不同煙齡的健康人群免疫功能的對比性研究＊

郭玲玲，涂紅纓，熊美麗，溫孝如，何艷玲，鄒國明

(江西省人民醫(yī)院呼吸科，南昌 330008)

煙草中含有大量對人體有害的化學(xué)物質(zhì)，包括尼古丁、一氧化碳、氮氧化合物等。吸煙（包括主動及被動吸煙）已經(jīng)證實與慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、腫瘤性疾病(如肺癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等)、冠心病、自身免疫性疾?。ㄈ珙愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、克羅恩病等）等多種疾病密切相關(guān)。且可能通過影響細(xì)胞及體液免疫、改變各種炎癥介質(zhì)的釋放等機制導(dǎo)致或者參與了這些疾病的發(fā)生和發(fā)展。這在吸煙導(dǎo)致COPD中已經(jīng)得到證實。在吸煙的健康人群中是否也存在細(xì)胞免疫及體液免疫的異常呢？本研究通過檢測非吸煙人群和不同嚴(yán)重程度的吸煙人群的T細(xì)胞亞群及免疫球蛋白水平，以期分析吸煙對人體細(xì)胞免疫及體液免疫的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 納入2014年1月至2016年12月在我院體檢的400例男性健康體檢者（排除任何急性及慢性疾病，尤其需要除外呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、風(fēng)濕免疫系統(tǒng)、腫瘤、慢性肝炎等疾?。?，年齡均在45-60歲之間，根據(jù)吸煙指數(shù)分為：⑴非吸煙組：既往及目前均不吸煙者100例；⑵吸煙指數(shù)＜300組 （吸煙指數(shù)=吸煙年數(shù)×每天吸煙支數(shù)）：100例；⑶吸煙指數(shù)300-400組：100例；⑷吸煙指數(shù)＞400組：100例。

1.2 實驗方法 在充分告知并知情同意下，400例研究對象均在清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血兩管（各為3ml，1管抗凝血，1管非抗凝血）分別進行T細(xì)胞亞群、免疫球蛋白測定。流式細(xì)胞儀為Beckman-coulter公司生產(chǎn)，型號為EPICS-XL。所用 CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體均為 Beckman 公司生產(chǎn)。實驗步驟為：取新鮮抗凝血100μl分別加入 6μl CD3+、CD4+、CD8+單克隆抗體，振蕩混勻后室溫避光溫育20min，每管加入300μl溶血素，振蕩混勻，室溫下溫育15min。加入700μl磷酸鈉緩沖液 （PBS），震蕩后上機檢測。免疫球蛋白IgA、IgG、IgM采用美國 Beckman-coulter公司生產(chǎn)的IMMAGE 800型雙光徑免疫濁度分析儀檢測。按照說明書操作規(guī)程進行。

1.3 統(tǒng)計分析 采用SPSS 19.0進行統(tǒng)計分析，所用數(shù)據(jù)以±s）表示，兩組之間的比較采用多因素方差分析，P＜0．05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01 為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 400例研究對象均為男性，年齡在45-60歲之間，中位年齡51歲。四組研究人群在年齡方面具有可比性。

2.2 4組研究人群的T細(xì)胞亞群及免疫球蛋白資料見表1。

吸煙指數(shù)300-400組、吸煙指數(shù)＞400組與非吸煙組相比，CD3+%、CD4+%均明顯降低，差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P值＜0.01)。吸煙指數(shù)＜300組與非吸煙組相比，T淋巴細(xì)胞亞群差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3個吸煙組之間相比隨著吸煙年支的增加CD3+%有下降趨勢，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。吸煙指數(shù)＜300組、吸煙指數(shù)300-400組、吸煙指數(shù)＞400組與非吸煙組相比，CD8+%有下降趨勢，但差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義。吸煙指數(shù)＜300組、吸煙指數(shù)300-400組、吸煙指數(shù)＞400組與非吸煙組相比IgA、IgM有減少趨勢，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。吸煙組與非吸煙組相比，CD4+/CD8+、IgG差別無統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 4組研究人群T細(xì)胞亞群及免疫球蛋白結(jié)果

