丁香精油和茉莉精油對(duì)抑郁癥小鼠的治療效果及其作用機(jī)制

林慧玥，萬(wàn)新龍，杜永均，謝紅莉

（溫州醫(yī)科大學(xué)，浙江 溫州 325035，1.第一臨床醫(yī)學(xué)院；2.健康與環(huán)境生態(tài)研究所）

抑郁癥是以顯著而持久的心境低落、思維遲緩、認(rèn)知功能損害、意志活動(dòng)減退和軀體癥狀為主要臨床特征的一類(lèi)心境障礙疾病[1]，心理、生物與社會(huì)環(huán)境等諸多因素共同參與其發(fā)病過(guò)程[2]。據(jù)WHO報(bào)道，抑郁癥已成為全球第四大疾病，到2020年，抑郁癥將成為導(dǎo)致殘疾的第二大病因[3]。芳香療法又稱(chēng)香薰療法，是一種古老且延續(xù)至今的方法，中醫(yī)理論認(rèn)為香藥同源，芳香類(lèi)的藥物揮發(fā)的氣味對(duì)人體會(huì)產(chǎn)生祛病及保健作用。芳香療法治療抑郁癥是近幾年來(lái)新興治療抑郁癥的一種療法。臨床研究也發(fā)現(xiàn)，無(wú)論是吸入芳香療法還是按摩芳香療法均對(duì)抑郁癥狀有所改善，可被作為一種有效的治療選擇[4]。

為了進(jìn)一步探索芳香物質(zhì)對(duì)抑郁癥的治療效果及其作用機(jī)制，本研究采用丁香精油和茉莉精油霧化療法對(duì)已經(jīng)成功造模抑郁的小鼠進(jìn)行治療，并通過(guò)測(cè)定其體質(zhì)量、懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比、強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比、血清5羥色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）濃度和嗅覺(jué)受體（olfactory receptor，OR）基因表達(dá)水平來(lái)評(píng)價(jià)其治療效果，為進(jìn)一步研究抑郁癥與嗅覺(jué)之間的關(guān)系以及抑郁癥的臨床治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 50只健康C57BL/6J雄性小鼠，SPF級(jí)，10～12周齡，體質(zhì)量23～26 g。購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，動(dòng)物許可證：SCXK（滬）2012-0002。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，溫度21～25 ℃，濕度50%～60%，光照12 h，期間正常飲水、攝食。

1.2 主要試劑和儀器 丁香精油，純度100%，原料產(chǎn)地為法國(guó)，購(gòu)自廣東揭陽(yáng)光合生物科技有限公司。茉莉精油，純度100%，原料產(chǎn)地為印度，購(gòu)自廣東揭陽(yáng)光合生物科技有限公司。TRNzol A+總RNA提取試劑、FastQuant RT Kit（With gDNase）購(gòu)于北京天根生化有限公司；ssoFast熒光定量試劑購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad公司；小鼠血清5-HT ELISA試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司，型號(hào)：5424R）；普通梯度PCR儀（美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)：T100TMThermal Cycler）；醫(yī)用壓縮式霧化器（陜西民起電子科技有限公司，型號(hào)：MQB-13）；懸尾實(shí)驗(yàn)觀(guān)察箱（上海欣軟信息科技有限公司，型號(hào)：XR-XX203）；強(qiáng)迫游泳玻璃缸（上海欣軟信息科技有限公司，型號(hào)：XR-XQ202）。

1.3 動(dòng)物建模、分組及干預(yù)治療

1.3.1 小鼠抑郁模型建立：50只C57BL/6J小鼠經(jīng)體質(zhì)量、懸尾測(cè)試實(shí)驗(yàn)（tail suspension test，TST）、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)（forced swim test，F(xiàn)ST）及血清5-HT濃度測(cè)定初篩后選取各指標(biāo)相近的45只小鼠。隨機(jī)從中挑取8只小鼠作為正常組，剩下的37只小鼠采用慢性不可預(yù)知輕度應(yīng)激模型（chronic unpredictable mild stress，CUMS）和孤養(yǎng)（單鼠單籠飼養(yǎng)）的建模方法[5]，連續(xù)應(yīng)激28 d使其抑郁。應(yīng)激包括24 h禁食禁水，冷水游泳（12 ℃，5 min），傾斜鼠籠（45°傾，8 h），搖鼠籠（1次/s，5 min），夾尾60 s，潮濕籠子8 h，熱水游泳（37 ℃，5 min），夜間照明12 h，夾尾90 s。以上9種刺激每天隨機(jī)給予1種，隔天刺激不重復(fù)，平均每種刺激3次，第18天不予刺激。造模成功的標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)過(guò)28 d的刺激后，與正常和造模前小鼠相比，小鼠TST和FST不動(dòng)時(shí)間百分比應(yīng)顯著延長(zhǎng)，體質(zhì)量顯著降低或無(wú)明顯差異，血清5-HT濃度顯著下降。

