HCMV-PP65抗原檢測在小兒巨細(xì)胞病毒感染診斷中的應(yīng)用價(jià)值

于錳錳 李小芹

人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染為兒科常見病、多發(fā)病，屬于皰疹病毒科β屬，是一種具有潛伏性的雙鏈DNA病毒，當(dāng)免疫功能發(fā)育不全或者減弱后，HCMV原發(fā)性或者潛伏-再激活感染就會使患者表現(xiàn)出黃疸、肝脾腫大、咳嗽、發(fā)熱及貧血等臨床癥狀，因上述臨床癥狀不具備特異性，因此對患者開展早期HCMV感染活性診斷意義重大。有文獻(xiàn)指出，HCMV-PP65抗原檢測在小兒巨細(xì)胞病毒感染中有明顯價(jià)值[1]?，F(xiàn)選擇2014年7月～2017年7月在我院就診的疑似HCMV感染患兒為研究對象，探討HCMV-PP65抗原檢測對其診斷價(jià)值，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年7月～2017年7月于我院就診的疑似HCMV感染患兒為研究對象，共200例。男116例，女84例。年齡2.5月～5.14歲。按照衛(wèi)計(jì)委頒布的關(guān)于HCMV感染診斷方案，最終確診為感染者共計(jì)104例。排除其余類型感染。分別使用HCMV-PP65抗原檢驗(yàn)、化學(xué)發(fā)光法、FQ-RCR法對200例患兒進(jìn)行檢測。

1.2 設(shè)備與試劑 化學(xué)發(fā)光儀，熒光定量PCR儀，熒光顯微鏡。HCMV-PP65抗原檢驗(yàn)試劑盒，DNA提取試劑盒，化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，F(xiàn)Q-PCR檢驗(yàn)試劑盒。

1.3 樣本收集及檢測 在患兒監(jiān)護(hù)人知情同意前提下，收集受試者空腹靜脈血5.0ml進(jìn)行檢驗(yàn)，均分為2份。其中1份進(jìn)行3.0ml ED-TA-K2抗凝，開展PP65檢測。樣本收集完成后6h內(nèi)對PMNLs細(xì)胞進(jìn)行分離。另取1份2.0ml促凝，以3 000r/min 離心，分離血清和血漿。放置在4℃環(huán)境中保存。利用化學(xué)發(fā)光法完成檢測，留取被檢測者尿液開展FQ-PCR檢查，完善質(zhì)量控制，同批次樣本在24h內(nèi)完成相關(guān)檢查。

1.4 結(jié)果判定 FQ-PCR檢測陽性標(biāo)準(zhǔn)：HCMVDNA拷貝數(shù)量在1.00E+03以上。PP65抗原陽性檢測標(biāo)準(zhǔn)：2×105個(gè)多形核白細(xì)胞內(nèi)PP65抗原陽性細(xì)胞在3個(gè)以上?；瘜W(xué)發(fā)光法測定HCMV-IgM在15AU/ml以上為陽性。相關(guān)檢測陽性和陰性對照品均符合標(biāo)準(zhǔn)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料使用χ2檢驗(yàn)，一致性計(jì)算經(jīng)Kappa系數(shù)進(jìn)行表示。ROC曲線下面積計(jì)算經(jīng)在本軟件ROC繪圖功能得以實(shí)現(xiàn)，假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

化學(xué)發(fā)光法靈敏性較高，漏診率最低，PP65抗原檢測誤診率最低，特異性最高（P<0.05）。PP65抗原檢測的陽性似然比、陽性預(yù)測值、總符合率較高（P<0.05），Youden指數(shù)與化學(xué)發(fā)光法相似，比PCR高?；瘜W(xué)發(fā)光法的陰性預(yù)測值較高（P<0.05）。FQPCR、化學(xué)發(fā)光法和PP65抗原檢測3種方法ROC曲線下面積分別為0.677、0.696、0.744。3種檢測方式檢測小兒巨細(xì)胞病毒感染的靈敏性、特異性、漏診率以及誤診率情況見表1，陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值以及陽性似然比、陰性似然比、Youden指數(shù)和總符合率情況見表2，ROC曲線分析見圖1。

表1 不同方式檢測小兒巨細(xì)胞病毒感染的靈敏性、特異性、漏診率及誤診率比較（%）

表2 不同方式檢測陽性、陰性預(yù)測值及陽性、陰性似然比、Youden指數(shù)、總符合率情況

圖1 ROC 曲線分析不同方式對巨細(xì)胞病毒感染的診斷價(jià)值

3 討論

HCMV感染為引起小兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損、癲癇、腦癱、發(fā)育遲緩等疾病的主要因素，感染后病死率高達(dá)20.00%以上。當(dāng)前，WHO已經(jīng)將其認(rèn)定為危害小兒生命健康的疾病之一。敏感性強(qiáng)、特異性高、重復(fù)率佳的早期診斷方式及針對性治療，為診治HCMV感染的關(guān)鍵所在[2]。