3 討論

T淋巴細(xì)胞源于骨髓的淋巴樣干細(xì)胞，在胸腺中發(fā)育成熟，是機體細(xì)胞免疫的效應(yīng)細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞。外周血中CD3+T細(xì)胞代表成熟的T淋巴細(xì)胞，根據(jù)其功能分為CD4+T細(xì)胞（T輔助淋巴細(xì)胞，Th） 和CD8+T細(xì)胞 （細(xì)胞毒T細(xì)胞，CTL）。CD4+T細(xì)胞主要發(fā)揮細(xì)胞免疫功能及分泌細(xì)胞因子促進B細(xì)胞增殖及產(chǎn)生抗體，進一步影響體液免疫。而CD8+T細(xì)胞主要對靶細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用，同時分泌細(xì)胞因子抑制B細(xì)胞產(chǎn)生抗體。CD4+T/CD8+T細(xì)胞維持一定的比例是保證機體正常免疫穩(wěn)態(tài)的前提。

煙草中含有數(shù)千種對人體有害的化學(xué)物質(zhì)。目前已經(jīng)證明在呼吸系統(tǒng)吸煙可以導(dǎo)致COPD、肺癌等疾病。吸煙可能通過影響人體的免疫功能導(dǎo)致這些疾病的發(fā)生[1]。如Forssund等[2]研究發(fā)現(xiàn)，吸煙組及吸煙合并COPD組的支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的CD4+T細(xì)胞均低于非吸煙組，而CD8+T細(xì)胞高于非吸煙組。同時吸煙者無論是否合并COPD其外周血CD4+T細(xì)胞均低于非吸煙組。國內(nèi)研究[3，4]也發(fā)現(xiàn)COPD患者的外周血中CD4+T細(xì)胞低于健康對照組，而CD8+T細(xì)胞高于健康對照組，CD4+T/CD8+T細(xì)胞比例存在失衡，提示COPD患者存在細(xì)胞免疫受損。同時國內(nèi)學(xué)者還發(fā)現(xiàn)吸煙COPD患者存在外周血免疫球蛋白的降低，提示存在體液免疫受損[5]。

目前關(guān)于吸煙對免疫功能影響的研究大多集中在COPD人群。在吸煙非COPD患者中細(xì)胞及體液免疫是否受影響，及不同程度的吸煙對免疫功能的影響如何，目前研究較少。為排除性別、年齡對研究的影響，本研究全部選擇健康體檢的男性患者，年齡45-60歲。研究發(fā)現(xiàn)吸煙組CD3+%、CD4+%較非吸煙組明顯下降，且隨著吸煙嚴(yán)重程度的提高，下降更明顯。這與之前在COPD人群的研究結(jié)果相同。但是本研究未在吸煙人群中發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞的提高，與孫雯雯等[3]在COPD人群中的研究結(jié)果不同。分析原因可能為本研究納入人群年齡較輕，且均為健康人群有關(guān)?；蛘哂捎诒澈蟮倪z傳易感性因素，這些人群雖然煙草暴露時間足夠長，但并未發(fā)展為COPD。Maeno T等[6]在吸煙誘導(dǎo)的小鼠肺氣腫模型中發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞在肺組織炎癥細(xì)胞的招募及肺彈性組織的破壞中發(fā)揮重要的作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞通過分泌干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IFN-γ--inducibleprotein-10)，誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶12的產(chǎn)生，導(dǎo)致肺彈性蛋白的降解，從而導(dǎo)致肺組織的破壞及肺氣腫的發(fā)生。而CD8+T細(xì)胞缺陷的小鼠在長期煙草暴露下僅發(fā)現(xiàn)微弱的炎癥反應(yīng)，且不能發(fā)展為肺氣腫，再次證實CD8+T細(xì)胞在吸煙所致肺氣腫中的不可缺少的重要作用。另外從9例吸煙合并COPD患者和7例健康吸煙者的肺組織標(biāo)本中也發(fā)現(xiàn)，吸煙合并COPD患者外周氣道的CD8+T細(xì)胞明顯高于健康吸煙者[7]。這也許能解釋本研究納入人群為何外周血CD8+T細(xì)胞沒有明顯升高，為何吸煙這么長時間沒有發(fā)生COPD。

