綿羊多羔候選基因的研究及應(yīng)用進(jìn)展

田志龍 ，王玉琴 ，儲(chǔ)明星

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；2.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，洛陽 471003）

綿羊產(chǎn)羔數(shù)是一個(gè)極其復(fù)雜的性狀，受諸多因素的影響。截止目前，國內(nèi)外學(xué)者已對(duì)影響綿羊產(chǎn)羔數(shù)的眾多候選基因進(jìn)行了深入研究，包括但不限于：骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B（Bone morphogenetic protein receptor 1B，BMPR1B，F(xiàn)ecB）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白 15（Bone morphogenetic protein 15，BMP15，F(xiàn)ecX）、生長(zhǎng)分化因子 9基因（Growth differentiation factor-9，GDF9，F(xiàn)ecG）、糖基化酶β-1，4-N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶 2（Glycosylation enzyme beta-1，4-N-acetyl-galactosaminyltransferase 2，B4GALNT2，F(xiàn)ecL）、雌激素受體（Estrogen receptor，ESR）、孕酮受體（Progesterone receptor，PGR）等，這些基因在調(diào)控綿羊產(chǎn)羔性狀方面起到至關(guān)重要的作用［1］。目前全世界僅有少量綿羊品種產(chǎn)羔率能達(dá)200%，大多數(shù)綿羊都是季節(jié)性發(fā)情、單羔品種。同時(shí)綿羊產(chǎn)羔性狀的遺傳力較低（僅為0.1左右），常規(guī)的育種技術(shù)在短期內(nèi)很難改良此性狀。本文介紹了幾個(gè)影響綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀的重要基因的研究進(jìn)展，以期為進(jìn)一步提高綿羊產(chǎn)羔數(shù)進(jìn)而提高經(jīng)濟(jì)效益尋求有效途徑。

1 骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B基因（BMPRIB）

骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B位于綿羊第6號(hào)染色體，是骨形態(tài)發(fā)生蛋白的膜受體，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（Transforming growth factor-beta，TGF-β）超家族的成員，在動(dòng)物機(jī)體各組織中廣泛存在，但主要在卵巢卵母細(xì)胞和顆粒細(xì)胞中表達(dá)。綿羊BMPR1B基因cDNA全長(zhǎng)3 255 bp，由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，共編碼502 個(gè)氨基酸。1982 年，Davis等［2］對(duì)澳大利亞 Booroola羊進(jìn)行研究時(shí)發(fā)現(xiàn)了一個(gè)顯著影響綿羊排卵數(shù)和產(chǎn)羔數(shù)的基因突變，在1989年時(shí)正式命名為FecB基因。Souza等［3］研究表明，F(xiàn)ecB基因位于BMPR-1B基因上，是BMPR-1B基因編碼區(qū)第746位發(fā)生A-G的突變，引起第249位氨基酸由谷氨酰胺變?yōu)榫彼幔≦249R），最終導(dǎo)致綿羊排卵數(shù)增加。FecB基因是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的綿羊高繁殖力主效基因，與綿羊排卵數(shù)和產(chǎn)羔數(shù)的增加緊密相關(guān)［4］。一個(gè)FecB基因拷貝可以增加排卵數(shù)1.3～1.6枚，產(chǎn)羔數(shù)增加0.9～1.2只；兩個(gè)FecB基因拷貝可以增加排卵數(shù)2.73枚，產(chǎn)羔數(shù)增加1.1～1.7只［5］。繼布魯拉羊中發(fā)現(xiàn)FecB基因之后，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，在亞洲綿羊品種中FecB基因的分布較為廣泛。印度Kendrapada 綿羊［6］、Garole 綿羊和 Bonpala 綿羊［7］，印度尼西亞的 Javenese 羊［8］，伊朗的 Kalehkooh 綿羊［6］，中國的湖羊［9］和小尾寒羊［10］等綿羊品種均存在該基因。劉秋月等［11］對(duì)中國10個(gè)地方綿羊品種、3個(gè)培育品種綿羊的FecB基因頻率進(jìn)行了檢測(cè)，為多羔綿羊品種改良提供了參考數(shù)據(jù)。另外，其他學(xué)者發(fā)現(xiàn)灘羊［12］、洼地綿羊［13］、多浪羊［14］、策勒黑羊［15］、阿勒泰羊［16］、巴音布魯克羊［17］、魯西黑頭羊［11］等群體中均存在 FecB 基因。Chen 等［18］利用FecB基因效應(yīng)，使用小尾寒羊和杜泊羊進(jìn)行雜交培育多羔新品系，雜交后代平均產(chǎn)羔數(shù)顯著高于杜泊羊（P＜0.05）。Zhang等［19］使用 CRISPR/Cas9 技術(shù)對(duì)綿羊胚胎進(jìn)行體外處理，為綿羊BMPR-IB基因編碼建立了技術(shù)基礎(chǔ)。

