不同醋制工藝對元胡中延胡索乙素溶出的影響

張艷華，包淑云，年四輝，方昌樵，郭 祥

元胡為罌粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuoW.T.Wang）的干燥塊莖，具有活血化瘀、行氣止痛的功效.用于胸脅，脘腹疼痛，胸痹心痛，跌撲腫痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀阻等.歷代對其炮制的方法有凈制、炒制、切制、酒制、醋制、鹽炒、煨炒、蛤粉炒、米炒、焙、炮、灰炒等［1-2］，歷經(jīng)各代發(fā)展至今，元胡的炮制方法主要保留了生用、醋制和酒制三種，2015年版《中華人民共和國藥典》收錄了生用和醋制兩種炮制品［3］，就臨床應用來講，有些疾病的疼痛也用到酒制品.這三種炮制方法中，醋制用的最多，生元胡醋制時，不同的中醫(yī)使用的醋制方法不同，15版《藥典》收載了醋炙和醋煮兩種炮制品，也有人用醋蒸和醋燜等方法，不同醋制方法的使用主要依據(jù)中醫(yī)各自的用藥習慣，但不同的醋制方法對元胡的藥用是不是有很大的差異，并沒有特定的評價標準，也沒有確切的指導依據(jù)，為了比較元胡不同醋制品的差異，本文以其中的主要有效成分延胡索乙素為指標，探討醋制方法對元胡有效成分溶出的影響，進而對各種醋制品的藥用質(zhì)量進行評價.

1 材料與儀器

1.1 材料

元胡藥材（產(chǎn)地為安徽宣城）購自亳州藥材市場，經(jīng)鑒定為罌粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuoW.T.Wang）的干燥塊莖.延胡索乙素標準品（批號：110726-201213）購自中國食品藥品檢定研究院，米醋（江蘇恒順醋業(yè)股份有限公司）；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為娃哈哈純凈水.

1.2 儀器

日本島津LC-20A高效液相色譜儀（SPD-M20A檢測器、LC-20AT真空在線脫氣機、CTO-10AS柱溫箱、LC-20AT四元泵）、KQ5200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、D2F-6050型真空干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）、JY501型電子天平（上海浦春計量儀器有限公司）、電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）、PHS-3C精密PH計（上海越平科學儀器有限公司）.

2 方法

2.1 炮制品的制備［4］

（1）醋炙元胡：取大小均勻的元胡100g，加入純米醋20g拌勻，待醋液吸盡后，用文火加熱炒干，備用.

（2）醋烘元胡：取大小均勻元胡100g，加入純米醋20g拌勻，待醋液吸盡后，干燥，備用.

（3）醋蒸元胡：取大小均勻元胡100g，加入純米醋20g拌勻，待醋液吸盡后置于蒸籠中加熱蒸透，取出，稍涼，拌回醋液，干燥，備用.

（4）醋煮元胡：取大小均勻元胡100g，加入純米醋20g拌勻，加入適量清水（以平藥面為宜），用文火煮至切開內(nèi)無白心醋液被吸盡時取出，干燥，備用.

（5）醋燜元胡：取大小均勻元胡100g，加入純米醋20g拌勻，燜透，取出干燥，備用.

2.2 色譜條件

色譜柱為AgilentTC-C18（2）色譜柱（250×4.6mm，5μm），流動相為甲醇：0.3%三乙胺（冰醋酸調(diào)pH至6.5）（55∶45），檢測波長280nm，流速1.0ml/min，柱溫30℃，進樣量20μL.

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素標準品0.5mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含0.05mg的對照品溶液.

2.4 供試品溶液的制備

取元胡生品和各炮制品粉末（過3號篩）2g，精密稱定，置250ml錐形瓶中，加濃氨-甲醇（1∶20）混合液200ml，超聲提取1h，提取液抽濾，精密量取濾液50ml，置真空干燥箱中于80℃蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移到10ml容量瓶中，定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，各炮制品平行制備3份.

2.5 方法學考察

2.5.1 線性關系考察

精密吸取延胡索乙素對照品儲備液，以甲醇配 制 成 10μg/ml、20μg/ml、25μg/ml、30μg/ml、35μg/ml、40μg/ml、50μg/ml對照品溶液，分別吸取20μl注入高效液相色譜儀，測定峰面積.以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，計算線性回歸方程.2.5.2 精密度試驗

精密吸取延胡索乙素對照品溶液20μL，按上述色譜條件重復進樣5次，記錄峰面積，計算延胡索乙素峰面積的RSD值.

