CTRP1在急性缺血性腦卒中患者中的表達(dá)及其對(duì)晚期神經(jīng)功能缺損嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)

李素萍 謝彥 許飛 梁益 何保明 孫紅斌

四川省醫(yī)院科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（成都 610073）

《中國心血管病報(bào)告2017》概要指出迄今我國心血管病患病人數(shù)達(dá)2.9億，其中腦卒中1 300萬人次，且每年約新增200萬人次［1］。一項(xiàng)關(guān)于我國卒中疾病負(fù)擔(dān)的橫斷面研究顯示2013年我國大陸腦卒中發(fā)病率、患病率、病死率分別為246.8/10萬、1 114.8/10萬、114.8/10萬，其中農(nóng)村居民發(fā)病率（298.2/10萬）顯著高于城市居民（203.6/10萬）。而急性缺血性腦卒中（acute ischemic stroke，AIS）是卒中的主要類型，約占60%～80%，據(jù)統(tǒng)計(jì)本病再次出現(xiàn)卒中的風(fēng)險(xiǎn)是普通人的10倍［2-3］，5年累計(jì)復(fù)發(fā)率超過30%。研究證實(shí)炎癥反應(yīng)參與腦卒中的發(fā)生發(fā)展過程，并且與疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后具有相關(guān)性。補(bǔ)體C1q腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白（C1q tumor necrosis factor related protein，CTRP1）是近年來新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，參與機(jī)體炎癥、血栓及氧化過程［4］。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)CTRP1可降低血糖、增加胰島素敏感性、調(diào)節(jié)血脂、對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化［5］。目前血清CTRP1在冠心病領(lǐng)域研究較多，尚缺乏CTRP1與AIS神經(jīng)功能損傷嚴(yán)重程度和預(yù)后的相關(guān)性研究。本課題旨在探討CTRP1與AIS患者中的表達(dá)及其對(duì)晚期神經(jīng)功能缺損嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值。為早期識(shí)別AIS患者潛在風(fēng)險(xiǎn)提供新的依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象本研究連續(xù)性納入2014年2月至2017年2月由我院急診收入接受治療的首發(fā)AIS患者425例作為研究對(duì)象，進(jìn)行前瞻性研究。選取同期在我院健康體檢成人403例作為對(duì)照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）參照《中國急性缺血性腦卒中診治指南2010》，明確診斷首次發(fā)生AIS患者［6］；（2）發(fā)病2周以內(nèi)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）已接受溶栓治療患者；（2）凝血功能障礙、嚴(yán)重肝腎功能障礙、腫瘤、血液病患者；（3）合并腦出血患者；（4）免疫系統(tǒng)疾病患者；（5）年齡≤35歲。

1.2 方法

1.2.1 一般資料及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)檢測(cè)完善所有對(duì)象的一般臨床資料，記錄包括性別、年齡、個(gè)人史、既往病史等。研究對(duì)象空腹采集靜脈血，采用全自動(dòng)生化儀對(duì)超敏C反應(yīng)蛋白（hypersensitivity C reactive protein，Hs-CRP）、總膽固醇（cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）進(jìn)行檢測(cè)。

所有對(duì)象血液凝固后進(jìn)行高速離心，溫度設(shè)置為4℃，轉(zhuǎn)速3 500 r/min離心10 min提取上清液置入EP管中，保存于-80℃冰箱內(nèi)。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）對(duì)血清CTRP1水平進(jìn)行檢測(cè)。試劑盒由AVISCERA BIOSCIENCE公司提供，所有步驟嚴(yán)格按說明書操作。

1.2.2 隨訪對(duì)研究對(duì)象出院后分別于1、3、6個(gè)月進(jìn)行門診隨訪，如未按時(shí)就診，則采用電話隨訪。對(duì)出院后6個(gè)月患者采用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表（National Institute of Health Stroke Scale，NIHSS）進(jìn)行評(píng)估，根據(jù)分值進(jìn)行分組。1～4分為輕微中風(fēng)，5～20分為中度中風(fēng)，＞20分為重度中風(fēng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；3組及3組以上的比較采用方差分析（正態(tài)分布）和秩和檢驗(yàn)（非正態(tài)分布）。計(jì)數(shù)資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)分析法分析CTRP1的相關(guān)因素；采用多元線性回歸分析出院后6個(gè)月神經(jīng)功能缺損程度獨(dú)立影響因素。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4組基線情況比較AIS患者糖尿病、頸動(dòng)脈粥樣硬化、Hs-CRP、TC、TG、CTRP1水平均高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）；對(duì)照組血清HDL-C水平高于AIS患者，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；其余指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 對(duì)照組和AIS組患者基線情況比較Tab.1 Comparison of baseline cases between the control group and the AIS group ±s