1.3.2 分組和治療方法：從抑郁癥造模成功的小鼠中篩選出32只小鼠并隨機(jī)分為4組。丁香組和茉莉組：分別采用丁香精油和茉莉精油進(jìn)行霧化治療，分別取50 μL精油和60 mL常溫蒸餾水混勻后，加入霧化機(jī)中。蒸餾水組：采用蒸餾水進(jìn)行霧化治療，取60 mL常溫蒸餾水加入霧化機(jī)中[6]。將霧化機(jī)的噴霧口接入小鼠飼養(yǎng)籠內(nèi)，打開(kāi)霧化機(jī)，讓小鼠持續(xù)吸入1 h，每天3次，持續(xù)28 d，期間正常飲水、攝食。抑郁組：和正常組一樣，不予任何治療措施，正常飼養(yǎng)。

1.4 觀(guān)察指標(biāo)及檢測(cè)方法

1.4.1 TST：將小鼠遠(yuǎn)端尾部約1.5 cm固定后，頭向下懸掛，距離地面約35 cm。記錄時(shí)間總長(zhǎng)為360 s，測(cè)定指標(biāo)為懸掛時(shí)靜止不動(dòng)的時(shí)間百分比，以此反映小鼠無(wú)助程度。

1.4.2 FST：將小鼠放入直徑為25 cm，高30 cm的透明玻璃水缸里，內(nèi)注有15 cm高的水，水溫為21～25 ℃，總記錄時(shí)間為360 s，記錄的數(shù)據(jù)為120～360 s時(shí)間內(nèi)，小鼠漂浮不動(dòng)或輕微肢體活動(dòng)的時(shí)間百分比，用來(lái)反映小鼠的無(wú)助程度。

1.4.3 體質(zhì)量：分別于造模前、造模后、治療后，記錄各組小鼠體質(zhì)量情況，以反映造模后、治療后小鼠生理情況。

1.4.4 血清5-HT測(cè)試：小鼠剪尾取血50 μL，室溫靜置2 h，使血液充分凝固，室溫3 000 r/min離心15 min，取20 μL上清液，加入等體積0.9%氯化鈉溶液稀釋至40 μL，按照ELISA說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，最后用酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的回歸方程。

1.4.5OR基因檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)小鼠OR基因表達(dá)水平，先用TRIzol法提取小鼠嗅球區(qū)域組織總RNA。提取的RNA溶于DEPC處理水后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳及紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)其OD260/280值檢測(cè)RNA純度和濃度。cDNA模板的合成則按照反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)手冊(cè)使用FastQuant cDNA第一鏈合成試劑盒合成cDNA。反應(yīng)體系包括10 μL反應(yīng)體系一：2 μL 5×gDNA Buffer、1 μg RNA、RNase-Free ddH2O補(bǔ)足到10 μL；10 μL反應(yīng)體系二：2 μL 10×Fast RT Buffer、1 μL RT Enzyme Mix、2 μL FQ-RT Primer Mix和5 μL RNase-Free ddH2O。先將體系一于42 ℃孵育3 min后立即放置在冰上，然后將反應(yīng)體系二全部加入反應(yīng)體系一中；最后將混合反應(yīng)體系42 ℃孵育15 min，95 ℃孵育3 min，并4 ℃保存。合成的cDNA置于-20 ℃保存?zhèn)溆?。以上所有樣品均設(shè)置3個(gè)生物學(xué)重復(fù)。為了探索抑郁癥與嗅覺(jué)反應(yīng)之間的關(guān)系，本研究測(cè)定了治療后相同周齡各組小鼠的13個(gè)OR基因（MOR11、MOR1、MOR124、MOR16、MOR378、MOR544、MOR19、MOR744、MOR63、MOR148、MOR9、MOR151和MOR15）表達(dá)水平。用GAPDH作為內(nèi)參基因。用做RT-qPCR的所有基因的引物見(jiàn)表1。每個(gè)PCR反應(yīng)體系為20 μL，包括10 μL Supermix，1 μL正向引物（10 μmol/L），1 μL反向引物（10 μmol/L），1 μL cDNA，7 μL滅菌蒸餾水。采用的qPCR擴(kuò)增程序?yàn)椋侯A(yù)變性95 ℃ 3 min；然后95 ℃ 10 s，60 ℃ 10 s和70 ℃ 10 s擴(kuò)增40個(gè)循環(huán)。每個(gè)基因的相對(duì)表達(dá)水平采用Ct值法的相對(duì)定量法[7]計(jì)算。計(jì)算公式為2-ΔΔCt來(lái)計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量，其中：ΔΔCt=ΔCt目的基因-ΔCt正常組基因，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用±s表示，多組比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較時(shí)，方差齊性采用LSD法，方差不齊采用Games-Howell法，組內(nèi)比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 RT-qPCR引物序列

