青柏潰結湯對潰瘍性結腸炎大鼠結腸黏膜SOD及MDA影響的研究*

張 林 張 偉 解嵐嵐 張鋒利 史 英 吳潔瓊

（1.陜西中醫(yī)藥大學，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，陜西 咸陽712000）

潰瘍性結腸炎（UC）是一種病因尚未明確的發(fā)生在結腸、直腸的慢性非特異性疾病，目前大多學者認為UC的炎癥反應與氧自由基密切關系，UC炎癥反應的重要因素很有可能是氧自由基。筆者所在醫(yī)院院內(nèi)中藥方青柏潰結湯（原潰結Ⅰ號方）通過灌腸方式作用于UC患者取得了不錯的療效。本實驗擬在造模成功的基礎上，通過治療UC大鼠檢測各組結腸組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量，觀察青柏潰結湯治療UC大鼠的治療效果，并探討其可能的機制，為進一步推廣應用青柏潰結湯提供一定的實驗基礎?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康雄性SD大鼠55只，體質(zhì)量（200±20） g，生產(chǎn)許可證號：SCXK（陜） 2012-003。購于西安交通大學醫(yī)學部實驗動物中心。

1.2 實驗藥物 青柏潰結湯（藥物組成：黃柏9 g，苦參 20 g，大青葉 12 g，板蘭根 20 g，烏賊骨 25 g，炒薏苡仁30 g。所得水煎液每毫升含1 g生藥，由陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院藥劑科熬制完成），康復新液（湖南科倫制藥有限公司，批號：M160918），柳氮磺吡啶（上海信誼天平藥業(yè)有限公司）。

1.3 試劑與儀器 水合氯醛（上海山浦化工有限公司產(chǎn)品），溶于0.9%氯化鈉注射液配成10%的混合液；冰乙酸（天津市天力化學試劑有限公司產(chǎn)品），溶于0.9%氯化鈉注射液配成8%的混合液；MDA試劑盒（北京邦定生物公司產(chǎn)品）；SOD試劑盒（南京聚力生物醫(yī)學工程研究所產(chǎn)品）。UV-1601分光光度儀（日本島津公司產(chǎn)品）。

1.4 模型制備 大鼠禁食不禁水24 h后用10%水合氯醛根據(jù)3 mL/kg腹腔注射麻醉，8%乙酸1 mL注入距肛門7 cm的結腸腔，灌注30 s，隨后用0.9%氯化鈉注射液5mL沖洗1次，之后常規(guī)飼養(yǎng)。

1.5 分組與給藥 將健康雄性SD大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，按體質(zhì)量隨機分為5組，即空白組（等體積0.9%氯化鈉注射液）、模型組（等體積0.9%氯化鈉注射液）、青柏潰結湯組（1 mg/L）、柳氮磺吡啶組（0.5 g/kg）、康復新液組（5 mL/kg），除空白組以外，其余各組按上述方法制備UC模型，造模后第3日每組（除外空白組）隨機取2只做病理學檢查以確定造模成功，而后開始灌腸給藥，每日1次，連續(xù)7 d。

1.6 標本采集與檢測 1）病理學檢查。取出距肛門2 cm以上8 cm處的結腸段，縱向剪開腸腔，預冷0.9%氯化鈉注射液反復沖洗直至干凈，取約0.5 cm病變嚴重處固定于4%甲醛中，行HE染色，顯微鏡下觀察結腸組織；另取濕重約200mg結腸組織，制成10%的組織勻漿，4000 r/min離心10min，取上清液待檢。2）結腸組織SOD與MDA檢測。取上述已制備的上清液分別按照SOD與MDA試劑盒說明書檢測。

1.7 統(tǒng)計學處理 應用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以（±s）表示，采用單因素方差分析。P＜0.05時為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組一般情況 見圖1?？瞻捉M大鼠食欲、精神可，大便成形，無便血及大便帶血，毛發(fā)光澤，活動自如。模型組大鼠喜蜷縮，食欲、精神欠佳，可見肉眼血便，肛周不潔，毛發(fā)粗糙。各治療組介于兩組之間，以青柏潰結湯組情況最好，康復新液組最差，柳氮磺吡啶組居中。

圖1 兩組一般情況

2.2 病理觀察結果 見圖2?？瞻捉M腸黏膜完整，腺體排列齊整，無明顯炎性細胞浸潤；模型組腸黏膜不完整，腺體缺如或者排列不齊，潰瘍形成，局部水腫及充血甚至壞死、脫落，炎性細胞浸潤明顯；各治療組介于上述兩組之間，以青柏潰結湯組效果最好，康復新液組不明顯，柳氮磺吡啶組居中，可見愈合跡象，以青柏潰結湯組愈合最好，康復新液組不明顯，柳氮磺吡啶組居中。

