日本血吸蟲MBLAC1基因的克隆及生物信息學(xué)分析

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目前，我國血吸蟲病主要分布在長江以南的湖南、江西、安徽等7個省份[1]。截止到2015年底，我們?nèi)杂醒x病病人77 194個，6 861萬人受到威脅[2]。雖然吡喹酮的化學(xué)治療作用是一種控制血吸蟲病的有效手段，但是在塞內(nèi)加爾和埃及已出現(xiàn)了吡喹酮耐藥性的報道[3-4]。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的6種疫苗候選分子在實際應(yīng)用中并沒有為抗血吸蟲感染提供理想的保護(hù)效果[5]。若能篩選到有效的抗血吸蟲病的疫苗候選分子或者是發(fā)現(xiàn)新的藥物靶標(biāo)，將有助于根除血吸蟲病，惠及生活在疫區(qū)的數(shù)千萬人。作為血吸蟲與宿主血液直接接觸的界面，普遍認(rèn)為體被與血吸蟲營養(yǎng)攝取、免疫逃避、免疫調(diào)節(jié)、排泄、滲透壓調(diào)節(jié)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等密切相關(guān)[6-7]。因此，通過對血吸蟲體被蛋白的研究有可能發(fā)現(xiàn)新的疫苗和藥物靶點。

在前期日本血吸蟲(Schistosomajaponicum)體被免疫蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中[8]，金屬β內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域蛋白1(Metallo-beta-lactamases domain-containing protein 1，MBLAC1)被鑒定到。金屬β內(nèi)酰胺酶(Metallo-beta-lactamases，MBL)又稱金屬酶，它的活性部位是金屬離子，并且必須要依賴該金屬離子才能夠發(fā)揮出一定的催化作用[9]。金屬β內(nèi)酰胺酶能水解幾乎所有的β-內(nèi)酰胺類抗生素(除了單環(huán)類)，從而不被臨床所用的β-內(nèi)酰胺類抗生素抑制，因此它是細(xì)菌耐藥性的重要機制。MBLAC1就是MBL這個超級家族的一分子，在抗生素的選擇壓力下MBL可能會變異成其它更高效的酶，或者也有可能水解其它底物。

本研究通過克隆獲得SjMBLAC1基因片段，并對其基因序列編碼的蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而為該蛋白的生物學(xué)功能研究提供基礎(chǔ)，并對篩選抗日本血吸蟲病的疫苗候選抗原分子具有一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1寄生蟲和實驗動物 日本血吸蟲中國大陸株尾蚴由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所釘螺室提供。新西蘭大白兔(雄性，2.5～3.0 kg)購自上海羅涇飛達(dá)實驗動物養(yǎng)殖場。

1.1.2主要試劑 Trizol購自Invitrogen公司；PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit、Ex Taq DNA聚合酶、pMD19-T載體購自TaKaRa生物工程(大連)有限公司；DNA Marker DL2000、大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞購自上海天根生物技術(shù)有限公司；Agrose、DEPC水購自上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司；QIAquick○RGel Extraction Kit購自Qiagen公司；其余試劑為國產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1日本血吸蟲42 d成蟲cDNA的合成 將尾蚴經(jīng)人工腹部貼片感染新西蘭白兔(1 000條/只)，于感染后42 d進(jìn)行剖殺，通過肝門靜脈灌注收集蟲體。用滅菌的PBS(pH7.4)充分洗滌所收集到的蟲體，并將其置于液氮凍存?zhèn)溆?。取出液氮保存的日本血吸蟲42 d成蟲，利用Trizol法提取蟲體的總RNA，根據(jù)PrimeScriptTM1st Strand cDNA Synthesis Kit說明書進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，獲得蟲體cDNA。

1.2.2SjMBLAC1基因的克隆 根據(jù)SjMBLAC1基因的cDNA序列(GenBank ID：FN319125.1)設(shè)計引物，并于該序列的5′端和3′端引入兩個酶切位點：上游引物P1: 5′-CAGGAATTCATGGGCGCGGACGAT-3′(下劃線處為EcoRI酶切位點)，下游引物P2: 5′-GACCTCGAGCTAGGCGAGTTCAAC-3′(下劃線處為XholI酶切位點)。以日本血吸蟲42 d成蟲cDNA為模板，PCR擴(kuò)增含ORF的cDNA序列片段，反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min，然后95 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，共30個循環(huán)，最后72 ℃ 10 min。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳。經(jīng)初步鑒定后，將目的DNA片段進(jìn)行切膠回收，并參照QIAquick○RGel Extraction Kit說明書對其進(jìn)行純化。

1.2.3PCR產(chǎn)物連接轉(zhuǎn)化及測序 將純化后的目的基因片段克隆至pMD19-T載體，構(gòu)建質(zhì)粒pMD19-T-SjMBLAC1，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，并將轉(zhuǎn)化菌涂布到含氨芐青霉素的LB固體培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)12 h，挑取單菌落接種于5 mL的LB液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)8 h，經(jīng)PCR鑒定為陽性的菌液送至Invitrogen公司測序。