2 結(jié)果

2.1 體質(zhì)量變化 造模前，各組小鼠體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。正常組小鼠在正常飼養(yǎng)28 d后，隨著年齡的增長(zhǎng)，其體質(zhì)量顯著增加（P＜0.05）。其余4組小鼠經(jīng)過(guò)28 d造模成功后體質(zhì)量與各自造模前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但是都顯著輕于相同周齡的正常組（P＜0.05）。采用相應(yīng)的芳香物質(zhì)治療28 d后，丁香組及茉莉組小鼠體質(zhì)量與造模后比明顯增加（P＜0.05），且與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。蒸餾水組和抑郁組小鼠體質(zhì)量與治療前相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），且顯著低于同周齡正常組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 造模前、造模后和治療后各組小鼠體質(zhì)量比較（n=8，±s，g）

表2 造模前、造模后和治療后各組小鼠體質(zhì)量比較（n=8，±s，g）

與造模前比：aP＜0.05；與造模后比：bP＜0.05；與正常組比：cP＜0.05；與抑郁組比：dP＜0.05

組別 造模前 造模后 治療后正常組 24.80±1.54 26.58±1.40a 28.38±1.00ab丁香組 24.47±1.49 23.58±1.42c 28.15±0.73abd茉莉組 25.05±1.27 23.77±1.01c 27.03±1.47abd抑郁組 25.63±1.51 24.00±1.74c 24.42±0.46c蒸餾水組 24.73±1.51 24.53±0.32c 25.65±0.28c

2.2 懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比變化 造模前，各組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后，丁香組、茉莉組、抑郁組和蒸餾水組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比較造模前明顯上升（P＜0.05），顯著高于正常組。正常組小鼠在正常飼養(yǎng)28 d后，其懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。采用相應(yīng)的芳香物質(zhì)治療28 d后，丁香組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比較造模后明顯下降（P＜0.05），與正常組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。茉莉組、蒸餾水組和抑郁組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比較造模后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但仍有顯著高于正常組（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 造模前、造模后和治療后各組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比比較（n=8， ±s，%）

表3 造模前、造模后和治療后各組小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比比較（n=8， ±s，%）

與造模前比：aP＜0.05；與造模后比：bP＜0.05；與正常組比：cP＜0.05；與抑郁組比：dP＜0.05

組別 造模前 造模后 治療后正常組 26.86±4.62 25.44±3.72d 31.42±4.86d丁香組 26.57±3.31 61.16±6.54ac 34.02±3.12bd茉莉組 27.72±6.25 56.50±6.39ac 51.27±7.71ac抑郁組 27.92±5.35 62.65±5.39ac 51.61±9.93ac蒸餾水組 33.02±2.74 53.07±2.78ac 55.41±3.32ac

2.3 強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比變化 造模前，各組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。正常組小鼠在正常飼養(yǎng)28 d后，其強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后，丁香組、茉莉組、抑郁組和蒸餾水組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比較造模前明顯上升，且顯著高于正常組（P＜0.05）。采用相應(yīng)的芳香物質(zhì)治療28 d后，丁香組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比較治療前顯著下降（P＜0.05），且與正常組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。茉莉組、蒸餾水組和抑郁組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比較治療前差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但仍高于正常組（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

