甲狀腺乳頭狀癌中BRAFT1799A基因點突變及其與臨床病理特征的關(guān)系分析

劉麗云，胡月明，李巖冰，龔健

（河北省唐山市工人醫(yī)院 1.病理科 2.頭頸外科，河北 唐山 063000；3.河北省唐山市第二醫(yī)院 老年骨科，河北 唐山063000）

甲狀腺癌（thyroid carcinoma，TC）是臨床上最為常見的一種內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤[1]，甲狀腺乳頭狀癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是其最為常見的一種，約占TC的80%[2]。近年來，我國PTC發(fā)病率呈現(xiàn)明顯逐年攀升趨勢，嚴重影響了我國居民的身體健康及生命安全[3]。目前，PTC發(fā)病機制尚未完全闡明。有研究[4]表明，BRAF基因突變與PTC患者年齡、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等特征密切相關(guān)，但國內(nèi)研究相對較少，且研究結(jié)果尚缺乏一致性。本研究納入2016年1月—2017年1月期間我院病理科收集的PTC患者的組織為研究對象，探討PTC組織中BRAFT1799A基因點突變情況，及其與PTC患者臨床病理特征之間的關(guān)系，試圖為開展以BRAFT1799A為靶點的PTC分子生物學(xué)治療提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年1月—2017年1月期間我院病理科提供的97例PTC組織為研究對象，所有標本均經(jīng)病理學(xué)證實為PTC組織。其中男26例，女71例；年齡16～63歲，平均年齡（46.27±7.65）歲；腫瘤-淋巴結(jié)-轉(zhuǎn)移（tumor-node-metastasis，TNM）分期I～II期者45例，III～IV期者52例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者36例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者61例；隨訪發(fā)現(xiàn)有遠處轉(zhuǎn)移者30例，無遠處轉(zhuǎn)移者67例。納入標準：⑴ 所有標本患者均為于我院行甲狀腺全切術(shù)+頸部淋巴結(jié)清掃術(shù)者，且經(jīng)病理學(xué)確診為PTC者；⑵ 臨床資料完整者；⑶ 切除組織前未經(jīng)任何放化療或者內(nèi)分泌治療；⑷ 術(shù)后均在我院行規(guī)范131I清甲治療[5]者；⑸ 患者及家屬了解本研究，并同意簽署知情同意書者。排除標準：⑴ 合并其他惡性腫瘤者；⑵ 腫瘤已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，再次行手術(shù)治療者；⑶ 妊娠期及哺乳期婦女；⑷ 既往垂體疾病等不穩(wěn)定性原發(fā)系統(tǒng)性疾病者；⑸ 伴有肝臟、腎臟、肺臟、心臟等嚴重疾病者；⑹ 研究依從性差者。選取同期52例癌旁正常組織及49例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織作為對照，52例取癌旁正常組織的PTC患者中，男16例，女36例；年齡17～60歲，平均年齡（45.28±6.94）歲。49例結(jié)節(jié)性甲狀腺腫患者中，男14例，女35例；年齡18～61歲，平均年齡（46.32±7.31）歲。3組年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

本研究經(jīng)本院倫理委員會批準進行，臨床標本采集符合《世界醫(yī)學(xué)協(xié)會赫爾辛基宣言》[6]。

1.2 主要試劑與儀器

DNA FFPE Tissue Kit（56404），購自于德國QIAamp公司；PCR Mastermix，購自于BioTeke公司；引物由上海生工生物技術(shù)公司合成；Cycle-Pure Kit 100，購自于美國Omega公司；3530測序儀，購自于美國AMI公司。