2 骨形態(tài)發(fā)生蛋白15基因（BMP15）

骨形態(tài)發(fā)生蛋白15同屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族成員，通過卵母細(xì)胞旁分泌途徑調(diào)節(jié)卵泡發(fā)育［20］。綿羊BMP15基因位于X染色體上，cDNA序列全長(zhǎng)1 182 bp，由兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子組成，共編碼393個(gè)氨基酸，有25個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽、244個(gè)氨基酸前導(dǎo)肽和125個(gè)氨基酸的成熟肽［20］。近些年來，BMP15基因突變位點(diǎn)被不斷地挖掘，綿羊 BMP15 基因突變（FecXI［21］、FecXH［21］、FecXG［22］、FecXB［23］和 FecXL［23］）和 序 列 缺 失FecXR［24-25］中任意一個(gè)突變雜合的母羊都具有較高的排卵數(shù)，而突變純合母羊則由于卵泡發(fā)育受阻而不育。

Galloway 等［21］研究發(fā)現(xiàn)，Inverdale 綿羊 BMP15 基因FecXI點(diǎn)突變和Hanna綿羊BMP15基因FecXH點(diǎn)突變；FecXI突變是BMP15基因編碼區(qū)第92核苷酸處發(fā)生T→A顛換，使蛋白質(zhì)高保守區(qū)纈氨酸變成天冬氨酸（V31D）；FecXH突變是BMP15基因編碼區(qū)67核苷酸處發(fā)生C→T轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致第23號(hào)氨基酸殘基由谷氨酸變成終止密碼子（Q23Ter）。Hanrahan 等［22］在 Belclare綿羊和Cambridge綿羊BMP15基因編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)了FecXG點(diǎn)突變，在Belclare綿羊BMP15基因編碼區(qū)發(fā)現(xiàn)了FecXB點(diǎn)突變；FecXG突變又稱B2突變，是BMP15基因編碼區(qū)第2外顯子718核苷酸處發(fā)生C→T轉(zhuǎn)換，使肽鏈編碼區(qū)239位氨基酸由谷氨酰胺變成了終止密碼子（Q239Ter）；FecXB突變又稱B4突變，是BMP15基因編碼區(qū)第2外顯子1 100核苷酸處發(fā)生的G→T顛換，使成熟肽鏈99位氨基酸由絲氨酸變成了異亮氨酸（S99I）。Bodin 等［23］發(fā)現(xiàn)了 Lacaune 綿羊 BMP15 基因的FecXL點(diǎn)突變，該突變是BMP15基因編碼區(qū)第2外顯子第321核苷酸處發(fā)生的G→A轉(zhuǎn)換，使成熟肽鏈的第53位氨基酸由半胱氨酸變成了酪氨酸（C53Y）。FecXL基因突變雜合子排卵數(shù)比野生型增加了1.34個(gè)，突變純合個(gè)體則不育。