2.4 小鼠血清5-HT濃度變化 造模前，各組小鼠血清5-HT濃度相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。正常組小鼠在正常飼養(yǎng)28 d后，其血清5-HT濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。造模后，丁香組、茉莉組、抑郁組和蒸餾水組小鼠血清5-HT濃度較造模前明顯下降，顯著低于正常組（P＜0.05）。采用相應(yīng)的芳香物質(zhì)治療28 d后，丁香組小鼠血清5-HT濃度較治療前顯著提高（P＜0.05），且與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。茉莉組、蒸餾水組和抑郁組小鼠血清5-HT濃度較造模后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但仍顯著低于正常組（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表4 造模前、造模后和治療后各組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比比較（n=8， ±s，%）

表4 造模前、造模后和治療后各組小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比比較（n=8， ±s，%）

與造模前比：aP＜0.05；與造模后比：bP＜0.05；與正常組比：cP＜0.05；與抑郁組比：dP＜0.05

組別 造模前 造模后 治療后正常組 37.56±3.09 40.69±3.56d 41.01±4.71d丁香組 37.94±4.53 81.78±5.96ac 36.91±3.76bd茉莉組 31.67±7.84 76.56±9.71ac 67.96±5.68ac抑郁組 37.64±9.32 78.07±3.95ac 63.75±5.10ac蒸餾水組 36.53±3.89 69.85±2.61ac 70.06±3.07ac

表5 造模前、造模后和治療后各組小鼠血5-HT濃度比較（n=8，±s，ng/mL）

表5 造模前、造模后和治療后各組小鼠血5-HT濃度比較（n=8，±s，ng/mL）

與造模前比：aP＜0.05；與造模后比：bP＜0.05；與正常組比：cP＜0.05；與抑郁組比：dP＜0.05

組別 造模前 造模后 治療后正常組 28.20±6.08 26.62±3.35d 28.06±2.80d丁香組 28.21±3.37 17.08±1.26ac 27.52±4.42bd茉莉組 29.34±2.71 16.05±3.54ac 20.32±4.39ac抑郁組 29.40±4.56 18.41±4.20ac 16.18±2.73ac蒸餾水組 31.25±5.97 18.74±3.70ac 17.40±3.86ac

2.5 治療后各組小鼠OR基因表達(dá)水平比較 各組小鼠13個(gè)OR基因檢測(cè)結(jié)果顯示，沒(méi)有經(jīng)過(guò)任何治療的抑郁組小鼠中除MOR11外，其余OR基因表達(dá)水平均顯著低于正常組（P＜0.05）。丁香組、茉莉組和蒸餾水組小鼠OR基因表達(dá)水平則根據(jù)基因和芳香化合物的不同，與正常組差異不一樣。丁香組小鼠中MOR11、MOR124、MOR16、MOR378、MOR15、MOR744、MOR1和MOR63的基因表達(dá)水平顯著高于正常組（P＜0.05），MOR544、MOR19和MOR151的基因表達(dá)水平則與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與蒸餾水組比，丁香組小鼠除MOR151和MOR1的基因表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余OR基因均顯著升高。茉莉組小鼠MOR744和MOR1基因表達(dá)水平顯著高于正常組，MOR11、MOR151、MOR63與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余基因表達(dá)水平均顯著低于正常組（P＜0.05）。茉莉組小鼠MOR11、MOR124、MOR19和MOR378基因表達(dá)水平與抑郁組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。茉莉組與蒸餾水組小鼠MOR15、MOR544、MOR744、MOR151、MOR1基因表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。蒸餾水組小鼠MOR11、MOR744、MOR1、MOR63基因表達(dá)水平顯著高于正常組，MOR124、MOR16、MOR378、MOR151與正常組比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），MOR15、MOR19、MOR544基因表達(dá)水平顯著低于正常組，但仍顯著性高于抑郁組（P＜0.05）。見(jiàn)圖1-2。另外，在所有檢測(cè)的OR基因中，只有MOR148和MOR9在經(jīng)過(guò)丁香精油和茉莉精油霧化治療后基因表達(dá)水平仍顯著低于正常組（見(jiàn)圖3）。