圖2 各組大鼠治療后結腸病理學結果（HE染色）

2.3 各組大鼠結腸組織中SOD、MDA含量比較 見表1。與空白組比較，模型組SOD含量下降（P＜0.01），MDA含量上升（P＜0.01）；與柳氮磺吡啶組比較，青柏潰結湯組MDA含量含量下降（P＜0.01）；與康復新液組比較，SOD 含量上升（P＜0.05），MDA 含量下降（P＜0.05）。

表1 各組大鼠治療后結腸黏膜SOD、MDA含量比較（±s）

表1 各組大鼠治療后結腸黏膜SOD、MDA含量比較（±s）

與空白組比較，▽P＜0.05，▽▽P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與柳氮磺吡啶組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與康復新液組比較，#P＜0.05，##P＜0.01。

組 別 n SOD（U/g） MDA（nmol/g）空白組 11 98.13±30.50 6.27±4.59模型組 9 66.38±13.94▽▽△△ 42.24±5.15▽▽青柏潰結湯組 9 96.09±22.25**## 10.88±1.10**△△##柳氮磺吡啶組 9 96.73±27.41*# 26.73±4.79**康復新液組 9 70.41±18.30▽△△ 40.79±6.92△△##

3 討 論

用乙酸法誘導大鼠UC，是研究UC致炎機理的常用模型之一，其機制與激活炎癥介質(zhì)（激肽等）、增強血管通透性有關，近年來關于UC發(fā)病機理，氧自由基已成為重要課題，氧自由基（OFR）主要包括羥自由基（OH-）和超氧陰離子自由基（O2-）等，是一類含有不配對電子的含氧基團，具有促進水腫和炎性滲出等作用，但是其對作用的靶細胞不具有選擇特異性，因此氧自由基也能導致細胞和組織的損傷。為了防止其損傷細胞和組織，體內(nèi)存在著一整套完善的可清除氧自由基的防御系統(tǒng)，如超氧化物歧化酶（SOD）等。

Simmonds等發(fā)現(xiàn)UC（活動期）腸黏膜中有大量OFR［1]。由于OFR在臨床上直接測定十分困難，目前多采用檢測呼氣乙烷的濃度及MDA來間接反映UC腸黏膜OFR的水平。研究顯示，機體清除氧自由基能力的下降同時也是導致潰瘍形成和自身組織損傷的重要因素，氧自由基水平升高，會加強激活炎癥介質(zhì)，從而促進炎癥反應［2]。

SOD是廣泛存在于生物體內(nèi)且重要的抗氧化酶，能有效清除氧自由基，能抑制結腸組織中的脂質(zhì)過氧化反應，SOD含量的高低可間接反應機體清除氧自由基的能力，張麗華等發(fā)現(xiàn)模型組大鼠SOD活性明顯低于空白對照組［3]，目前SOD已被證明是治療UC的有效藥物之一［4]。MDA可由脂質(zhì)過氧化物分解產(chǎn)生等，可進一步加重機體組織損害［5]。測定組織MDA的含量，可反映組織生物膜脂質(zhì)過氧化的程度和氧自由基的生成量［6]。MDA是氧自由基是脂質(zhì)過氧化反應的產(chǎn)物［7]，MDA水平、氧自由基水平與機體組織損傷正相關。有研究表明在排除其他器官病變的情況下［8]，健康對照組血清MDA水平明顯低于UC患者。

臨床上治療UC一般予以西藥對癥治療，病情容易反復，且不良反應多［9]，中藥在其治療上既避免了西藥的不足，又有較好療效，近年來，自擬方治療UC顯現(xiàn)出不錯的療效，何繼剛等用自擬中藥方灌腸治療本病，有效率91.67%［10]；秦書香等用青熱澀腸、活血生肌中藥灌腸治療本病可降低復發(fā)率［11]；李琪等采用灌腸方灌腸治愈率為95.83%［12]。UC是一種主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便伴或者不伴有里急后重的一種慢性非特異性疾病［13]，中醫(yī)認為濕熱蘊腸、氣滯絡瘀是基本病機［14]。本院自擬青柏潰結湯（原名潰結Ⅰ號方）灌腸治療UC患者臨床效果確切，組方中的大青葉、板藍根清除疫毒之邪；黃柏、苦參清除內(nèi)蘊臟腑濕熱；炒薏苡仁清除腸道腐敗膿血；烏賊骨制酸止痛止血［15]。

通過本研究結果可看出，UC大鼠與空白組比較，結腸黏膜中的SOD含量下降、MDA含量上升，SOD含量降低說明機體清除氧自由基的能力下降，MDA含量升高說明自由基產(chǎn)生增加或有氧代謝增強，表明在UC發(fā)病時氧化代謝存在著失衡。各治療組經(jīng)過對應藥物治療后，SOD含量上升，MDA含量降低，說明已恢復清除能力，同時說明UC局部炎癥反應和異常的氧自由基代謝密切相關，提示青柏潰結湯治療UC很有可能是通過調(diào)節(jié)氧自由基水平來實現(xiàn)的。

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