關(guān)于吸煙對體液免疫的影響，國內(nèi)外研究結(jié)果不完全相同，國內(nèi)研究多發(fā)現(xiàn)吸煙可以導(dǎo)致免疫球蛋白 IgA、IgG、IgM 的下降[5，8，9]。推測其可能機制為吸煙導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致其分泌細(xì)胞因子減少，從而影響了B細(xì)胞增殖及產(chǎn)生抗體，進一步影響體液免疫。但國外有些不同的研究結(jié)果，如有研究發(fā)現(xiàn)健康吸煙人群的血清IgG水平低于非吸煙人群，但IgM，IgA無明顯降低[10]。本研究未發(fā)現(xiàn)吸煙對健康男性免疫球蛋白的影響，與之前研究不同。推測原因可能可能跟本研究納入人群均為健康男性患者，且年齡較輕有關(guān)。

總之，吸煙可以損害人體的細(xì)胞免疫系統(tǒng)，表現(xiàn)為CD3+%、CD4+%的下降，且隨著吸煙嚴(yán)重程度的提高，這種下降可能更明顯。

參考文獻

[1]劉乾中，周海鳳，徐曉君，等.COPD和哮喘患者細(xì)胞免疫與內(nèi)源性皮質(zhì)醇臨床意義研究[J].江西醫(yī)藥，2014，49（3）：191-194.

[2]Forsslund H，Mikko M，Karimi R，et al.Distribution of T-cell subsets in BAL fluid of patients with mild to moderate COPD depends on current smoking status and not airway obstruction[J].Chest，2014， 145(4)：711-722.

[3]孫雯雯，李燕芹，劉斌，等.慢性阻塞性肺疾病患者的細(xì)胞免疫劑細(xì)胞因子水平變化 [J].中國老年學(xué)雜志，2010，8（30）：2124-2126.

[4]Zhang MQ，Wan Y，Jin Y，et al.Cigarette smoking promotes inflammation in patients with COPD by affecting the polarization and survival of Th/Tregs through up-regulation of muscarinic receptor 3 and 5 expression[J].PLOS One，2014，9：e112350.

[5]陳立文，李崇文.不同病程COPD患者免疫功能的臨床分析[J].中國實驗診斷學(xué)，2017，21（1）：32-34.

[6]Maeno T，Houghton AM，Quintero PA，et al.CD8+T Cells are required for in?ammation and destruction in cigarette smokeinduced emphysema in mice[J].J Immunol，2007，178(12)：8090-8096.

[7]Saetta M，Di Stefano A，Turato G，et al.CD8+T-lymphocytes in peripheral airways of smokers with chronic obstructive pulmonary disease[J].Am J Respir Crit Care Med，1998，157(3)：822-826.

[8]朱娜，徐國正，王蜀湘.吸煙對免疫球蛋白的影響[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2012，2(6)：146.

[9]薛紅，趙輝，張蕊.吸煙對體內(nèi)免疫球蛋白及補體的影響[J].中國公共衛(wèi)生，2014，30(12)：1616.

[10]A Gonzalez-Quintela，R Alende，F(xiàn) Gude，et al.Serum levels of immunoglobulins(IgG，IgA，IgM)in a general adult population and their relationship with alcohol consumption，smoking and common metabolic abnormalities[J].Clin Exp Immunol，2008，151(1)：42-50.