圖1 治療后相同周齡正常組、丁香組、抑郁組及蒸餾水組小鼠之間各OR基因相對(duì)表達(dá)水平比較

圖2 治療后相同周齡正常組、茉莉組、抑郁組及蒸餾水組小鼠各OR基因相對(duì)表達(dá)水平比較

圖3 治療后正常組、丁香組、茉莉組、抑郁組及蒸餾水組小鼠MOR148和MOR9基因相對(duì)表達(dá)水平比較

3 討論

抑郁癥目前的治療手段有抗抑郁藥物治療、心理治療、物理治療、中醫(yī)治療等方法，其中，抗抑郁藥物是主要的治療手段，但也存在不足之處，如不良反應(yīng)較嚴(yán)重，易復(fù)發(fā)，服從性差，靶點(diǎn)單一等。中醫(yī)是我國(guó)醫(yī)療的特色，對(duì)抑郁癥的治療也有獨(dú)特之處，例如針灸、藥膳、芳香療法等。相比針灸、藥膳，芳香物質(zhì)療法更方便、舒適、易于接受。芳香療法可通過(guò)口服、腸道、吸入及局部皮膚等給藥途徑對(duì)機(jī)體產(chǎn)生作用，口服的方式吸收較快，但從安全角度看，吸入和肌膚給藥較為安全，而且方便控制劑量[8]。芳香療法治愈抑郁癥需要嗅覺(jué)的參與，因此，OR基因的表達(dá)水平高低對(duì)芳香治療抑郁癥效果的評(píng)判具有重要的指標(biāo)性意義。嗅覺(jué)是動(dòng)物感覺(jué)中最重要的本能感覺(jué)之一，由上千個(gè)基因超家族控制，特異性受體決定OR神經(jīng)元所識(shí)別的氣味分子[9-10]。嗅覺(jué)信息除了傳導(dǎo)至大腦皮層產(chǎn)生嗅覺(jué)外，也可傳至邊緣系統(tǒng)，參與行為、記憶、情緒等活動(dòng)，從而影響免疫及內(nèi)分泌功能[11]。由于抑郁癥與嗅覺(jué)的關(guān)系密切，嗅球切除動(dòng)物模型被廣泛運(yùn)用于抗抑郁藥物的篩選[12]。芳香氣味分子被吸入鼻腔，被鼻黏膜中的OR識(shí)別和結(jié)合，產(chǎn)生動(dòng)作電位，嗅覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)至大腦皮層的嗅覺(jué)區(qū)，促進(jìn)神經(jīng)化學(xué)物質(zhì)的釋放，然后經(jīng)由大腦中樞神經(jīng)發(fā)出指令，去調(diào)控和平衡植物神經(jīng)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生鎮(zhèn)定、放松、愉悅或興奮的效果。通過(guò)呼吸，植物的香味分子也可以進(jìn)入肺部，在肺部進(jìn)行氣體交換，再進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，達(dá)到相應(yīng)的療效[13]。因此芳香物質(zhì)治療法的效果與動(dòng)物嗅覺(jué)之間具有很重要的關(guān)系。

