湯 義, 鹿學宇, 孟艷秋
(沈陽化工大學 制藥與生物工程學院, 遼寧 沈陽 110142)
齊墩果酸(Oleanic acid,OA)又名慶四素,化學名3β-羥基-齊墩果烷型-12-烯-28-酸,屬于五環(huán)三萜類化合物,多以皂苷形式存在,具有廣泛的生物學效應,如保肝、抗炎、抗腫瘤、抗艾滋病毒等藥理作用[1-5].研究表明,C-28位羧基成酯或酰胺的齊墩果酸衍生物具有較強的抗腫瘤活性[6-7],且已有大量研究表明,糖鏈對三萜類化合物的生物活性關(guān)系密切,糖鏈的改變可能對皂苷的活性產(chǎn)生較大影響,MATSUDA[8]等在研究齊墩果酸皂苷對口服葡萄糖大鼠的血糖水平影響時,發(fā)現(xiàn)齊墩果酸3-糖鏈和28-羧基糖鏈兩個結(jié)構(gòu)對降血糖活性極其重要,并且C-3位連接葡萄糖和葡萄糖醛酸對活性影響顯著不同,為了深入研究齊墩果酸結(jié)構(gòu)與其抗腫瘤活性的關(guān)系,本文以O(shè)A為先導化合物,保留五環(huán)三萜骨架,對C-3、C-28位進行結(jié)構(gòu)修飾,合成4個新型齊墩果酸衍生物.以天然皂苷中常見的單糖為原料,經(jīng)苯甲酰基保護,異頭碳溴代,水解,與三氯乙腈成酯等反應合成4個糖苷供體A1~A4[9-10].同時以齊墩果酸為原料,與溴芐反應生成28位芐酯衍生物OA0,在TMSOTf催化下OA0和A1~A4反應生成齊墩果酸糖苷化合物,最后在堿性條件下脫除保護基團得到4個目標產(chǎn)物Ⅰa~Ⅰd.
合成路線如下:
D-葡萄糖,D-木糖,D-半乳糖,L-鼠李糖,國藥集團化學試劑有限公司;吡啶,上海實意化學試劑有限公司;苯甲酰氯,上海同方精細化工有限公司;氮雜二環(huán)(DBU),Acros;三氟甲磺酸三甲基硅酯(TMSOTf);薄層色譜硅膠GF254,柱色譜硅膠(100~200目,青島海洋化工廠);齊墩果酸購于陜西森弗生物技術(shù)有限公司;Büchi B-540熔點測定儀(未校正);BrukerARX-600型核磁共振分析儀,CDCl3為溶劑,TMS為內(nèi)標,其他試劑均為分析純.
1.2.1 2,3,4,6-四-O-苯甲酰基葡萄糖三氯乙酰亞胺酯
1.2.1.1 全苯甲?;咸烟堑闹苽?/p>
稱取1.0 g(5.6 mmol)葡萄糖溶于20 mL無水吡啶,冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯5 mL(43.6 mmol),滴加時溶液變渾濁,10 min內(nèi)滴加完畢.升至室溫,反應8 h,向反應液中加甲醇2 mL淬滅反應.減壓蒸除溶劑,以二氯甲烷溶解剩余物,分別以稀鹽酸30 mL,碳酸氫鈉30 mL,飽和食鹽水30 mL洗滌3次,分離有機相,無水MgSO4干燥,無需純化直接進行下一步.收率95 %.mp:178~180 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.18~7.30(25H,m,Ar—H);6.36(1H,d,7.8 Hz,H-1);6.10(1H,t,J=7.8 Hz,H-3);5.87(2H,m,H-4,2);4.68,4.52,4.46(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):700.21[M+H]+.
1.2.1.2 端基的溴代反應
取3.5 g(5.0 mmol)1.2.1.1的反應產(chǎn)物,溶于20 mL無水二氯甲烷中,加入質(zhì)量分數(shù)33 %氫溴酸醋酸溶液1.5 mL,溶液變成淺黃色,室溫攪拌8 h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL,分離有機相,有機相用飽和食鹽水洗滌,硫酸鎂干燥,無需純化直接進行下一步反應.收率87 %.mp:128~130 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.10~7.35(20H,m,Ar—H);6.55(1H,d,J=5.6 Hz,H-1);6.25(1H,dd,J=7.9 Hz,5.6 Hz,H-2);5.85(1H,dd,J=7.9 Hz,4.9 Hz,H-4);5.35(1H,t,J=7.9 Hz,H-3);4.85,5.05,5.25(3H,m,6′,6,5).ESI-MS(m/z):659.50[M+H]+.