2.5.3 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0、2、4、8、12和24h進樣分析，測定延胡索乙素的峰面積值，計算RSD值.

2.5.4 重復性實驗

取元胡同一份供試品溶液，按上述色譜條件進行5次平行實驗，測定延胡索乙素的含量，計算RSD值.

2.5.5 加樣回收率實驗

精密稱取已知含量的元胡藥材粉末約0.25g，6份，精密加入延胡索乙素的對照品貯備液適量，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，在“2.2”項色譜條件下測定，計算回收率.

2.6 樣品含量測定

取各炮制好的樣品，按“2.4”項下方法制備供試品溶液，精密吸取各供試品溶液20μL，按“2.2”項下色譜條件測定峰面積，計算延胡索乙素的含量，同一炮制品3份取平均值.

3 結果與討論

3.1 RP-HPLC色譜圖

對照品與樣品色譜圖見圖1.

圖1 延胡索乙素標準品（A）和樣品（B）的RP-HPLC圖

3.2 方法學考察結果

3.2.1 線性關系考察

對照品濃度與色譜峰面積的線性回歸方程為y=14391x-11523（R2=0.9992），線性范圍為10～50μg/ml.

3.2.2 精密度試驗

延胡索乙素對照品連續(xù)進樣5次后，色譜峰面積的RSD（n=5）為1.28%.

3.2.3 穩(wěn)定性試驗

同一供試品溶液分別在0、2、4、8、12和24h進樣分析，色譜峰面積RSD為1.41%，表明該方法有較好的穩(wěn)定性.3.2.4 重復性實驗

元胡同一供試品溶液進樣5次后，延胡索乙素的含量RSD為2.10%，表明樣品測定重復性良好.

3.2.5 加樣回收率實驗

加樣回收率實驗延胡索乙素的平均回收率為99.41%，RSD（n=6）為1.39%.結果見表1.

表1 回收率試驗結果

3.3 含量測定結果及討論

各樣品延胡索乙素含量測定結果見表2.從結果中看到，生品的延胡索乙素含量高于所有的醋制品，說明當供試品溶液的制備參照15版《藥典》元胡項下的含量測定方法，采用濃氨-甲醇提取時，生品中的延胡索乙素能更好地溶出.但當生品直接用水煎煮后測定時，生品中的延胡索乙素含量只有0.1314mg/g，遠遠低于藥典規(guī)定的元胡中含延胡素乙素不得少于0.040%的藥用標準，這是因為延胡索乙素是原小檗堿類生物堿，為叔胺堿，以游離狀態(tài)存在，易溶于有機溶劑，不易溶于水，而傳統(tǒng)中藥都是用水煎煮，所以要經(jīng)過醋制后，使延胡索乙素上的N原子接收質(zhì)子后由叔胺堿轉變成季胺鹽，增加水溶性，促使其溶出，使藥效更好地發(fā)揮，這也是為何傳統(tǒng)中藥處方中元胡一般用醋制品的原因.在所有醋制炮制品中，醋燜法測定的含量最高，醋煮法最低，可能醋煮法在炮制煎煮和樣品溶液提取時，經(jīng)過高溫和多次液體處理，對延胡索乙素有一定影響.

表2 炮制品中延胡索乙素含量

4 結論

本實驗通過不同醋制方法炮制元胡后，在同樣的條件下提取并測定延胡索乙素的含量，結果有一定差異，不同的醋制方法對元胡的潤透程度不同，用醋量、醋的種類、炮制時長、溫度等都可能對生物堿的溶出產(chǎn)生一定的影響，所以規(guī)范炮制，才能使其藥效最大地發(fā)揮，保證元胡的用藥質(zhì)量.

：

［1］李晶晶，張靜怡，賀愛琴，等.延胡索炮制方法和功能主治歷史沿革［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2014，21（4）：134-136.

［2］王光寧，孟江，廖華衛(wèi).延胡索炮制歷史沿革研究［J］.廣東藥學院學報，2007，23（3）：349-352.

［3］國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2015.

［4］賈天柱.中藥炮制學［M］.上海：上海科學技術出版社，2013：186-187.