為了研究芳香化合物對(duì)抑郁癥的治療效果，建立小鼠抑郁模型至關(guān)重要。建立動(dòng)物抑郁模型的方法很多，如CUMS+孤養(yǎng)[5]，行為絕望[14]、社會(huì)應(yīng)激[15]、電誘導(dǎo)[16]、利血平拮抗[17]以及糖皮質(zhì)激素受體基因突變[18]等，其中CUMS+孤養(yǎng)的小鼠抑郁癥建模方式不僅成功率高，模型可靠，而且能更好地模擬抑郁癥病征，可以用來(lái)探究病因、病理及測(cè)試治療情況[19]。這種建模方式30年前由KATZ提出，迄今為止，已在許多研究中被成功運(yùn)用[20]。采用CUMS+孤養(yǎng)方式成功造模后，與正常小鼠相比，患有抑郁癥的小鼠多個(gè)生理指標(biāo)會(huì)產(chǎn)生顯著性變化，如體質(zhì)量下降、攝食量減少、敞箱實(shí)驗(yàn)中水平運(yùn)動(dòng)及垂直運(yùn)動(dòng)得分下降，糖水偏愛(ài)百分比下降等[12，21]，還有懸尾不動(dòng)時(shí)間百分比及強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間百分比顯著上升[22]。本研究采用CUMS+孤養(yǎng)方式造模后，與正常小鼠相比，患有抑郁癥的小鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降，懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳時(shí)間延長(zhǎng)，血清5-HT濃度降低等顯著性生理變化；與造模前相比除體質(zhì)量無(wú)明顯變化外，其余指標(biāo)均呈現(xiàn)相同趨勢(shì)的變化。這與以前的許多研究成果一致，表明抑郁癥模型造模成功。如楊春蕊[23]采用CMUS+孤養(yǎng)的方法成功建立小鼠抑郁模型后，發(fā)現(xiàn)抑郁小鼠與造模前體質(zhì)量差異不大，但與相同周齡正常小鼠相比，體質(zhì)量有明顯下降；懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間也顯著延長(zhǎng)。王艷梅[24]也同樣通過(guò)CMUS+孤養(yǎng)的方式成功建立小鼠抑郁模型后，發(fā)現(xiàn)與造模前相比，懸尾不動(dòng)時(shí)間和強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間顯著增加，血清5-HT濃度明顯下降。另外，有研究表明，選擇6～8周齡小鼠成功造模后，抑郁小鼠體質(zhì)量不僅與正常小鼠相比顯著下降，而且與造模前體質(zhì)量比也有顯著下降[12]。而本研究結(jié)果表明，小鼠抑郁后的體質(zhì)量只顯著輕于相同周齡正常小鼠，與其造模前相比，卻無(wú)明顯變化。這可能與選取的小鼠周齡有關(guān)，我們選取的小鼠為成年期（8～12周）小鼠。有研究表明，刺激年幼的動(dòng)物，會(huì)增加對(duì)抑郁的易感性[25]。因此，選擇成年期小鼠可以保證小鼠各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)試結(jié)果更加穩(wěn)定。

芳香療法具有代謝快、高滲透性、不滯留、不良反應(yīng)小等優(yōu)勢(shì)，容易透過(guò)血腦屏障，達(dá)到治療效果，而且效果與西藥治療相當(dāng)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)芳香物質(zhì)治療抑郁癥進(jìn)行了大量的研究。早在2001年就有研究指出薰衣草香味可以緩解緊張情緒[26]。2008年，KIECOLT-GLASER等[11]研究發(fā)現(xiàn)柑橘香味可以改善抑郁癥。2009年，劉瑤等[27]發(fā)現(xiàn)芳香療法與抗抑郁藥物治療療效相當(dāng)，且芳香療法對(duì)消化道的不良反應(yīng)較抗抑郁藥物低。徐金勇等[28]指出丁香吸入可緩解抑郁癥小鼠的抑郁行為。2010年，牛利華等[6]指出薰衣草吸入能有效改善抑郁癥小鼠的抑郁行為，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討，BAGATTA等[29]研究發(fā)現(xiàn)佛手柑精油可減輕焦慮癥狀并能調(diào)節(jié)情緒。2013年，王艷梅[24]研究表明，香草醛可改善小鼠抑郁行為。張乃舒等[30]指出芳香療法可作為輔助療法用來(lái)緩解產(chǎn)后抑郁癥患者。魏永鴿等[31]通過(guò)按摩、涂抹、吸入等方式使用精油能有效地改善亞健康狀態(tài)。2017年LEE等[32]指出芳香療法可以緩解抑郁癥狀，提高睡眠質(zhì)量，卻不影響生理參數(shù)如免疫因子等。國(guó)內(nèi)最新臨床研究表明芳香精油經(jīng)絡(luò)推拿對(duì)抑郁癥低動(dòng)力癥狀有較好的臨床療效[33]。由此可見(jiàn)，利用芳香物質(zhì)治療抑郁癥一種行之有效的方法。本研究中抑郁癥小鼠在接受相應(yīng)治療后，通過(guò)測(cè)定小鼠的各項(xiàng)生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn)丁香精油霧化治療法對(duì)抑郁癥具有確切療效，而茉莉精油霧化治療法對(duì)抑郁癥療效較差。丁香精油霧化治療可以緩解甚至治愈小鼠抑郁癥已在以前的研究中得到了驗(yàn)證[28]。有研究發(fā)現(xiàn)茉莉花香可以改善人的情緒，且飲用茉莉花茶可以起到抗抑郁的功效[34]，這與我們的研究結(jié)果不一致，可能是由于采用的治療方法不同或者是治療的對(duì)象不同所導(dǎo)致。