1.2.1.3 異頭碳水解
取2.5 g(4.1 mmol)干燥的溴代苯甲酰基葡萄糖溶于20 mL丙酮中,再加入0.5 mL蒸餾水,加入0.8 g Ag2CO3室溫攪拌4 h.加硅藻土抽濾,減壓蒸出溶劑丙酮,滴加幾滴甲苯將水蒸出,紅外燈下干燥.收率80 %.mp:58~63 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.05~7.30(20H,m,Ar—H);6.05(1H,d,J=7.7 Hz,H-1);5.64(1H,dd,J=10.2 Hz,7.7 Hz,H-2);5.53(1H,t,J=7.8 Hz,H-3);5.20(1H,dd,J=10.3 Hz,7.2 Hz,H-4);4.62,4.48,4.42(3H,m,5,6,6′).ESI-MS(m/z):596.23[M+H]+.
1.2.1.4 2,3,4,6-四-O-苯甲?;咸烟侨纫阴啺孵?/p>
取2.0 g(3.3 mmol)1.2.1.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰葡萄糖溶于30 mL無水二氯甲烷,加入DBU 0.48 mL,攪拌10 min,加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.洗脫劑為V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1,得終產(chǎn)物2.86 g,產(chǎn)率70 %.mp:71~74 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.63(1H,s,NH);8.08~7.30(20H,m,Ar—H);6.82(1H,d,J=3.6 Hz,H-1);6.26(1H,t,J=10.2 Hz,H-3);5.82(1H,t,J=10.2 Hz,H-4);4.69(1H,dd,J=3.6 Hz,10.2 Hz,H-2);4.65,4.64,4.49(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):619.11[M+H]+.
1.2.2 2,3,4,6-四-O-苯甲?;肴樘侨纫阴啺孵?/p>
1.2.2.1 全苯甲酰基半乳糖的合成
稱取1.0 g(5.6 mmol)葡萄糖溶于20 mL無水吡啶,冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯5 mL(43.6 mmol),滴加時溶液變渾濁,10 min內(nèi)滴加完畢.自然升至室溫攪拌反應8 h,向反應液中加甲醇2 mL淬滅反應,減壓蒸除溶劑,以二氯甲烷溶解剩余物,分別以稀鹽酸30 mL,碳酸氫鈉30 mL,飽和食鹽水30 mL洗滌3次,分離有機相,無水MgSO4干燥,無需純化直接進行下一步.收率97 %.mp:135~138 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.23~7.30(25H,m,Ar—H);6.79(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);6.28(1H,t,J=3.6 Hz,H-4);5.75(1H,dd,J=9.6 Hz,3.6 Hz,H-3);4.69(1H,dd,J=2.8 Hz,9.6 Hz,H-2);4.68,4.52,4.46(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):700.21[M+H]+.
1.2.2.2 端基的溴代反應
取3.5 g(5.0 mmol)1.2.2.1反應產(chǎn)物,溶于20 mL無水二氯甲烷中,加入質(zhì)量分數(shù)33 % HBr-CH3COOH溶液1.5 mL,溶液變成淺黃色,室溫攪拌8 h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL,分離有機相,有機相用飽和食鹽水洗滌,硫酸鎂干燥,無需純化直接進行下一步反應.收率86 %.mp:111~114 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.14~7.35(20H,m,Ar—H);6.85(1H,d,J=2.9 Hz,H-1);6.15(1H,dd,J=9.6 Hz,2.9 Hz,H-2);6.28(1H,t,J=3.2 Hz,H-4);5.35(1H,dd,J=9.6 Hz,3.2 Hz,H-3);4.75,5.0,5.15(3H,m,6′,6,5).ESI-MS(m/z):659.50[M+H]+.