2008 年，Monteagudo 等［24］和 Martinez-Royo等［25］幾乎同時(shí)發(fā)現(xiàn)了BMP15基因與繁殖力相關(guān)的第6個(gè)突變FecXR，即西班牙Rasa Aragonesa綿羊BMP15基因第2外顯子第525～541位缺失17個(gè)核苷酸，該突變導(dǎo)致終止密碼子提前出現(xiàn)和成熟肽丟失，使第2外顯子完全喪失功能；突變雜合子母羊具有高繁殖力，產(chǎn)羔數(shù)為2.66只/胎，而野生型Rasa Aragonesa綿羊平均產(chǎn)羔數(shù)為1.36只/胎，突變純合子母羊由于卵巢沒有初級(jí)卵泡而導(dǎo)致完全不育。Demars等［26］以不同繁殖力的法國Grivette綿羊和波蘭Olkuska綿羊群體為研究材料，采用全基因組關(guān)聯(lián)分析，分別在兩群體中鑒別出了BMP15基因的FecXGr和FecXO突變。FecXGr是法國Grivette綿羊BMP15基因編碼序列第950位發(fā)生C→G，F(xiàn)ecXO是波蘭Olkuska綿羊BMP15基因編碼序列第1 009位發(fā)生A→C突變。兩個(gè)突變位點(diǎn)分別導(dǎo)致綿羊BMP15氨基酸序列第317位的蘇氨酸轉(zhuǎn)變?yōu)楫惲涟彼幔═317I）和第337位的天冬酰胺轉(zhuǎn)變?yōu)榻M氨酸（N337H）。在法國Grivette綿羊群體中，F(xiàn)ecXGr突變純合體平均窩產(chǎn)羔數(shù)為2.50只±0.65只，顯著高于雜合體的平均窩產(chǎn)羔數(shù)1.93只±0.42只和野生型個(gè)體的平均窩產(chǎn)羔數(shù)1.83只±0.41只（P＜0.05）；而雜合體與野生型個(gè)體的平均窩產(chǎn)羔數(shù)差異不顯著（P＞0.05）。波蘭Olkuska綿羊群體中，F(xiàn)ecXO突變純合體的排卵數(shù)為3.28枚±0.85枚，顯著高于雜合體的排卵數(shù)2.02枚±0.47枚和野生型個(gè)體的排卵數(shù) 1.52枚±0.26枚（P＜0.05）；而雜合體與野生型個(gè)體排卵數(shù)差異不顯著（P ＞0.05）。Zamani等［20］使用 PCRSSCP技術(shù)和DNA測(cè)序方法發(fā)現(xiàn)了影響Mehraban和Lori綿羊產(chǎn)羔數(shù)的BMP15基因G→A新突變，該突變位于BMP15基因第2外顯子上，突變雜合母羊產(chǎn)羔數(shù)顯著高于野生純合母羊。董新龍等［27］通過PCR-SSCP技術(shù)和DNA測(cè)序發(fā)現(xiàn)，在小尾寒羊、湖羊等16個(gè)綿羊品種中不存在BMP15基因FecXGr和FecXO以及G→A突變位點(diǎn)。Lassoued 等［28］通過 DNA 測(cè)序，在 Tunisian Barbarine綿羊發(fā)現(xiàn)一種BMP15基因新的復(fù)合型突變并命名為FecXBar，該復(fù)合突變是Tunisian Barbarin綿羊編碼序列第301位發(fā)生G→T突變，第302位和304位發(fā)生堿基缺失（302-304delCTA），第 310位發(fā)生堿基插入（310insC），導(dǎo)致氨基酸第101處發(fā)生移碼突變，該突變雜合個(gè)體有較高的產(chǎn)羔數(shù)，突變純合個(gè)體由于卵泡發(fā)育受阻而發(fā)生不育現(xiàn)象。

