嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎中人博卡病毒感染及其臨床特征分析

梁譞 張蓉芳 謝志萍 高寒春 段招軍 劉東海

730050 蘭州，甘肅省婦幼保健院兒童哮喘中心(梁譞、張蓉芳、劉東海)；730000 蘭州，甘肅中醫(yī)藥大學(xué)(梁譞，劉東海)；100052 北京，中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所(謝志萍、高寒春、段招軍)

毛細(xì)支氣管炎(簡稱毛支)是嬰幼兒常見的下呼吸道感染性疾病，最常見的病因是病毒感染，呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是最常見的病原體[1]。人類博卡病毒(human bocavirus, HBoV)作為兒童呼吸道感染的重要病原與呼吸道感染相關(guān)性得到關(guān)注[2,3]。本研究應(yīng)用巢式聚合酶鏈反應(yīng)(nested-polymerase chain reaction，Nested-PCR) 和反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)對毛支患兒的鼻咽抽吸物進(jìn)行檢測HBoV、RSV及其他常見呼吸道病毒，了解HBoV在毛支中感染狀況，并比較單一HBoV感染與單一RSV感染患兒的臨床特征。

1 資料與方法

1.1一般資料選取甘肅省婦幼保健院兒童哮喘中心院2015年01月至2016年12月收治的396例毛支患兒，診斷均符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》毛支診斷標(biāo)準(zhǔn)[4],患兒自發(fā)病至納入研究的時間均在3 d以內(nèi)，其中男性215例,女性181例，平均年齡(8.35±1.71)月。排除標(biāo)準(zhǔn)：近1個月內(nèi)有呼吸道感染史；存在先心病、先天性喉軟骨發(fā)育不全、肺部畸形、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病者；存在家族哮喘史、近期接受免疫抑制劑等治療者；中途放棄治療或臨床資料不完整者。本研究經(jīng)甘肅省婦幼保健院倫理委員會批準(zhǔn)，所有入選患兒家長均簽署治療知情同意書。

1.2標(biāo)本采集采用無菌負(fù)壓法抽取納入患兒入院24 h內(nèi)鼻咽抽吸物2～4 ml，分為2份，并于采樣管上標(biāo)注患兒信息，其中1份加入病2毒保存液后冷凍保存并盡快運(yùn)送至中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所，進(jìn)行標(biāo)本HBoV、RSV及其他6種常見呼吸道病毒的核酸檢測；另1份標(biāo)本于本院行細(xì)菌培養(yǎng)及真菌培養(yǎng)，同時采集對應(yīng)患兒靜脈血2 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法對肺炎支原體和肺炎衣原體進(jìn)行特異性抗體檢測。詳細(xì)記錄HBoV、RSV感染陽性患兒的相關(guān)臨床資料。

1.3病毒檢測采用Nested-PCR和RT-PCR方法檢測HBoV、RSV、腺病毒(adenovirus,ADV)、流感病毒A、B型 (influenza virus A B,Flu A B)、副流感病毒1、2、3型(parainfluenza virus I～I(xiàn)II,PIVⅠ～Ⅲ)。核酸提取使用 QIAamp病毒核酸小量提取試劑盒(Qiagen 公司)按試劑盒說明書進(jìn)行。采用巢式PCR方法擴(kuò)增HBoV NS1片段，第一輪引物F0∶5′-AGGTAAAACAAATATTGCAAAGGCCATAGTC-3′，R0∶5′-TGGGAGTTCTCTCCGTCCGTATC-3′，擴(kuò)增片段長度732 bp；第二輪引物F1∶5′-AGGGTTTGTCTTTAACGATTGCAGACAAC-3′,R1∶5′-TATACACAGAGTCGTCAGCACTATGA-3′,擴(kuò)增片段長度518 bp。反應(yīng)條件為：95 ℃，5 min預(yù)變性，98 ℃ 10 s,52 ℃ 10 s，72 ℃ 1 min，擴(kuò)增40個循環(huán)，最后72 ℃延伸7 min。所有第二輪擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳純化回收后，陽性產(chǎn)物送北京天一輝遠(yuǎn)公司測序。其他6種常見呼吸道病毒檢測所需引物序列見參考文獻(xiàn)[5]。

2 結(jié)果

2.1呼吸道病毒檢出率396例標(biāo)本中病毒檢測陽性者212例，陽性檢出率53.54%，其中HBoV 39例(9.84%)、RSV 97例(24.49%)、PIV 34例(8.59%)、ADV21例(5.30%)、Flu 31例(7.83%)。排除常見細(xì)菌、真菌、MP、CP感染，單一HBoV感染29例，混合其他病毒感染10例 (25.64%)，混合感染的病毒為RSV 5例、PIV 3 例、ADV 2 例；單一RSV感染86例, 混合其他病毒感染11例 (11.34%)，混合感染的病毒為 HBoV 5例、 PIV 4例、ADV 1例、Flu 1例；HBoV比 RSV更易混合其他呼吸道病毒感染 (χ2=4.357，P=0.037)，以混合RSV感染多見。

2.2流行病學(xué)特點(diǎn)39例HBoV感染患兒中男性27例，檢出率12.56%(27/215)，女性12例，檢出率6.63%(12/ 181)，男性高于女性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.890,P=0.049)。97例RSV感染患兒中男性56例，檢出率26.05%(56/215)，女性41例，檢出率22.65%(41/181)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.612,P=0 . 0868)。

39例 HBoV 感染患兒平均月齡(8.06±2. 47)月，6 ～12月齡陽性檢出率最高，占71.79%(28/39)，各年齡段 HBoV陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.82,P=0.049)。97例RSV感染患兒平均月齡(6.95±2. 77)月，6～12月齡陽性檢出率最高，占54.64%(53/97)，各年齡段RSV陽性檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.502,P=0.682)。