1.2.2.3 異頭碳水解
取2.5 g(4.1 mmol)干燥的溴代苯甲?;肴樘侨苡?0 mL丙酮中,再加入0.5 mL蒸餾水,加入0.8 g Ag2CO3室溫攪拌4 h.加硅藻土抽濾,減壓蒸出溶劑丙酮,滴加幾滴甲苯將水蒸出,紅外燈下干燥.收率82.5 %.mp:85~87 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.25~7.30(20H,m,Ar—H);6.05(1H,d,J=3.0 Hz,H-1);5.64(1H,t,J=3.8 Hz,H-4);5.20(1H,dd,J=10.2 Hz,3.0 Hz,H-2);5.33(1H,t,J=10.2 Hz,3.8 Hz,H-3);4.71,4.58,4.42(3H,m,5,6,6′).ESI-MS(m/z):596.23[M+H]+.
1.2.2.4 2,3,4,6-四-O-苯甲?;肴樘侨纫阴啺孵?/p>
取2.0 g(3.3 mmol)1.2.2.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰半乳糖溶于30 mL無水二氯甲烷,加入DBU 0.48 L,攪拌10 min,加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱,以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑減壓蒸干溶劑得目標產(chǎn)物.產(chǎn)率74 %.mp:68~73 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:10.03(1H,s,NH);8.08~7.30(20H,m,Ar—H);6.79(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);6.28(1H,t,J=3.6 Hz,H-4);5.82(1H,dd,J=9.6 Hz,3.6 Hz,H-3);4.69(1H,dd,J=2.8 Hz,9.6 Hz,H-2);4.65,4.64,4.49(3H,m,H-5,6,6′).ESI-MS(m/z):619.0[M+H]+.
1.2.3 1,2,3,4,5-五-O-苯甲酰基木糖的合成
1.2.3.1 全苯甲酰木糖的合成
稱取0.5 g(2.8 mmol)木糖溶于10 mL無水吡啶,冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯3 mL(22.8 mmol).滴加完畢,升至室溫攪拌反應5 h,向反應液中加甲醇1 mL淬滅反應,減壓蒸除溶劑,以二氯甲烷溶解剩余物,分別以稀鹽酸15 mL,碳酸氫鈉15 mL,飽和食鹽水15 mL洗滌3次,分離有機相,無水MgSO4干燥,無需純化直接進行下一步.收率95 %.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.31~7.45(20H,m,Ar—H);6.50(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);5.98(1H,t,J=3.2 Hz,H-2);5.85(1H,m,H-3);5.59(1H,m,H-4);4.50(1H,d,J=13.2 Hz,H-5);4.23(1H,dd,J=2.0 Hz,13.2 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):566.1[M+H]+.
1.2.3.2 異頭碳的溴代
取1.5 g(2.6 mmol)1.2.3.1反應產(chǎn)物,溶于20 mL無水二氯甲烷中,加入質(zhì)量分數(shù)33 %HBr-CH3COOH溶液1.0 mL,溶液變成淺黃色,室溫攪拌5 h后冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL,分離有機相,有機相用飽和食鹽水洗滌,硫酸鎂干燥,無需純化直接進行下一步反應.收率87 %.mp:121~123 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.14~7.45(15H,m,Ar—H);6.42(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);5.86(1H,t,J=3.2 Hz,H-2);5.62(1H,m,H-3);5.39(1H,m,H-4);4.31(1H,d,J=13.2 Hz,H-5);4.05(1H,dd,J=2.0 Hz,13.2 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):525.3[M+H]+.
1.2.3.3 異頭碳水解
取1.2 g(2.2 mmol)干燥的溴代苯甲?;咎侨苡?0 mL丙酮中,再加入0.5 mL蒸餾水,加入0.35 g Ag2CO3室溫攪拌4 h.硅藻土抽濾,減壓蒸出溶劑,滴加幾滴甲苯將水蒸出,紅外燈下干燥.收率83 %.mp:135~137 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.22~7.45(15H,m,Ar—H);6.22(1H,d,J=3.0 Hz,H-1);5.66(1H,t,J=3.2 Hz,H-2);5.58(1H,m,H-3);5.39(1H,m,H-4);4.11(1H,d,J=11.5 Hz,H-5);3.95(1H,d,J=2.0 Hz,11.5 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):462.6[M+H]+.