表1 對(duì)照組和AIS組患者基線情況比較Tab.1 Comparison of baseline cases between the control group and the AIS group ±s

項(xiàng)目χ2/t值P值男性［例（%）］年齡（歲）BMI（kg/m2）吸煙［例（%）］糖尿病［例（%）］高血壓?。劾?）］頸動(dòng)脈粥樣硬化［例（%）］Hs-CRP（mg/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）LDL-C（mmol/L）HDL-C（mmol/L）CTRP1（ng/mL）對(duì)照組（n=403）211（52.4）64.78±12.93 23.5±3.1 123（30.5）125（31.0）142（35.2）114（28.3）0.45±0.21 3.97±0.62 1.81±0.52 2.92±0.87 1.45±0.42 149.29±20.96 AIS組（n=452）270（59.7）65.34±4.57 24.7±2.9 137（30.3）196（43.4）188（41.6）174（38.5）0.67±0.27 4.74±1.13 2.21±0.46 3.15±0.91 1.34±0.36 157.37±23.26 3.395 0.862 5.846 0.004 13.848 3.633 9.938 13.180 9.780 11.93 3.766 4.123 5.311 0.065 0.389 0.168 0.947＜0.001 0.057 0.002＜0.001＜0.001 0.011 4 0.355 8 0.001 5 0.032 6

2.2 不同亞型腦卒中患者CTRP1表達(dá)水平對(duì)照組［（119.53± 17.62）ng/mL，n=403］、不明原因及其他原因型腦卒中［（145.81±18.96）ng/mL，n=196］、大動(dòng)脈粥樣硬化型腦卒中［（153.17±19.21）ng/mL，n=76］、心源型腦卒中［（156.56±20.96）ng/mL，n=43］和小動(dòng)脈閉塞型腦卒中［（169.23± 22.34）ng/mL，n=137］的CTRP1表達(dá)水平逐漸升高，并且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=216.9，P＜0.001）。

2.3 不同神經(jīng)功能缺損患者血清CTRP1水平比較對(duì)照組［（119.53±17.62）ng/mL］、神經(jīng)功能缺損輕度組［（156.29±19.86）ng/mL］、中度組［（168.74±18.53）ng/mL］和重度組［（175.96±19.15）ng/mL］患者血清CTRP1水平逐漸上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。

2.4 CTRP1相關(guān)性分析患者血清CTRP1與Hs-CRP、LDL-C呈正相關(guān)，與NIHSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，與BMI、TC、TG、HDL-C無明顯的相關(guān)性。見表2。

表2 血清CTRP1水平的相關(guān)性分析Tab.2 Correlation analysis of serum CTRP1 level in patients with AIS

2.5 AIS患者NIHSS評(píng)分的影響因素經(jīng)多因素線性回歸分析顯示，CTRP1、年齡、糖尿病、Hs-CRP、LDL-C為NIHSS評(píng)分的獨(dú)立影響因素。見表3。

表3 多因素線性回歸分析AIS患者NIHSS評(píng)分的影響?yīng)毩⒁蛩豑ab.3 Multiple factor linear regression analysis of the influence of independent factors on NIHSS score in patients with AIS

3 討論

AIS是神經(jīng)內(nèi)科急危重癥，具有較高的死亡率、復(fù)發(fā)率，且短期內(nèi)常伴發(fā)多種并發(fā)癥［7］，據(jù)統(tǒng)計(jì)每年全球約600萬人死于腦卒中［8］，幸存者中約75%患者遺留有不同程度的肢體功能障礙。雖然診療技術(shù)不斷提高，但由于腦組織對(duì)缺血缺氧異常敏感，且其在缺血缺氧狀態(tài)下代償能力較其他組織弱，血供中斷5 min便會(huì)出現(xiàn)不可逆的損傷，因此盡早對(duì)疾病預(yù)后進(jìn)行評(píng)估，對(duì)采用個(gè)體化治療的患者尤為重要。