1.3 方法

采用巢式PCR法檢測甲狀腺組織中BRAFT1799A基因位點突變情況。應(yīng)用DNA FFPE Tissue Kit（56404）提取甲狀腺組織DNA，測定所得DNA濃度后保存于-20 ℃冰箱中。BRAF上游引物：5'-GGC CAA AAA TTT AAT CAG TGG A-3'，下游引物：5'-TCA TAA TGC TTG CTC TGA TAG GA-3'。巢式PCR反應(yīng)體系：第1次PCR：PCR Mastermix 12.0 μL，DNA 1 μL，上游引物（25 μM）1 μL，下游引物（25 μM）1 μL，ddH2O 10 μL。第2次PCR：PCR產(chǎn)物DNA 1 μL，PCR Mastermix 12.0 μL，上游引物（25 μM）1 μL，下游引物（25 μM）1 μL，ddH2O 10 μL。按照以下反應(yīng)條件進行擴增：9 4 ℃預(yù)變性，5 min；94 ℃變性，45 s；56 ℃退火，45 s；72 ℃延伸，45 s；35個循環(huán)，72 ℃延伸10 min。所得PCR產(chǎn)物經(jīng)Cycle-Pure Kit 100純化后，應(yīng)用測序部分檢測試劑盒，利用3530測序儀對其進行測序操作，具體操作嚴格按照試劑盒及儀器使用說明進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

利用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0進行研究數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用例數(shù)（百分率）[n（%）]表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料采用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同甲狀腺組織BRAFT1799A位點突變率比較

97例PTC組織中，59例出現(xiàn)BRAFT1799A位點突變（圖1），突變率為60.82%，而癌旁正常組織與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織均未見BRAFT1799A位點突變，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.000）（表1）。

圖1 BRAFT1799A位點測序圖（綠色為突變峰；紅色為野生峰）Figure 1 Sequencing of the BRAFT1799A gene (mutation peaks shown in green and wild type peaks shown in red)

表1 不同甲狀腺組織BRAFT1799A位點突變率比較[n（%）]Table 1 Comparison of the BRA FT1799A gene mutations among diff erent thyroid tissues [n (%)]

2.2 BRAFT1799A位點突變與PTC臨床病例特征之間的關(guān)系

BRAFT1799A位點突變與PTC患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯關(guān)系（均P＞0.05），與腫瘤臨床分期、腫瘤多發(fā)灶、包膜外侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、規(guī)范化治療6個月甲狀腺球蛋白（Tg）值及遠處轉(zhuǎn)移有明顯關(guān)系（均P＜0.05）（表2）。

表2 BRAFT1799A位點突變與PTC臨床病例特征之間的關(guān)系[n（%）]Table 2 Relations of BRA FT1799A gene mutation with the clinical characteristics of the PTC patients [n (%)]

2.3 不同PTC組織分型BRAFT1799A位點突變率比較結(jié)果

對PTC組織進行具體亞型分型，結(jié)果顯示，嗜酸細胞型1例，高細胞亞型1例，普通型46例中，29例出現(xiàn)BRAFT1799A位點突變，突變率為63.04%，濾泡型49例中，30例出現(xiàn)BRAFT1799A位點突變，突變率為61.22%，普通型與濾泡型突變率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。兩種組織分型HE染色結(jié)果見圖2。

表3 不同分型PTC組織BRAFT1799A位點突變率比較[n（%）]Table 3 Comparison of the BRAFT1799A gene mutations between PTC tissues of different classifications [n (%)]

圖2 PTC亞型分型HE染色結(jié)果（×400） A：普通型；B：濾泡型Figure 2 HE staining for subtype classification of PTC (×400) A: Conventional PTC; B: Follicular variant PTC