PP65抗原在HCMV活動性感染中呈高表達(dá)，且在病毒血癥前8d及臨床癥狀出現(xiàn)前2周呈現(xiàn)為陽性，其和PCR法檢測出的HCMV-DNA時(shí)間更早。血液內(nèi)出現(xiàn)的PP65抗原陽性白細(xì)胞，可判定為抗原血癥陽性，結(jié)合相關(guān)臨床診斷，可判定為HCMV感染。本研究中，和其他兩種方式相比，PP65的陽性似然比、陽性預(yù)測值、總符合率較高（P<0.05），Youden指數(shù)和化學(xué)發(fā)光法相似，比FQ-PCR高，誤診率較低，ROC曲線下面積最大，證實(shí)PP65抗原檢測為診斷HCMV感染的良好方式。HCMV-IgM抗體為抗原經(jīng)刺激后較早出現(xiàn)的抗體種類，血清內(nèi)如果出現(xiàn)HCMV特異性IgM抗體，證實(shí)在近期內(nèi)存在活動性感染。化學(xué)發(fā)光法較為簡單，可實(shí)現(xiàn)自動化操作[3]，其為當(dāng)前常用的檢測IgM抗體方式。本研究中化學(xué)發(fā)光法的靈敏性較高，漏診率最低。但因?yàn)樾旱拿庖呦到y(tǒng)尚未發(fā)育完善，因而對于IgM抗體評價(jià)過程中，應(yīng)注意假陰性結(jié)果。因?yàn)榛颊邫C(jī)體內(nèi)高水平IgG及類風(fēng)濕性因子等干擾，實(shí)驗(yàn)結(jié)果會出現(xiàn)假陽性，這與本研究中化學(xué)發(fā)光法誤診率最高相符合。

FQ-PCR為當(dāng)前臨床應(yīng)用較多的定量PCR方式[4]。因病毒DNA的出現(xiàn)通常比細(xì)胞病毒感染的臨床癥狀或者血清學(xué)反應(yīng)早，使用此法開展HCMV感染DNA檢測，對于抗HCMV治療和預(yù)防有著一定意義[5，6]。HCMV具有噬上皮特點(diǎn)，其容易在腎臟細(xì)胞內(nèi)感染，檢查尿液內(nèi)的HCMV-DNA就陽性檢出率來講，比血液標(biāo)本高[7]。本研究中，此法除陰性似然比及漏診率和化學(xué)發(fā)光法存在差異外，其余指標(biāo)相近。但使用此法檢測出的HCMV-DNA片段，僅能證實(shí)存在HCMV感染，無法區(qū)分其感染性質(zhì)，這一點(diǎn)和本研究中FQ-PCR誤診率高有一致性。

綜上所述，3種HCMV感染檢測方式各有優(yōu)勢，也存在一定不足。但與其他兩種方式相比，PP65抗原陽性細(xì)胞能全面反映HCMV數(shù)量情況，可被用于檢測早期活動性HCMV感染及治療效果觀察，其特異性強(qiáng)、操作簡單，值得進(jìn)一步推廣使用。

1 袁浩，唐曾，周毅峰.巨細(xì)胞病毒的3種檢測方法在診斷小兒巨細(xì)胞病毒感染中的評價(jià)[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，41（14）：2607-2610

2 陳鯤，胡洪波，彭巧英.UL37x3檢測在新生兒晚期黃疸巨細(xì)胞病毒感染診斷中的應(yīng)用 [J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2015，15（2）：204-206

3 謝棟棟，林政，施浩強(qiáng)，等.HCMVpp65抗原血癥和UL83基因檢測對腎移植術(shù)后HCMV感染的診斷價(jià)值[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，46（9）：950-952

4 劉小寧，衡春，李元媛，等.60例小兒巨細(xì)胞病毒感染的血液學(xué)檢測分析 [J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（4）：733-734

5 裴蘊(yùn)鋒.小兒巨細(xì)胞病毒感染狀況分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10（8）：980-981

6 嚴(yán)達(dá)尊，吳起武.嬰幼兒人巨細(xì)胞病毒感染合并反應(yīng)性血小板增多癥 36例 [J].廣東醫(yī)學(xué)， 2014，35（3）：428-429

7 鐘峰，趙俊，張業(yè)婷，等.定量檢測HCMVpp67mRNA快速診斷人巨細(xì)胞病毒活動性感染[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，51（3）：324-328