研究發(fā)現(xiàn)，炎癥反應(yīng)是缺血事件發(fā)生和發(fā)展過程中重要的病理生理過程［9-10］。脂肪細(xì)胞作為重要的內(nèi)分泌器官，其分泌的脂聯(lián)素參與機(jī)體的物質(zhì)代謝及炎癥反應(yīng)［11］，具有抗炎、拮抗動(dòng)脈粥樣硬化、降低血糖等作用。CTRP1是新近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，其結(jié)構(gòu)與脂聯(lián)素相似，但兩者缺乏高度同源的核苷酸和氨基酸序列。CTRP1 mRNA在心臟、肝臟、腎臟、卵巢中均有表達(dá)，其在脂肪組織中表達(dá)最高。研究發(fā)現(xiàn)代謝紊亂、慢性炎癥等均是動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲除脂聯(lián)素基因的小鼠血漿CTRP1水平明顯高于空白對(duì)照組，且其血糖水平低于對(duì)照組［12］，并且CTRP1的過度表達(dá)可以提高肥胖老鼠胰島素的敏感性，同時(shí)重注射CTRP1組加強(qiáng)腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)從而增加脂肪酸氧化代謝［13］。CTRP1還通過P38分裂原激活蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中黏附分子及巨噬細(xì)胞表達(dá)，在腫瘤壞死因子α的刺激下誘發(fā)更為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。LU等［14］研究發(fā)現(xiàn)，apoE基因小鼠通過腹腔注射CTRP1可促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，而CTPR1/apoE小鼠其動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的范圍、嚴(yán)重程度及炎癥反應(yīng)均降低。CTRP1還可旁分泌和自分泌途徑促進(jìn)血管平滑肌增殖［11，15］以及 ERK1/2 通路的激活促進(jìn)血管壁鈣化［12，16］。目前尚無研究對(duì)CTRP1在腦卒中患者中的表達(dá)和神經(jīng)功能預(yù)后進(jìn)行研究。本研究中首次檢測(cè)CTRP1在不同類型腦卒中患者血漿中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)和動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)腦卒中的表達(dá)水平明顯低于其他類型腦卒中，說明CTRP1可能通過對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的作用參與腦卒中的發(fā)生發(fā)展，抑制動(dòng)脈粥樣硬化，抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)，從而實(shí)現(xiàn)腦保護(hù)。本研究中患者CTRP1和炎癥標(biāo)志物hs-CRP呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系，說明該標(biāo)志物可能在腦卒中患者中具有一定的抗炎作用，hs-CRP和腦卒中預(yù)后明顯相關(guān)［17］。患者病情越嚴(yán)重，可能消耗CTRP1越多，血漿中CTRP1含量越少。所以本研究中神經(jīng)功能缺損和CTRP1呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系。

本課題存在以下不足：（1）本研究為單中心小樣本研究，可能存在統(tǒng)計(jì)效能不足；（2）本研究患者隨訪時(shí)間較短，未對(duì)住院期間和出院后患者因?yàn)镮S的不良事件進(jìn)行具體統(tǒng)計(jì)；（3）本研究未對(duì)CTRP1時(shí)間動(dòng)力曲線進(jìn)行檢測(cè)，未探究CTRP1在腦卒中患者隨著病情進(jìn)展患者血漿中表達(dá)的變化；（4）本研究未檢測(cè)神經(jīng)功能缺損相關(guān)的特異性標(biāo)志物，無法探究CTRP1和該類標(biāo)志物間的相關(guān)性；（5）本研究對(duì)照組和AIS組的患者基線資料不匹配，AIS組患者具有更多的心腦血管危險(xiǎn)因素，可能造成對(duì)照組和AIS組患者CTRP之間差異更加顯著。

綜上所述，CTRP1水平與AIS患者晚期神經(jīng)功能缺損嚴(yán)重程度密切相關(guān)，患者血清CTRP1表達(dá)水平愈高，其神經(jīng)功能缺損愈嚴(yán)重?；蛟SCTRP1可以作為生物標(biāo)志物對(duì)AIS患者神經(jīng)功能嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估的有效指標(biāo)，與其他危險(xiǎn)因素共同參與評(píng)估AIS病變嚴(yán)重程度。并且有助于對(duì)疾病進(jìn)行早期篩查，及時(shí)采用個(gè)性化治療。

［1］陳偉偉，高潤(rùn)霖，劉力生，等.《中國心血管病報(bào)告2017》概要［J］.中國循環(huán)雜志，2018，33（1）：1-8.