3 討 論

PTC是臨床TC中最為常見的一種類型，其主要臨床表現(xiàn)為頸部疼痛、腫塊、吞咽困難、聲音嘶啞以及呼吸困難等[7]，PTC腫瘤生長緩慢，缺乏早期特征性癥狀，但其惡性程度較高，且具有多中心發(fā)生傾向，因此在其表現(xiàn)出明顯癥狀時，往往已進展為中晚期，此時治療療效往往不盡人意。目前，臨床治療PTC手段以手術(shù)切除及放射性碘治療為主[8]，但PTC晚期手術(shù)切除較為困難，且對于放化療敏感性較低，因此，闡明PTC發(fā)病機制，從基因?qū)用嫔蠈ふ襊TC診斷及治療新靶點[9]，是目前臨床亟待解決的關(guān)鍵性問題。近年來，基因?qū)W改變與PTC發(fā)病機制的關(guān)系被國內(nèi)外學(xué)者爭相報道[10-17]，其中BRAF基因突變與PTC發(fā)病之間的關(guān)系，是目前研究的重要熱點之一[11]。既往研究[12]表明，大多數(shù)PTC發(fā)生是由NTRK1、RET/PTC以及絲氨酸-蘇氨酸激酶致癌信號通路激活所致。BRAF基因是RAF激酶家族亞型成員之一，位于人類染色體7q34上，是絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路下游中信號最強的激動子[17]。BRAF基因?qū)俳z氨酸-蘇氨酸激酶類，其發(fā)生基因突變可激活MAPK信號通路，在機體細胞生長、增殖、分化、凋亡中起重要調(diào)節(jié)作用。BRAF基因位點突變異常激活MAPK信號通路時，可導(dǎo)致機體細胞生長、增殖分化調(diào)節(jié)失控，誘發(fā)腫瘤發(fā)生。研究[18-19]表明，BRAF基因位點突變主要集中于PTC中，最為常見突變位點為第15外顯子T1799A位點顛換突變，所致編碼產(chǎn)物由纈氨酸變?yōu)楣劝彼幔╒600E），該位點編碼產(chǎn)物異位導(dǎo)致BRAF基因持續(xù)性激活MAPK信號通路，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[20]。目前，國內(nèi)外有關(guān)BRAF基因T1799A位點突變與PTC臨床病理特征之間的相關(guān)性尚存在一些爭議，可能與不同樣本量、流行病學(xué)因素、初診病情評估差異等多種因素有關(guān)。

本研究納入2016年1月—2017年1月期間我院病理科97例PTC組織為研究對象，試圖探討PTC組織中BRAFT1799A基因點突變情況，及其與PTC臨床病理特征之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在97例PTC組織中，59例出現(xiàn)BRAFT1799A位點突變，突變率為60.82%，明顯高于癌旁正常組織及結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組織，說明BRAFT1799A位點突變僅在PTC組織中出現(xiàn)，提示BRAFT1799A位點突變可能是PTC發(fā)生的重要因素之一，參與PTC發(fā)生。Ca?adas-Garre等[21]研究結(jié)果顯示，BRAFT1799A位點突變是PTC中最為普遍的遺傳學(xué)改變，其診斷特征性使其成為了提高甲狀腺細針穿刺活檢診斷準確性最具潛力的遺傳工具，支持本研究觀點。顏康康等[22]研究結(jié)果顯示，BRAF基因位點突變與PTC臨床病理分期、多灶性、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、疾病復(fù)發(fā)密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，BRAFT1799A位點突變與PTC患者性別、年齡、腫瘤大小無明顯關(guān)系，與腫瘤臨床分期、腫瘤多發(fā)灶、包膜外侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、規(guī)范化治療6個月Tg值及遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，與上述觀點一致。Tg值、遠處轉(zhuǎn)移均是檢測TC術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的有效臨床指標[23]，BRAFT1799A位點突變與PTC患者術(shù)后規(guī)范化治療6個月Tg值及遠處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示其突變對于PTC復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移具有一定預(yù)測作用，故其可作為客觀判斷PTC預(yù)后效果、復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的有效指標。因此，臨床上對于術(shù)前或術(shù)后病檢BRAFT1799A位點突變的患者，應(yīng)在術(shù)后定期復(fù)查并嚴密監(jiān)測各項指標的變化情況，以便及時發(fā)現(xiàn)病情進展。還有研究[24]指出，術(shù)前USFNAB聯(lián)合多分子標志物的檢測可提高其診斷PTC的敏感性及特異性，可見BRAFT1799A位點突變對于術(shù)前診斷也有臨床價值。本研究對PTC組織進行具體亞型分型，結(jié)果顯示，嗜酸細胞型1例，高細胞亞型1例，普通型46例，濾泡型49例，且普通型與濾泡型突變率比較無顯著性差異，提示該突變位點不特異性的高發(fā)于PTC普通型或者濾泡型中。

