目是最佳的工藝條件。

關鍵詞：云芝 液氮 多糖 蛋白

中圖分類號：G63 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）01（a）-0245-02

云芝的藥效成分有多種，云芝活性物質有免疫調節(jié)蛋白和多糖，目前云芝蛋白和多糖有很多種提取方法，一般的方法常先用水提醇沉獲得粗提物，然后在此基礎上采用酶解、微波、超聲波，膜處理和機械粉碎等方法進行輔助提取或精制[1-2]。本實驗通過液氮研磨和機械粉碎兩種方式對云芝子實體進行處理，并在不同目數和不同溫度條件下用水提法提取多糖進行初步研究。

1 實驗材料

云芝實體、液氮，苯酚、濃硫酸、甲醇、磷酸。

篩子：40目篩，100目篩，200目篩（浙江上虞市道墟儀器篩具產）。

2 實驗方法

取一定量云芝實體兩份，50℃烘干后分成兩份。一份粉碎機處理。另一份液氮研磨至粉末狀。然后分別過40目篩、100目篩和200目篩。

取上述制備的兩種粉末各5g，分別加入200mL雙蒸水，37℃、80℃條件下提取3h，每隔15min取1.5mL反應液。離心后取上清待測；在100℃條件下，提取3次每次60min，每次加水150mL離心合并上清。定容至500mL，每次取樣1.5mL待測。

標準曲線的繪制：稱取于50mg葡萄糖，加水溶解得1mg/mL的對照品溶液。精密量取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL于50mL容量瓶定容、搖勻。分別精密吸取以上對照品溶液1.0mL，加5%苯酚試液0.5mL，搖勻，迅速加濃硫酸2.5mL，振搖2min。另量取1.0mL蒸餾水按上述方法操作，作為空白對照。在490nm波長處分別測定吸光度，以吸光度值A為縱坐標，葡萄糖濃度C為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為Abs=11.48C+0.01，R2=0.9981.結果表明，葡萄糖在0.02～0.10mg/mL范圍內呈線性關系，重現性良好（見圖1）。

子實體樣品總糖含量測定：取上述200μL多糖樣品溶液，5倍稀釋后，再加0.5mL 5%苯酚的溶液，迅速加2.5mL濃硫酸并搖勻，在490nm波長處測定吸光度。

3 實驗結果及討論

本研究中，我們發(fā)現采用不同的預處理方式，云芝多糖的提取率均不相同。在相同溫度下，隨著時間的變化云芝多糖的釋放速度也有一定的變化趨勢（見圖2～3）。

由圖2和圖3可知，在37℃條件下云芝多糖的提取率有穩(wěn)定上升趨勢，在80℃條件下，相較于37℃條件下云芝整體的提取率有明顯優(yōu)勢。在該條件下，100～200目的樣品，云芝多糖的提取率相對200目以上及40～100目為最低。200目以上液氮預處理條件下相對于其他樣品有極其明顯的優(yōu)勢，達到了最高值。而且對于不同目數的顆粒，預處理方式對多糖的提取影響均不同。100～200目之間，二者差異最小。40～100目機械粉碎方式相對占有優(yōu)勢。200目以上，液氮研磨要更好一些。

4 結語

本實驗通過液氮研磨和機械粉碎兩種方式對云芝子實體進行處理，并在不同目數和不同溫度條件下用水提法提取多糖，通過這一系列的實驗，發(fā)現提取最佳條件是80℃條件下，液氮研磨的，顆粒大小在200目以上。

參考文獻

[1] 孟慶虹，張守文.真菌多糖的研究進展[J].糧食與食品工業(yè)，2003（3）：42-44.

[2] 李小定，榮建華，吳謀成.真菌多糖生物活性研究進展[J].食用菌學報，2002，9（4）：50-58.