HBoV全年均有檢出，無明顯季節(jié)性分布，檢出最高峰在2015年11月7例(17.4%)。RSV檢出集中于冬春季，高峰集中于2015年11月至2016年03月，6～8月是流行低谷期，檢出最高峰在2016年2月19例(65.2%)。

2.3單一HBoV感染與單一RSV感染毛支患兒臨床資料比較HBoV組更易出現(xiàn)嘔吐、腹瀉 (P<0.05)，但氣促、呼吸困難、低氧血癥(SPO2<90%)的發(fā)生率以及喘息時間、住院時間均低于RSV組(P<0.05)，采用改良的Tal評分法[6]評價HBoV單一感染組和RSV單一感染組毛支疾病嚴(yán)重程度，結(jié)果表明HBoV組中重度患兒比例低于RSV組(6.9% vs. 10.5%;P=0.012)。兩組患者在各實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)方面差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。與RSV感染相比，HBoV單一感染組胸片肺氣腫影多見(P=0.046)。見表1。

3 討論

HBoV自2005 年首次在下呼吸道感染的瑞典患兒鼻咽分泌物中分離出后[2]，世界各地相繼證實(shí)HBoV的存在，并確定其為兒童呼吸道感染的重要病原體，檢出率在小兒急性下呼吸道感染中約2.7%～26.2 %，是誘發(fā)嬰幼兒喘息最常見病因之一，HBoV致病機(jī)制尚未完全闡明。本研究在對常見呼吸道病毒的檢測中，RSV檢出率最高(24.49%)，其次為HBoV(9.84%)，與國內(nèi)外研究相近[7-8]，表明HBoV在毛支患兒呼吸道分泌物中檢出率較高，提示HBoV可能是除RSV外引起毛支又一重要病毒。

表1 單一HBoV與單一RSV 感染毛支患兒臨床特征及病情嚴(yán)重程度比較

Tab.1Comparison of clinical characteristics of single HBoV and RSV infection in children with bronchiolitis

注:*連續(xù)性校正

Note:*continuity correction

在本研究發(fā)現(xiàn)HBoV感染病例存在性別差異，男性高于女性(P<0.05)。研究表明，不同年齡段患兒均會出現(xiàn)HBoV感染，但以2歲以下嬰幼兒居多。 本資料中6～ 12月齡陽性檢出率最高，而6個月以下嬰兒及2歲以上兒童感染相對較少，可能原因?yàn)?個月以下嬰兒體內(nèi)存在母源性抗體，2歲以上兒童逐漸因外界感染而使抗體滴度升高。關(guān)于HBoV感染的季節(jié)性國內(nèi)外報(bào)道不一，在歐美 HBoV感染主要集中于冬春季[9]；日本研究結(jié)果顯示72%感染主要發(fā)生在春季[10]；在我國，北京[11]報(bào)道HBoV檢測高峰主要集中于8～11月；廣州報(bào)道[12]檢出高峰在5～6月。本研究顯示HBoV全年均有檢出，無明顯季節(jié)性分布；RSV則與 HBoV不同，檢出高峰集中于冬春季，與國內(nèi)外報(bào)道流行季節(jié)基本一致。兩者流行季節(jié)的不同結(jié)果可能與地理差異、氣候特點(diǎn)、標(biāo)本采集量及檢測方法、病毒亞型等方面有關(guān)。

HBoV陽性呼吸道標(biāo)本中常有其他呼吸道病毒共同檢出[13]，在本次研究中，HBoV、RSV混合感染率分別為25.64%、11.34%，表明兩者均易發(fā)生混合感染，而HBoV較RSV更易混合其他呼吸道病毒感染(P<0.05)。HBoV的高混合感染原因可能 HBoV感染引起呼吸道局部免疫功能失調(diào)后促進(jìn)了其他呼吸道病毒的侵入，另一方面也與共同感染病原體的高感染率有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)單一HBoV與單一RSV 感染毛支患兒具有相似性的主要臨床表現(xiàn), 比較發(fā)現(xiàn)HBoV感染患兒氣促、呼吸困難、低氧血癥(SPO2<90%)的臨床癥狀發(fā)生率均低于RSV組(P<0.05)，喘息持續(xù)時間、住院治療時間亦均短于RSV組(P<0.05)，兩組患兒影像學(xué)改變比較中，HBoV感染患兒胸片肺部過度充氣征相對多見(P<0.05)，以上提示 HBoV毛細(xì)支氣管炎病情可能較 RSV 輕。HBoV DNA在腹瀉患兒糞便標(biāo)本中的檢出率為0.8%～9.1%，但其與輪狀病毒等引起嬰幼兒腹瀉的常見病原體共感率達(dá)21%～100%。Cheng等[14]提出HBoV或許僅為一種伴隨病毒，而不是消化道疾病的致病病原體。在我們的研究中，同樣發(fā)現(xiàn)HBoV組毛細(xì)支氣管炎患兒出現(xiàn)嘔吐、腹瀉較RSV組更多見(P<0.05)。

綜上所述，HBoV可能是引起嬰幼兒毛支的病毒病原之一，HBoV和RSV感染所致毛細(xì)支氣管炎患兒具有相似的臨床特征、實(shí)驗(yàn)室及影像學(xué)改變，HBoV感染患兒病情可能較RSV輕。闡明HBoV在毛細(xì)支氣管炎病原學(xué)機(jī)制，對指導(dǎo)臨床上相關(guān)的預(yù)防及治療策略有重要意義,值得進(jìn)一步深入研究。

利益沖突：無

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