綜上所述，BRAFT1799A位點突變與PTC臨床分期、腫瘤多發(fā)灶、包膜外侵犯、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、規(guī)范化治療6個月Tg值及遠處轉(zhuǎn)移密切有關(guān)。可見，術(shù)前檢測BRAFT1799A位點突變，對于陽性病例給予高度警惕，術(shù)中可通過擴大手術(shù)切除范圍等對其進行更為積極的有效治療，術(shù)后嚴密追蹤此類患者，督促其復(fù)查，以便及時發(fā)現(xiàn)病情變化，以期改善預(yù)后，使更多PTC患者受益。盡管本研究進一步地證實了BRAFT1799A位點突變檢測對于PTC患者預(yù)后具有積極的作用，但仍存在樣本量較少等缺陷，在后續(xù)研究中將擴大樣本量，從BRAFT1799A位點突變對在術(shù)前診斷、術(shù)中切除范圍、術(shù)后預(yù)后等維度來充分論證其突變的臨床指導(dǎo)意義，以完善本研究結(jié)果的不足和缺憾，為改善PTC患者的生活質(zhì)量提供大樣本或多中心研究成果，以更好地為臨床診斷、治療PTC患者提供切實可行的依據(jù)。

[1]馮紅芳,陳創(chuàng),孫圣榮,等.1585例甲狀腺癌的臨床病理特點及總結(jié)分析[J].中國腫瘤臨床,2015,42(2):77–81.doi:10.3969/j.issn.1000–8179.20141401.Feng HF,Chen C,Sun SR,et al.The analysis of clinicopathologic characteristics of thyroid cancer:a retrospective study of 1,585 cases[J].Chinese Journal of Clinical Oncology,2015,42(2):77–81.doi:10.3969/j.issn.1000–8179.20141401.

[2]尚培中,柳勇,南潤玲,等.甲狀腺乳頭狀癌的診斷與治療[J].中國現(xiàn)代普通外科進展,2015,18(10):833–836.doi:10.3969/j.issn.1009–9905.2015.10.027.Shang PZ,Liu Y,Nan RL,et al.Diagnosis and treatment of papillary thyroid carcinoma[J].Chinese Journal of Current Advances in General Surgery,2015,18(10):833–836.doi:10.3969/j.issn.1009–9905.2015.10.027.

[3]林琳.甲狀腺乳頭狀癌臨床流行病學(xué)及病理學(xué)特點分析[D].濟南: 山東大學(xué),2017.Lin L.Analysis of Papillary Thyroid Carcinoma in Clinical Epidemiology and Pathological Features[D].Jinan:Shandong University,2017.

[4]Xing M.BRAF mutation in papillary thyroid cancer: pathogenic role,molecular bases,and clinical implications[J].Endocr Rev,2007,28(7):742–762.

[5]中華醫(yī)學(xué)會內(nèi)分泌學(xué)分會,中華醫(yī)學(xué)會外科學(xué)分會內(nèi)分泌學(xué)組,中國抗癌協(xié)會頭頸腫瘤專業(yè)委員會,等.甲狀腺結(jié)節(jié)和分化型甲狀腺癌診治指南[J].中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志,2013,33(2):96–115.doi:10.3760/cma.j.issn.2095–2848.2013.02.003.Chinese Society of Endocrinology,Endocrine Group of Society of Surgery of Chinese Medical Association,Committee of Head and Neck Oncology,Chinese Anti-Cancer Association,et al.Guidelines for diagnosis and treatment of thyroid nodules and differentiated thyroid carcinoma[J].Chinese Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging,2013,33(2):96–115.doi:10.3760/cma.j.issn.2095–2848.2013.02.003.

[6]王福玲.世界醫(yī)學(xué)會《赫爾辛基宣言》——涉及人類受試者的醫(yī)學(xué)研究的倫理原則[J].中國醫(yī)學(xué)倫理學(xué),2016,29(3):544–546.doi:10.12026/j.issn.1001–8565.2016.03.53.Wang FL.The Helsinki Declaration of the World Medical Association——Ethical Principles of Medical Research Involving Human Subjects[J].Chinese Medical Ethics,2016,29(3):544–546.doi:10.12026/j.issn.1001–8565.2016.03.53.