小鼠OR基因表達(dá)水平檢測(cè)結(jié)果顯示，抑郁癥小鼠所有OR基因表達(dá)水平普遍降低，這與以前的研究[35]結(jié)果一致。經(jīng)過(guò)丁香精油和茉莉精油霧化治療后，小鼠OR基因表達(dá)水平發(fā)生了變化。丁香組小鼠中，MOR11表達(dá)水平是正常組的8倍多，MOR15、MOR124、MOR16、MOR744、MOR63表達(dá)水平是正常組小鼠的3倍多，MOR378表達(dá)水平是正常組小鼠2倍。這可能是因?yàn)檫@7個(gè)基因可特異性結(jié)合丁香精油中的丁香酚，具有編碼和識(shí)別丁香氣味的功能[36]，特別是MOR11，對(duì)丁香酚更為敏感。當(dāng)受到丁香氣味刺激后，這7個(gè)基因表達(dá)水平就會(huì)迅速上升，而MOR544、MOR19和MOR151的基因表達(dá)水平僅僅達(dá)到正常水平，可能是因?yàn)檫@3個(gè)基因不參與丁香氣味的編碼和識(shí)別功能。茉莉組小鼠中MOR15、MOR124、MOR16、MOR378、MOR544和MOR19的基因表達(dá)水平整體低于正常水平，可見(jiàn)茉莉精油霧化治療并沒(méi)有改善抑郁小鼠的嗅覺(jué)敏感性。蒸餾水組小鼠中所有基因表達(dá)均顯著性高于抑郁組，與正常組相比，除MOR15、MOR19、MOR544基因顯著降低外，其余基因均顯著升高，可進(jìn)一步得出茉莉精油治療效果較差。眾所周知，嗅覺(jué)功能是抑郁癥進(jìn)程的預(yù)測(cè)因子[37]，也可作為抑郁癥的一個(gè)標(biāo)志，抑郁癥患者得到治療后，其嗅覺(jué)功能可恢復(fù)到正常水平[38]。有研究發(fā)現(xiàn)兒童期有過(guò)受虐待史的抑郁癥患者，其嗅球體積會(huì)變小，且嗅球的靈敏度也比較低[39]。因此，結(jié)合本研究結(jié)果，MOR16、MOR544和MOR19的基因表達(dá)水平高低可能與抑郁癥治療有一定聯(lián)系。另外，本研究中MOR148和MOR9的基因表達(dá)水平在丁香組、茉莉組、抑郁組和蒸餾水組小鼠中顯著低于正常組，這可能是因?yàn)檫@2個(gè)基因與抑郁癥病史相關(guān)。經(jīng)過(guò)丁香精油、茉莉精油及蒸餾水霧化治療后的小鼠MOR744和MOR1基因表達(dá)水平顯著高于正常組，MOR151基因表達(dá)水平升至正常水平，而且3者之間沒(méi)有顯著差異，MOR63基因表達(dá)水平除了茉莉組與正常組無(wú)明顯差異外，其余2組基因表達(dá)水平明顯高于正常組，猜想這4個(gè)基因可能是普通氣味分子的主要受體。目前關(guān)于OR基因與抑郁癥的研究較少，仍需進(jìn)一步驗(yàn)證。

總而言之，本研究成功建立了小鼠抑郁模型，成功測(cè)定了2種芳香精油對(duì)抑郁癥的治療效果，發(fā)現(xiàn)丁香精油霧化治療對(duì)小鼠抑郁癥有較好的治療結(jié)果；并闡述了OR基因與抑郁癥之間的關(guān)系。但是，目前我們的研究還僅限于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)對(duì)小鼠抑郁癥的研究，離治療人類(lèi)抑郁癥的臨床應(yīng)用實(shí)踐還很遠(yuǎn)。另外，對(duì)OR基因與抑郁癥的關(guān)系仍需進(jìn)一步探索，這將可能為抑郁癥的治療開(kāi)發(fā)一種以嗅覺(jué)通路為途徑的新型治療模式，從而提高抑郁癥治療率，及時(shí)緩解病患的痛苦。

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