1.2.3.4 2,3,4-三-O-苯甲?;咎侨纫阴啺孵サ暮铣?/p>
取0.8 g(1.7 mmol)1.2.3.3產(chǎn)物1-羥基苯甲酰葡萄糖溶于30 mL無水二氯甲烷,加入DBU 0.48 mL,攪拌10 min,加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑蒸干溶劑得目標產(chǎn)物.產(chǎn)率69 %.mp:65~67 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:10.03(1H,s,NH);8.14~7.35(15H,m,Ar—H);6.42(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);5.86(1H,t,J=3.2 Hz,H-2);5.62(1H,m,H-3);5.39(1H,m,H-4);4.31(1H,d,J=13.5 Hz,H-5);4.05(1H,d,J=2.0 Hz,13.5 Hz,H-5′).ESI-MS(m/z):605.5[M+H]+.
1.2.4 1,2,3,4-四-O-苯甲酰基吡喃鼠李糖的合成
1.2.4.1 全苯甲酰鼠李糖的合成
稱取0.5 g(3.0 mmol)鼠李糖溶于20 mL無水吡啶和無水二氯甲烷混合溶劑中[V(無水吡啶)/V(無水二氯甲烷)=1],冰浴下緩慢滴加苯甲酰氯3 mL(43.6 mmol).滴加完畢,升至室溫攪拌反應5 h,向反應液中加甲醇2 mL淬滅反應,減壓蒸除溶劑,以二氯甲烷溶解剩余物,分別以稀鹽酸20 mL,碳酸氫鈉20 mL,飽和食鹽水20 mL洗滌3次,分離有機相,無水MgSO4干燥,無需純化直接進行下一步.收率95 %.mp:153~155 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.25~7.30(20H,m,Ar—H);6.58(1H,d,J=2.8 Hz,H-1);5.85(1H,t,J=3.1 Hz,H-4);5.65(1H,dd,J=2.8 Hz,9.5 Hz,H-2);5.58(1H,t,J=9.5 Hz,3.1 Hz,H-3);4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5);1.16(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):580.5[M+H]+.
1.2.4.2 異頭碳溴代
取1.2 g(2.5 mmol)1.2.4.1反應產(chǎn)物,溶于20 mL無水二氯甲烷中,加入質(zhì)量分數(shù)33 %HBr-CH3COOH溶液1.5 mL,溶液變成淺黃色,室溫攪拌8 h后在冰浴下加入飽和碳酸氫鈉溶液20 mL,分離有機相,有機相用飽和食鹽水洗滌,硫酸鎂干燥,無需純化直接進行下一步反應.收率87 %.mp:132~134 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.05~7.30(15H,m,Ar—H);6.44(1H,d,J=3.0 Hz,H-1);5.81(1H,t,J=2.5 Hz,H-4);5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.4 Hz,H-2);5.62(1H,dd,J=10.4 Hz,2.5 Hz,H-3);4.43(1H,q,J=5.6 Hz,H-5);1.22(3H,d,J=5.6 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):539.5[M+H]+.
1.2.4.3 異頭碳水解
取1.1 g(2.0 mmol)干燥的溴代苯甲?;罄钐侨苡?0 mL丙酮中,再加入0.5 mL蒸餾水,加入0.3 g Ag2CO3室溫攪拌4 h.加硅藻土抽濾,減壓蒸出溶劑丙酮,滴加幾滴甲苯將水蒸出,紅外燈下干燥.收率86 %.mp:99~103 ℃,1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.10~7.34(15H,m,Ar—H);6.44(1H,s,H-1);5.81(1H,s,H-4);5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.0 Hz,H-2);5.62(1H,t,J=8.9 Hz,2.5 Hz,H-3);4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5);1.22(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):476.5[M+H]+.