3 生長(zhǎng)分化因子9基因（GDF9）

生長(zhǎng)分化因子9屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β超家族成員。GDF9是卵泡生長(zhǎng)過程中所必需的細(xì)胞因子，主要在卵巢卵母細(xì)胞表達(dá)［29］。綿羊GDF9基因位于5號(hào)染色體，由2個(gè)外顯子和1個(gè)內(nèi)含子組成，編碼453個(gè)氨基酸。Juengel等［30］發(fā)現(xiàn)GDF9對(duì)綿羊正常卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育是必需的。GDF9基因缺陷型母羊卵母細(xì)胞可發(fā)育，但停止在初級(jí)卵泡階段，并且卵泡周圍的顆粒細(xì)胞異常表達(dá)［31］。

Hanrahan等［22］在Belclare綿羊和Cambridge綿羊GDF9基因第2外顯子上發(fā)現(xiàn)8個(gè)單核苷酸多態(tài)（G1～G8）。其中有3個(gè)核苷酸改變但氨基酸沒有發(fā)生變化，分別是位于編碼區(qū)471 bp處的C→T（G2突變）、477 bp處的G→A（G3突變）和978 bp處A→G（G5突變）；4個(gè)G→A突變引起了氨基酸的變化，分別是位于編碼區(qū)260 bp處的突變導(dǎo)致第87位由Arg變?yōu)镠is（G1突變），721 bp處的突變導(dǎo)致第241位由Glu變?yōu)長(zhǎng)ys（G4突變），994 bp處的突變導(dǎo)致第332位由Val變?yōu)镮le（G6突變），1 111 bp處的突變導(dǎo)致第371位由Val變?yōu)镸e（tG7突變）；另外1 184 bp處的C→T堿基突變導(dǎo)致第395位由Ser變?yōu)镻he（FecGH或G8突變）。FecGH突變純合子Cambridge綿羊和Belclare綿羊是不育的，但雜合子的排卵數(shù)比野生型多。McNatty等［32］認(rèn)為這是因?yàn)镕ecGH突變破壞了GDF9蛋白與TGF-β受體1的結(jié)合。Melo 等［33］在巴西 Santa Ines（SI）綿羊 GDF9 基因上發(fā)現(xiàn)FecGSI突變，該突變是GDF9基因編碼區(qū)第2外顯子1 034 bp處T→G突變，導(dǎo)致GDF9成熟肽第345位由Phe改變?yōu)镃ys（F345C）。FecGSI突變純合子SI綿羊黃體數(shù)高于雜合子和野生型，但是雜合子和野生型之間無顯著差異。Nicol等［34］發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ecI（FecTT）是由于冰島Thoka綿羊GDF9基因第2外顯子編碼區(qū)1 279位發(fā)生A→C突變（A1279C），導(dǎo)致編碼GDF9蛋白第109位絲氨酸改變?yōu)榫彼幔⊿109R），使得突變純合子母羊不育，雜合子母羊產(chǎn)羔數(shù)比野生型多。Silva等［35］在多羔巴西SI綿羊上同樣發(fā)現(xiàn)了該突變，命名為FecGE（Embrapa）。該突變純合子母羊可育，純合子母羊排卵數(shù)比雜合子和野生型增加 82%。Juengel等［36］報(bào)道，Thoka突變雜合子綿羊排卵數(shù)和產(chǎn)羔數(shù)增加，突變純合子不育。Mullen 等［37］研 究 認(rèn) 為 ，Belclare 和 Cambridge 綿 羊 中FecGH突變可能來源于Lleyn綿羊。Vage等［38］發(fā)現(xiàn)，在挪威白綿羊中G7突變與產(chǎn)羔數(shù)之間的相關(guān)性很強(qiáng)。Mullen 等［39］發(fā)現(xiàn)，GDF9 基因 G7（FecGF）突變與芬蘭綿羊排卵數(shù)之間沒有顯著關(guān)聯(lián)，但Belclare綿羊排卵數(shù)和G7 突變之間極顯著相關(guān)（P＜0.01）。Souza等［40］在 Ile de France綿羊GDF9基因編碼區(qū)檢測(cè)到943 bp處發(fā)生C→T突變（FecGV），并導(dǎo)致GDF9蛋白第315位氨基酸由精氨酸變?yōu)榘腚装彼?。FecGV突變雜合子排卵數(shù)比野生型增加0.86個(gè)；產(chǎn)羔數(shù)比野生型增加0.32只，突變純合子母羊由于子宮和卵巢發(fā)育不全而不育。左北瑤等［41］在德國肉用美利奴羊中并未檢測(cè)到G8和FecTT突變，但是檢測(cè)到G1突變。金慧慧等［42］在我國高繁殖力綿羊品種小尾寒羊和湖羊中均未檢測(cè)到G7突變。雷夢(mèng)媛等［43］在湖羊、小尾寒羊等綿羊品種中均未檢測(cè)到FecGE突變。潘章源等［29］在小尾寒羊、策勒黑羊等綿羊品種上的研究發(fā)現(xiàn)，11 個(gè)綿羊品種均不含 FecGE、FecGH、FecGT、FecGF、FecGV突變，除草原型藏羊外，其余綿羊品種均有G1突變。GDF9基因G1突變可能與我國地方綿羊品種多羔性狀存在一定關(guān)系，但具體效應(yīng)需要進(jìn)一步研究。