1.2.4SjMBLAC1基因的序列分析 利用PSA(NUCLEOTIDE，http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/nucleotide.html)將測序結(jié)果與目標(biāo)核苷酸序列(GenBank ID：FN319125.1)的ORF進(jìn)行相似性分析，利用Translate(http://web.expasy.org/translate/)將測序結(jié)果推導(dǎo)出編碼氨基酸序列。

1.2.5SjMBLAC1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析SjMBLAC1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析方法總結(jié)如表1所示。

表1 相關(guān)生物信息學(xué)分析軟件及網(wǎng)址

Tab.1 Related bioinformatics analysis softwares and websites

分類軟件網(wǎng)址功能氨基酸序列同源性分析BLASThttp://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi查找SjMBLAC1氨基酸序列的同源序列Clustalx本地化軟件對MBLAC1在不同物種的同源氨基酸序列進(jìn)行多序列比對分析系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建MEGA本地化軟件構(gòu)建不同物種MBLAC1同源氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹蛋白理化性質(zhì)分析ProtParamhttp://web.expasy.org/protparam/分析SjMBLAC1氨基酸序列的理論等電點、相對分子質(zhì)量、半衰期、穩(wěn)定性指數(shù)等一系列理化性質(zhì)氨基酸序列功能性分析CDDhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi分析SjMBLAC1氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域SignalPhttp://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/預(yù)測SjMBLAC1氨基酸序列的信號肽TMHMMhttp://www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM-2.0/預(yù)測SjMBLAC1氨基酸序列的跨膜結(jié)構(gòu)域ProtScalehttp://www.expasy.org/cgi-bin/protscale.pl預(yù)測SjMBLAC1氨基酸序列的親水性疏水性NetNGlychttp://www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/分析SjMBLAC1氨基酸序列的糖基化位點蛋白抗原表位的預(yù)測IEDBhttp://tools.iedb.org/bcell/分析SjMBLAC1氨基酸序列的表面可及性、柔韌性、抗原性和親水性,并預(yù)測其B細(xì)胞表位蛋白二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測GOR4https://npsa-prabi.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page=npsa_gor4.html分析SjMBLAC1氨基酸序列的二級結(jié)構(gòu)

2 結(jié) 果

2.1SjMBLAC1基因的克隆 根據(jù)SjMBLAC1基因的cDNA序列(GenBank ID：FN319125.1)設(shè)計引物，以日本血吸蟲42 d成蟲cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，1%瓊脂糖凝膠電泳顯示有一個約711 bp的特異性條帶(圖1)，與SjMBLAC1基因的ORF預(yù)期大小一致。

Lane M：DNA Marker DL2000；Lane 1：SjMBLAC1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；圖1 SjMBLAC1基因PCR產(chǎn)物電泳圖Fig.1 PCR amplification of SjMBLAC1 gene

2.2SjMBLAC1基因的序列分析 測序結(jié)果表明，SjMBLAC1基因的ORF片段大小為711 bp，其中，堿基A為193個，占全長的27.14%；堿基G為182個，占全長的25.60%；堿基T為216個，占全長的30.38%；堿基C為120個，占全長的16.88%。測序結(jié)果與目標(biāo)核苷酸序列(GenBank ID：FN319125.1)的相似性為100%，無核苷酸的突變。該基因編碼236個氨基酸，結(jié)果如圖2所示。

圖2 SjMBLAC1基因的ORF序列及推導(dǎo)出的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and deduced amino acid sequences of SjMBLAC1

2.3SjMBLAC1基因編碼蛋白的生物信息學(xué)分析

2.3.1氨基酸序列同源性分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建 利用BLAST在線程序?qū)jMBLAC1氨基酸序列進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明：與SjMBLAC1氨基酸序列具有一定相似性的MBLAC1氨基酸序列分別來自于埃及血吸蟲(Schistosomahaematobium)、

華支睪吸蟲(Clonorchissinensis)、人(Homosapiens)、牛(Bostaurus)、大鼠(Rattusnorvegicus)以及小鼠(Musmusculus)，其相似性依次是79%、58%、27%、27%、27%、27%，GenBank登錄號分別為：XP_012798644.1、GAA53538.1、NP_981942.1、NP_001068680.1、NP_001020167.1、NP_808546.1。

利用Clustalx軟件對以上7個物種的MBLAC1蛋白進(jìn)行氨基酸序列的多重對比分析，結(jié)果如圖3所示，圖中黑色位點為各物種的氨基酸殘基完全相同，也就是說這些氨基酸位點都是高度保守位點。MBLAC1氨基酸序列在這7個物種間共有66個保守位點。