1.2.4.4 2,3,4-三-O-苯甲酰基鼠李糖三氯乙酰亞胺酯的合成
取0.8 g(1.6 mmol)1.2.4.3上一步產(chǎn)物1-羥基苯甲酰鼠李糖溶于30 mL無水二氯甲烷,加入DBU 0.48 mL,攪拌10 min,加入0.6 mL三氯乙腈,攪拌5 h,蒸干溶劑,剩余物溶解于適量二氯甲烷中,以堿化(三乙胺)的中性氧化鋁拌樣,自然揮干溶劑.用20倍量堿化的中性氧化鋁裝柱.以石油醚-乙酸乙酯[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1]淋洗,減壓回收溶劑減壓蒸干溶劑得目標產(chǎn)物.產(chǎn)率79 %.mp:83~91 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),mp:85~86 ℃,δ:10.15(1H,s,NH);8.00~7.34(15H,m,Ar—H);6.44(1H,s,H-1);5.81(1H,s,H-4);5.73(1H,dd,J=3.0 Hz,10.0 Hz,H-2);5.62(1H,dd,J=10.0 Hz,2.6 Hz,H-3);4.39(1H,q,J=6.2 Hz,H-5);1.32(3H,d,J=6.2 Hz,CH3).ESI-MS(m/z):619.4[M+H]+.
稱量0.20 g(0.44 mmol)齊墩果酸,溶于DMF中,加入溴芐0.5 mL,無水碳酸鉀0.06 g,室溫反應.TLC檢測反應終點,展開劑[V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=3/1],10 h反應結(jié)束.以飽和食鹽水打漿,過濾后得白色產(chǎn)物0.18 g,產(chǎn)率為75 %.mp:254.5~256.3 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.3~7.89(m,5H,Ar—H);5.21(s,1H,H-12);2.74(t,J=7.5 Hz,1H,H-18);5.34(s,2H,PhCH2);2.96(m,1H,H-3);2.01~1.21(m,25H);1.02(s,3H,CH3);0.97(s,3H,CH3);1.20(s,3H,CH3);1.10(s,3H,CH3);0.99(s,3H,CH3);0.89(s,3H,CH3);0.87(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):546.5[M+H]+.
1.4.1 糖苷化反應
取0.1 g(1.8 mmol)糖苷受體,0.15 g苷元,溶于無水二氯甲烷中,加0.3 g 4A分子篩,冰鹽浴下攪拌0.5 h,加5滴TMSOTf,冰浴下反應4 h,加幾滴三乙胺淬滅反應,過濾,減壓蒸除溶劑,無需純化直接進行下一步反應.收率75 %.mp:201.5~205.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:8.16~7.30(25H,m,Ar—H);5.20(1H,s,H-12);5.54(1H,s,H-1′);5.25(1H,t,J=10.2 Hz,H-3′);4.65(1H,t,J=10.2 Hz,H-4′);4.98(1H,dd,J=3.6 Hz,10.2 Hz,H-2′);4.65,4.64,4.49(3H,m,H-5′,6′,6′);2.79~3.01(m,1H,H-3);1.98~1.21(m,25H,1.10(s,3H,CH3);0.97(s,3H,CH3);1.05(s,3H,CH3);1.16(s,3H,CH3);0.99(s,3H,CH3);0.89(s,3H,CH3);0.87(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):1125.5[M+H]+.
1.4.2 水解反應
取1.4.1的反應產(chǎn)物3-O-(β-D-2,3,4,6-四-O-苯甲?;拎咸烟?齊墩果烷型-11烯-28-芐酯,溶于已配好的甲醇鈉/甲醇溶液[13](pH≈10)中.TLC檢測反應終點,展開劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=6/1,4 h反應結(jié)束.反應液中再加入適量陽離子交換樹脂攪拌,調(diào)節(jié)pH值使溶液呈中性.過濾,減壓蒸除溶劑.粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離純化,洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1~10/1,得產(chǎn)物0.62 g.產(chǎn)率67.25 %.mp:221.5~226.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.28~7.93(m,5H,Ar—H);5.30(s,1H,H-12);5.04(d,J=7.7 Hz,1H,H-1′);2.28(t,J=7.6 Hz,1H,H-18);2.96(m,1H,H-3);3.51~3.47(m,H-2′,3′,5′,3H);3.65(m,1H,H-4′);3.32~3.18(m,H-6′);2.15~1.25(m,25H);1.01(s,3H,CH3);1.10(s,3H,CH3);0.97(s,3H,CH3);0.89(s,3H,CH3);1.03(s,3H,CH3);0.97(s,3H,CH3);1.05(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):708.5[M+H]+.