4 糖基化酶β-1，4-N-乙酰半乳糖胺轉(zhuǎn)移酶2（B4GALNT2）

BMPR1B、BMP15和GDF9基因都屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 B（Transforming growth factor β，TGF-β）超家族。而最近鑒定出的FecL基因是唯一一個(gè)不屬于這個(gè)家族的多羔主效基因。FecL基因最初被命名為L(zhǎng)acaune，Lacaune對(duì)排卵數(shù)的增加與BMPR-IB基因相似，有增強(qiáng)效應(yīng)，雜合子增加排卵1.0個(gè)，純合子增加排卵2.0個(gè)，Lacaune的突變體被命名為FecL，突變位點(diǎn)被命名為FecLL。Bodin等［44］通過選育構(gòu)建Lacaune綿羊家系，為多羔主效基因定位打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，2002年，通過基因組掃描將FecLL定位在11號(hào)常染色體上。2009年Drouilhet等［45］將 FecLL定位于 BM17132和 DLX3約 1.1Mb的區(qū)間內(nèi)。2013年Drouilhet等利用高通量測(cè)序結(jié)合生物

信息學(xué)確定FecL基因?yàn)椋篏lycosylation Enzyme Beta-1，4-N-Acetyl-Galactosaminyltransferase 2（B4GALNT2），其中 g.36938224T＞A和 g.37034573A＞G兩個(gè)標(biāo)記與FecLL位點(diǎn)完全連鎖。這兩個(gè)SNP都位于B4GALNT2基因的內(nèi)含子中，可能的機(jī)制是突變導(dǎo)致了B4GALNT2基因在卵泡中的異位表達(dá)，同時(shí)發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)第803位存在A→G突變，B4GALNT2蛋白在顆粒細(xì)胞中的高表達(dá)會(huì)使卵泡中特定靶蛋白的糖基化狀態(tài)改變，進(jìn)而引起了排卵數(shù)的改變［46-47］。這一發(fā)現(xiàn)揭開了除TGF-β信號(hào)通路之外調(diào)控綿羊排卵數(shù)的全新機(jī)制。

5 候選基因協(xié)同作用

5.1 BMPR-IB和BMP15基因?qū)d羊繁殖性能的協(xié)同效應(yīng)

骨形態(tài)發(fā)生蛋白（Bone morphogenetic proteins，BMPs）屬于TGF-β超家族成員，在動(dòng)物機(jī)體中廣泛分布。在哺乳動(dòng)物的繁殖和免疫中起著至關(guān)重要的作用。Davis等［48］報(bào)道，Booroola 和 Inverdale 突變的雙雜合個(gè)體排卵數(shù)比單基因突變多，暗示它們共用信號(hào)通路。Moore等［49］報(bào)道BMPRⅡ在抑制BMP15對(duì)FSH誘導(dǎo)的孕酮產(chǎn)量和顆粒細(xì)胞生物活性方面最有效。Chu等［50］研究發(fā)現(xiàn)，BMPR-IB基因和BMP15基因?qū)π∥埠虻漠a(chǎn)羔數(shù)存在協(xié)同效應(yīng)。

5.2 GDF9與BMP15基因?qū)d羊繁殖性能的協(xié)同效應(yīng)

Liao等［51］發(fā)現(xiàn)，BMP15 和 GDF9 可以形成同源和異源二聚體，引起綿羊排卵數(shù)變化，從而共同影響綿羊繁殖性能。Hanrahan 等［22］發(fā)現(xiàn)，同時(shí)具有 BMP15（B2 或 B4）和GDF9（G8）突變的雜合子Belclare母羊和Cambridge母羊排卵數(shù)顯著增加（P＜0.05）。首次發(fā)現(xiàn)GDF9和BMP15基因突變均存在的綿羊具有更高的排卵數(shù)，表明BMP15突變和GDF9突變對(duì)綿羊排卵數(shù)具有加性效應(yīng)。表1列出了同時(shí)含有2個(gè)高繁殖力主效基因的綿羊品種。