[7]Kim GR,Shin JH,Hahn SY,et al.Ultrasonographic features and clinical characteristics of Warthin-like variant of papillary thyroid carcinoma[J].Endocr J,63(4):329–335.doi: 10.1507/endocrj.EJ15–0620.

[8]龐玉娟,劉文興,高景利,等.甲狀腺乳頭狀癌的治療進展[J].中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志,2016,4(32):18–19.doi:10.3969/j.issn.2095–6681.2016.32.011.Pan YJ,Liu WX,Gao JL,et al.Advance in treatment of papillary thyroid carcinoma[J].Cardiovascular Disease Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine: Electronic,2016,4(32):18–19.doi:10.3969/j.issn.2095–6681.2016.32.011.

[9]關(guān)海霞.甲狀腺乳頭狀癌中的BRAF T1799A基因突變研究:轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的實例[J].中華內(nèi)科雜志,2013,52(1):5–7.doi:10.3760/cma.j.issn.0578–1426.2013.01.002.Guan HX.BRAF T1799A gene mutation in papillary thyroid carcinoma: a living example of translational medicine[J].Chinese Journal of Internal Medicine,2013,52(1):5–7.doi:10.3760/cma.j.issn.0578–1426.2013.01.002.

[10]周愛軍,王洪勇,李振,等.甲狀腺癌組織中BRMSI和Cx43的表達與患者臨床病理及預(yù)后的關(guān)系[j].中國普通外科雜志,2017,26(2):259–264.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.02.022.Zhou AJ,Wang HY,Li Z,et al.Expressions of BRMSI and Cx43 in thyroid carcinoma tissue and the relationship to patients' clinical pathology and prognosis[J].Chinese Journal of General Surgery,2017,26(2):259–264.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.02.022.

[11]Virk RK,Theoharis CG,Prasad A,et al.Morphology predicts BRAF (V600E) mutation in papillary thyroid carcinoma: an interobserver reproducibility study [J].Virchows Archiv,2014,464(4): 435–442.doi: 10.1007/s00428–014–1552–3.

[12]Landa I,Ibrahimpasic T,Boucai L,et al.Genomic and transcriptomic hallmarks of poorly differentiated and anaplastic thyroid cancers [J].J Clin Invest,2016,126(3):1052–1066.doi: 10.1172/JCI85271.

[13]孫永亮,楊志英,譚海東,等.甲狀腺微小乳頭狀癌的診治:附47例報告[J].中國普通外科雜志,2017,26(5):561–566.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.05.005.Sun YL,Yang ZY,Tan HD,et al.Diagnosis and treatment of papillary thyroid microcarcinoma: report of 47 cases[J].Chinese Journal of General Surgery,2017,26(5):561–566.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.05.005.

[14]孫振華,趙志泓,蔣華平,等.腫瘤微環(huán)境相關(guān)因子IL-6、IL-10、CXCR7在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義[J].中國普通外科雜志,2017,26(5):578–582.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.05.008.Sun ZH,Zhao ZH,Jiang HP,et al.Expressions of tumor microenvironment-associated factors IL-6,IL-10 and chemokine receptor7 in papillary thyroid carcinoma and their clinical significance[J].Chinese Journal of General Surgery,2017,26(5):578–582.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2017.05.008.

[15]趙丹,張宇.甲狀腺癌患者外周血CEACAM1水平及其臨床意義[J].中國普通外科雜志,2015,24(11):1525–1529.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2015.11.006.Zhao D,Zhang Y.Peripheral blood level of CEACAM1 in patients with thyroid cancer and its clinical significance[J].Chinese Journal of General Surgery,2015,24(11):1525–1529.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2015.11.006.