參照Ⅰa合成方法,合成化合物Ⅰb.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化,洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1~10/1,得白色固體,收率為65.12 %.mp:213.1~217.0 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.85~7.46(m,5H,Ar—H);5.26(s,1H,H-12);4.95(d,J=7.5 Hz,1H,H-1′);2.18(t,J=6.7 Hz,1H,H-18);2.88(m,1H,H-3);3.51(m,1H,H-4′);3.40~3.23(m,H-2′,3′,5′,3H);2.01~1.36(m,25H);1.09(s,6H,2CH3);1.16(s,6H,2CH3);0.98(s,3H,CH3);0.90(s,3H,CH3);1.15(s,3H,CH3).ESI-MS(m/z):708.5[M+H]+.
參照Ⅰa合成方法,合成化合物Ⅰc.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化,洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1~10/1,得白色固體,收率58.25 %.mp:194.7~197.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.84~7.43(m,5H,Ar—H);5.27(s,1H,H-12);4.89(d,J=2.8 Hz,1H,H-1′);2.26(t,J=7.5 Hz,1H,H-18);2.78(m,1H,H-3);3.55~3.33(m,H-2′,3′,4′,3H);3.26~3.11(m,2H,H-5,5′);1.08(s,6H,2CH3);1.02(s,3H,CH3);0.98(s,3H,CH3);0.87(s,3H,CH3);1.15(s,6H,2CH3);1.98~1.29(m,25H).ESI-MS(m/z):678.4[M+H]+.
參照Ⅰa的合成方法,合成化合物Ⅰd.粗品經(jīng)硅膠柱色譜純化,洗脫劑V(石油醚)/V(乙酸乙酯)=20/1~10/1,得白色固體,收率62.35 %.mp:197.5~203.2 ℃.1H-NMR(600 MHz,CDCl3),δ:7.99~7.33(m,5H,Ar—H);5.27(s,1H,H-12);4.79(d,J=3.2 Hz,1H,H-1′);2.30(t,J=7.6 Hz,1H,H-18);2.90(m,1H,H-3);3.55~3.33(m,H-2′,3′,4′,3H);1.18(d,J=6.1,3H,CH3);1.11(s,6H,2CH3);1.01(s,3H,CH3);0.96(s,3H,CH3);0.89(s,3H,CH3);1.25(s,6H,2CH3);1.95~1.30(m,25H).ESI-MS(m/z):692.4[M+H]+.
以齊墩果酸為先導化合物,將C-28位羧基與溴芐反應成酯,A環(huán)C-3位羥基進行糖苷化反應,設(shè)計并合成了4個齊墩果酸糖苷衍生物.以上目標產(chǎn)物在反應過程中采用TLC監(jiān)測反應終點,柱層析純化,其結(jié)構(gòu)通過1H-NMR,MS等得以確證.
糖基三氯乙酰亞胺酯是寡糖及糖綴合物合成中的重要糖苷化試劑[11],然而因為還原性單糖有很多活性羥基,制備糖苷供體過程中主要問題在于異頭碳區(qū)域選擇性反應反應試劑的選擇,有文獻報道用芐胺[12],乙二胺等弱堿催化異頭碳苯甲酰酯的水解,實驗發(fā)現(xiàn)這些條件會導致其他位置酯基的水解,副產(chǎn)物多,實驗條件不易控制.采用氫溴酸-乙酸試劑先溴代后水解,主要是利用異頭碳在陽離子引發(fā)劑作用下酯鍵斷裂形成能量不是很高的氧鎓離子中間體,從而使反應更有選擇性,其次,溴代反應需控制體系無水,因為在陽離子引發(fā)劑作用下,若體系有水,根據(jù)軟硬酸堿理論,水分子會先與羰基碳正離子作用成鍵,而酯鍵斷裂是速控步,反應慢,因此若體系有水,該歩產(chǎn)率將會很低.
苯甲酰基脫保護[13]步由于產(chǎn)物中有氧苷鍵,酸催化脫保護容易使苷鍵斷裂,利用氧苷鍵周圍的大位阻環(huán)境,在堿性條件下不易進攻苷鍵使其斷裂,故選用甲醇鈉/甲醇催化脫保護,并控制pH值在10左右,獲得很好的收率.且C-28位芐酯也在此條件下也因為空間位阻的影響不易水解從而得以保存.
以吉菲替尼和阿霉素為陽性對照藥,采用MTT法對目標化合物進行初步的體外活性測試,活性數(shù)據(jù)見表1.