表1 同時(shí)攜帶2個(gè)高繁殖力主效基因的綿羊品種

6 其他候選基因

6.1 雌激素受體基因（ESR）

雌激素受體和孕激素受體都屬于類固醇核受體超家族［55］。雌激素是一類主要在動(dòng)物卵巢內(nèi)合成的甾體類激素，作用于動(dòng)物生殖系統(tǒng)［56］和中樞神經(jīng)系統(tǒng)［57］。雌激素通過雌激素受體行使生理功能［58］。雌激素受體α（ERα）也稱為NR3A1，是雌激素受體的兩種主要類型之一。綿羊ERα由基因ESR1編碼，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄蛋白質(zhì)的功能［59］。ESRα與雌激素結(jié)合后，對(duì)胚胎、乳腺和雌性繁殖周期中卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育都發(fā)揮著重要作用［60］。畢曉丹等［61］對(duì)ESR基因外顯子1的研究結(jié)果表明，小尾寒羊ESR基因突變型（AB和BB）比野生型（AA）分別多產(chǎn)羔0.51只和0.70只（P＜0.05），推測(cè)ESR基因是控制小尾寒羊多羔性狀的主效基因。狄冉等［62］對(duì)6個(gè)綿羊品種的ESR基因外顯子4進(jìn)行PCR-SSCP檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)該部分序列比較保守，推測(cè)該區(qū)域可能不是影響綿羊高繁殖力的功能結(jié)構(gòu)域。董文艷［63］對(duì)湖羊ESR基因進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)ESR基因第1外顯子363位發(fā)生C→G突變；產(chǎn)羔數(shù)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)突變雜合子和突變純合子湖羊產(chǎn)羔數(shù)比野生型湖羊分別多0.98只和1.47只（P＜0.01）。郭海燕等［64］利用PCR-SSCP技術(shù)結(jié)合基因測(cè)序?qū)駿SR基因進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)及產(chǎn)羔數(shù)關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)ESR基因多態(tài)對(duì)湖羊產(chǎn)羔數(shù)沒有影響。

6.2 孕酮受體基因（PGR）

孕激素主要在雌性動(dòng)物卵巢中產(chǎn)生，在促進(jìn)子宮發(fā)育、抑制子宮肌層收縮、卵母細(xì)胞成熟、釋放以及受精卵植入子宮和妊娠維持的過程中發(fā)揮著重要作用［65］。孕激素受體（PGR）也稱為NR3C3，其與孕激素結(jié)合后發(fā)揮生理功能［66］。孕激素受體是類固醇激素核受體家族成員，通過與DNA特定序列結(jié)合，從而調(diào)節(jié)雌性動(dòng)物生殖生理過程［67］。綿羊PGR基因位于15號(hào)染色體，基因全長(zhǎng)140 kb左右，由8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子組成，在動(dòng)物的發(fā)育、生殖、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起著十分重要的作用［68］。張利平［69］以小尾寒羊?yàn)樵囼?yàn)對(duì)象，對(duì)其PGR基因外顯子4的多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè)，其AA、AB和BB基因型頻率分別為0.57、0.32和0.11。查麗莎［70］對(duì)小尾寒羊的PGR基因研究發(fā)現(xiàn)，其GG型和AG型產(chǎn)羔數(shù)均值分別比 AA 型的多 0.97只（P＜0.05）和 0.64只（P＜0.05），GG型和 AG 型產(chǎn)羔數(shù)差異不顯著（P ＞0.05）。俞理輝［71］使用SSCP-PCR技術(shù)對(duì)7個(gè)綿羊品種PGR基因外顯子4進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PGR基因第4外顯子擴(kuò)增序列的第227 bp處發(fā)生了C→T的堿基突變，該突變?cè)谛∥埠蛑写嬖?種基因型，但屬于低度多態(tài)，選擇的潛力較小。

7 展望

目前對(duì)綿羊多羔性狀候選基因的研究多集中在TGF-β家族和BMP信號(hào)通路或與之相關(guān)的信號(hào)通路。除此之外，應(yīng)適當(dāng)關(guān)注與BMP信號(hào)通路無關(guān)的基因，如Drouilhet團(tuán)隊(duì)關(guān)注的FecL基因、儲(chǔ)明星團(tuán)隊(duì)研究的KiSS1/GPR54/IGF1基因等與小尾寒羊產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)系。綿羊產(chǎn)羔數(shù)是涉及多基因的復(fù)雜數(shù)量性狀，因此下一步進(jìn)行多基因或位點(diǎn)聯(lián)合分析是很有必要的?，F(xiàn)在綿羊多羔候選基因的結(jié)構(gòu)、功能和調(diào)控機(jī)制尚不明確，在基因與基因、基因與環(huán)境之間的相互作用，以及基因遺傳效應(yīng)分析方面同樣進(jìn)展甚微。因此，需要使用新技術(shù)來識(shí)別并確定不同品種或群體中主效基因或與之相關(guān)的基因突變對(duì)綿羊繁殖性能的影響。使用諸如SNP芯片、GWAS、全基因組重測(cè)序和全轉(zhuǎn)錄組圖譜、單細(xì)胞測(cè)序等技術(shù)來挖掘新的與綿羊繁殖性狀相關(guān)的基因、突變或信號(hào)通路。

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