［2］DEGUCHI I，HAYASHI T，F(xiàn)UKUOKA T，et al.Features of cardioembolic stroke with persistent and paroxysmal atrial fibrillation-a study with the Japan Stroke Registry［J］.Eur J Neurol，2015，22（8）：1215-1219.

［3］XU G L，LIU X F，WU W T，et al.Recurrence after ischemic stroke in chinese patients：impact of uncontrolled modifiable risk factors［J］.Cerebrovasc Dis，2007，23（2-3）：117-120.

［4］RODRIGUEZ S，LEI X，PETERSEN P S，et al.Loss of CTRP1 disrupts and lipid homeostasis［J］.Am J Physiol Endocrinol Metab，2016，311（4）：E678-E697.

［5］CHALUPOVA L，ZAKOVAKA A，ADAMOVA K.Development of a novel enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA）for measurement of serum CTRP1：A pilot study：Measurement of serum CTRP1 in healthy donors and patients with metabolic syndrome［J］.Clin Biochem，2013，46（1-2）：73-78.

［6］中華醫(yī)學(xué)會(huì)神經(jīng)病學(xué)分會(huì).中國急性缺血性腦卒中診治指南2014［J］.中華神經(jīng)科雜志，2015，48（4）：246-257.

［7］李瑞英，陳會(huì)生.急性缺血性腦卒中早期神經(jīng)功能惡化研究現(xiàn)狀及進(jìn)展［J］.臨床軍醫(yī)雜志，2017，45（2）：136-139.

［8］LYTTON W W，ARLE J，BOBASHEV G，et al.Multiscale modeling in the clinic：diseases of the brain and nervous system［J］.Brain Inform，2017，4（4）：219-230.

［9］莊雪芬，林貴德.早期大劑量阿托伐他汀對(duì)缺血性腦卒中患者血脂、hs-CRP的影響［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2015，22（5）：141-143.

［10］ZHANG J，F(xiàn)U B，ZHANG X，et al.Bicyclol upregulates transcription factor Nrf2，HO-1 expression and protects rat brains against focal ischemia［J］.Brain Res Bull，2014，100：38-43.

［11］童國相，劉慧霞.脂肪因子在代謝綜合征中的作用新進(jìn)展［J］.中國醫(yī)師雜志，2014（4）：562-565.

［12］WANG X Q，LIU Z H，XUE L，et al.C1q/TNF-related protein 1 links macrophage lipid metabolism to inflammation and atherosclerosis［J］.Atherosclerosis，2016，250：38-45.

［13］PETERSON J M，AJA S，WEI Z，et al.CTRP1 protein enhances fatty acid oxidation via AMP-activated protein kinase（AMPK）activation and acetyl-CoA carboxylase（ACC）inhibition［J］.J Biol Chem，2012，287（2）：1576-1587.

［14］LU L，ZHANG R Y，WANG X Q，et al.C1q/TNF-related peotein-1：an adipokine marking and promoting atherosclerosis［J］.Eur Heart J，2016，37（22）：1762-1771.

［15］YUASA D，OHASHI K，SHIBATA R，et al.C1q/TNF-related protein-1 functions to protect against acute ischemic injury in the heart.［J］.FASEB J，2016，30（3）：1065-1075.

［16］AKIYAMA H，F(xiàn)URUKAWA S，WAKISAKA S，et al.Cartducin stimulates mesenchymal chondroprogenitor cell proliferation through both extracellular signal-regulated kinase and phosphatidylinositol 3-kinase/Akt pathways［J］.FEBS J，2006，273（10）：2257-2263.

［17］鐘波，唐丙儉，柳霞.血漿超敏C-反應(yīng)蛋白與急性缺血性腦卒中臨床結(jié)局的相關(guān)性［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2017，33（7）：1050-1054.