表1 目標化合物對Hela、BGC-823細胞的抑制率Table 1 Inhibitory activity of the target compounds on the Hela and BGC-823 cells
從表1所測結(jié)果分析:在OA的C-3位聯(lián)接單糖,C-28位成芐酯得到的衍生物對Hela、BGC-823細胞都具有一定的抗腫瘤活性;Ⅰc、Ⅰd對兩種腫瘤細胞的抑制率高于Ⅰa、Ⅰb,可能是因為C-3位連接的脫氧單糖使目標化合物具有更好的活性.由表1可知:本文合成的齊墩果酸糖苷衍生物對Hela和BGC-823細胞均有一定程度的抑制作用,但對BGC-823細胞的抑制作用更加明顯.
相對于OA,Ⅰa~Ⅰd對子宮頸癌細胞Hela細胞系和人胃腺癌細胞BGC-823細胞系抑制率更高.在齊墩果酸C-3位連接單糖基增加了齊墩果酸衍生物的親水性基團,C-28位連接溴芐成酯提高熊果酸衍生物的脂溶性,使其具有良好的脂水分配系數(shù)可能是這些衍生物具有較高抑制活性的原因.
這一研究結(jié)果為齊墩果酸的進一步結(jié)構(gòu)優(yōu)化,尋找更高活性的目標分子提供了一定的參考依據(jù).
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[1] 張明發(fā),沈雅琴.齊墩果酸和熊果酸保肝藥理作用的研究進展[J].抗感染藥學,2012,9(1):13-19.
[2] 趙龍鉉,沈平,鄭昌吉,等.齊墩果酸衍生物的合成與表征及其抑菌活性的研究[J].遼寧師范大學學報(自然科學版),2012,35(1):63-68.
[3] 吳悠,張秋,王瑤.齊墩果酸的藥理作用機制及其在齲病治療中的研究進展[J].瀘州醫(yī)學院學報,2014,37(5):544-546.
[4] 趙龍鉉,賀興隆,金禮吉,等.齊墩果酸和甘草次酸衍生物的合成與表征及抗癌活性研究[J].遼寧師范大學學報(自然科學版),2010,33(4):474-479.
[5] 曲正義,劉宏群,鄭培和,等.齊墩果酸型皂苷藥理活性研究[J].中成藥,2012,34(6):1143-1147.
[6] 蘇春華,程克光,初相伍,等.齊墩果酸-α-氨基膦酸酯衍生物的合成與抗腫瘤活性研究[J].中國實驗方劑學雜志,2014,20(8):123-128.
[7] MALLAVADHANI U V,MAHAPATRA A,PATTNAIK B,et al.Synthesis and Anti-Cancer Activity of Some Novel C-17 Analogs of Ursolic and Oleanolic Acids[J].Medicinal Chemistry Research,2013,22(3):1263-1269.
[8] MATSUDA H,LI Y,MURAKAMI T,et al.Antidiabetic Principles of Natural Medicines.Ⅲ.Structure-Related Inhibitory Activity and Action Mode of Oleanolic Acid Glycosides on Hypoglycemic Activity[J].Chemical & Pharmaceutical Bulletin,1998,46(9):1399-1403.
[9] CATENI F,BONIVENTO P,PROCIDA G,et al.Chemoenzymatic Synthesis and Antimicrobial Activity Evaluation of Monoglactosyl Diglycerides[J].Eur.J.Med.Chem.,2008,43(1):210-221.
[10] 李曉東,康帥濤,許環(huán)軍,等.糖苷化試劑-糖基三氯乙酰亞胺酯的高效制備[J].沈陽藥科大學學報,2011,28(9):707-711.
[11] SCHMIDT R R,KINZY W.Anomeric-Oxygen Activation for Glycoside Synthesis:the Trichloroacetimidate Method[J].Advances in Carbohydrate Chemistry&Biochemistry,1994,50:21-123.
[12] KELLER-JUSLéN C,KUHN M,STHELIN H,et al.Synthesis and Antimitotic Activity of Glycosidic Lignan Derivatives Related to Podophyllotoxin[J].Journal of Medicinal Chemistry,1971,14(10):936-940.
[13] 龐思平,于永忠.苯甲?;拿撊J].合成化學,2001,9(5):407-412.