[16]劉楠楠,姜晶,張繼紅,等.Smad4蛋白在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫與甲狀腺癌并存組織中的表達及其影響[J].中國普通外科雜志,2015,24(11):1618–1621.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2015.11.024.Liu NN,Jiang J,Zhang JH,et al.Expression and influence of Smad4 protein in tissues of nodular goiter with concomitant thyroid carcinoma[J].Chinese Journal of General Surgery,2015,24(11):1618–1621.doi:10.3978/j.issn.1005–6947.2015.11.024.

[17]于景超,秦華東,石鐵鋒,等.BRAF基因突變對甲狀腺乳頭狀癌(PTC)中央?yún)^(qū)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2015,23(2):189–191.doi:10.3969/j.issn.1672–4992.2015.02.12.Yu JC,Qin HD,Shi TF,et al.The effects of BRAF gene mutation on PTC lymph node metastasis in central region[J].Journal of Modern Oncology,2015,23(2):189–191.doi:10.3969/j.issn.1672–4992.2015.02.12.

[18]Ghossein RA,Katabi N,Fagin JA.Immunohistochemical detection of mutated BRAF V600E supports the clonal origin of BRAF-induced thyroid cancers along the spectrum of disease progression[J].J Clin Endocrinol Metabo,2013,98(8):E1414–1421.doi: 10.1210/jc.2013–1408.

[19]石臣磊,秦華東.乳頭狀甲狀腺癌與BRAF基因相關(guān)性的研究進展[J].中國普通外科雜志,2014,23(5):675–679.doi:10.7659/j.issn.1005–6947.2014.05.023.Shi CL,Qin HD.Relationship between papillary thyroid carcinoma and BRAF gene: recent progress[J].Chinese Journal of General Surgery,2014,23(5):675–679.doi:10.7659/j.issn.1005–6947.2014.05.023.

[20]徐曉琴,王旭紅,荊結(jié)線.BRAFV600E基因突變與甲狀腺乳頭狀癌的相關(guān)性研究進展[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2016,51(8):630–634.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–0860.2016.08.016.Xu XQ,Wang XH,Jing JX.Advances in the research of BRAFV600E gene mutation correlated with papillary thyroid carcinoma[J].Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery,2016,51(8):630–634.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–0860.2016.08.016.

[21]Ca?adas-Garre M,Becerra-Massare P,López de la Torre-Casares M,et al.Reduction of false-negative papillary thyroid carcinomas by the routine analysis of BRAF(T1799A) mutation on fine-needle aspiration biopsy specimens: a prospective study of 814 thyroid FNAB patients[J].Ann Surg,2012,255(5):986–992.doi: 10.1097/SLA.0b013e31824e8d70.

[22]顏康康,林雪君,李雙,等.BRAFV600E基因突變和甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征關(guān)聯(lián)性的Meta分析[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014,49(9):759–764.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–0860.2014.09.012.Yan KK,Lin XJ,Li S,et al.Association of BRAFV600E mutation with clinical pathological features in papillary thyroid carcinoma:meta-analysis[J].Chinese Journal of Otorhinolaryngology Head and Neck Surgery,2014,49(9):759–764.doi:10.3760/cma.j.issn.1673–0860.2014.09.012.

[23]徐金鍇.Tg變化對甲狀腺癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)檢測特異性分析[J].現(xiàn)代醫(yī)學(xué),2017,45(8):1076–1079.Xu JK.Specificity of Tg changes in the detection of metastatic lymph nodes in thyroid carcinoma[J].Modern Medical Journal,2017,45(8):1076–1079.

[24]王文蘭,王萍,趙世華,等.BRAFT1799A突變、RET/PTC重排對術(shù)前診斷甲狀腺乳頭狀癌的作用[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2015,15(16):3028–3033.doi:10.13241/j.cnki.pmb.2015.16.007.Wang WL,Wang P,Zhao SH,et al.Detection of BRAFT1799A and RET/PTC Rearrangements in Preoperative Diagnosis of Papillary Thyroid Carcinoma[J].Progress in Modern Biomedicine,2015,15(16):3028–3033.doi:10.13241/j.cnki.pmb.2015.16.007.