不同物種MBLAC1氨基酸序列比對：日本血吸蟲MBLAC1(CAX74853.1)，埃及血吸蟲MBLAC1 (XP_012798644.1)，華支睪吸蟲MBLAC1 (GAA53538.1)，人MBLAC1 (NP_981942.1)，牛MBLAC1(NP_001068680.1)，大鼠MBLAC1(NP_001020167.1)，小鼠MBLAC1 (NP_808546.1)。黑色表示高度保守區(qū)域，灰色表示相似區(qū)域，連續(xù)線性區(qū)域表示保守結(jié)構(gòu)域。圖3 不同物種MBLAC1氨基酸序列的同源性分析Fig.3 Sequence alignment analysis of MBLAC1 from different organisms

利用MEGA軟件對以上7個物種的MBLAC1蛋白進(jìn)行系統(tǒng)的進(jìn)化樹分析，結(jié)果如圖4所示，SjMBLAC1與華支睪吸蟲和埃及血吸蟲兩者的MBLAC1在進(jìn)化關(guān)系上較近，與人、牛、大鼠和小鼠的MBLAC1在進(jìn)化關(guān)系上都較遠(yuǎn)。

利用MEGA軟件中的鄰接法完成了對不同物種MBLAC1氨基酸序列的進(jìn)化分析。這些物種MBLAC1的序列號分別為日本血吸蟲MBLAC1(CAX74853.1)，埃及血吸蟲MBLAC1 (XP_012798644.1)，華支睪吸蟲MBLAC1 (GAA53538.1)，人MBLAC1 (NP_981942.1)，牛MBLAC1(NP_001068680.1)，大鼠MBLAC1(NP_001020167.1)，小鼠MBLAC1 (NP_808546.1)。圖4 不同物種MBLAC1氨基酸序列的進(jìn)化分析Fig.4 Sequence evolution analysis of MBLAC1 from different organisms

2.3.2蛋白理化性質(zhì)分析 利用ProtParam在線程序?qū)jMBLAC1氨基酸序列的理化性質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，結(jié)果表明，該蛋白由236個氨基酸殘基組成，化學(xué)分子式為C1141H1757N311O360S14，理論等電點為4.84，理論分子量約為26 kD。該蛋白序列的N末端為甲硫氨酸(Met)，其在哺乳動物網(wǎng)狀紅細(xì)胞體外表達(dá)的半衰期為30 h，在酵母體內(nèi)表達(dá)的半衰期大于20 h，在大腸桿菌中表達(dá)的半衰期大于10 h。SjMBLAC1脂肪系數(shù)為72.63；總平均親水指數(shù)(GRAVY)為-0.315，表明該蛋白為可溶性蛋白；不穩(wěn)定系數(shù)為25.25，屬于穩(wěn)定蛋白。

該蛋白含有20種氨基酸(圖5)，帶負(fù)電荷殘基(Asp+Glu)總數(shù)為35，帶正電荷殘基(Arg+Lys)總數(shù)為23。各氨基酸的含量中，甘氨酸(Gly)、纈氨酸(Val)的含量最多，都占總氨基酸數(shù)的8.9%，色氨酸(Trp)和谷氨酰胺(Gln)的含量最少，都只占總氨基酸數(shù)的1.3%。

圖5 SjMBLAC1蛋白中的20種氨基酸各自所占的百分比Fig.5 Percentage distribution of the 20 amino acids of SjMBLAC1

2.3.3氨基酸序列功能性分析 利用CDD在線程序分析SjMBLAC1氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域，結(jié)果表明，第7～222位氨基酸位點為該蛋白的保守結(jié)構(gòu)域(圖3)，屬于金屬β-內(nèi)酰胺酶(MBL)超級家族。經(jīng)過SignalP、TMHMM、NetNGlyc、ProtScale等在線程序分析表明，SjMBLAC1氨基酸序列無信號肽；無跨膜結(jié)構(gòu)域，所有氨基酸殘基皆暴露于細(xì)胞表面；該氨基酸序列中含有一個N-糖基化位點，該位點位于第186位氨基酸；蛋白序列中親水性氨基酸的得分遠(yuǎn)高于疏水性氨基酸，表明該蛋白為可溶性蛋白，這與蛋白理化性質(zhì)分析的結(jié)果一致。

2.3.4蛋白二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測 利用GOR4在線程序分析SjMBLAC1氨基酸序列的二級結(jié)構(gòu)，結(jié)果如圖6所示，不同二級結(jié)構(gòu)中氨基酸所占的比例為：21個氨基酸殘基屬于α-螺旋(Alpha helix，縮寫為h)，占8.90%；0個氨基酸殘基屬于β-轉(zhuǎn)角(Beta turn，縮寫為t)，占0%；66個氨基酸殘基屬于β-折疊(Extended Strand，縮寫為e)，占27.97%；149個氨基酸殘基屬于無規(guī)則卷曲區(qū)域(Random coil，縮寫為c)，占63.14%。其中無規(guī)則卷曲區(qū)域主要分布于N端第1～7、12～18、21、25～28、34～38、42～51、57～69、74～80、83、88～91、101～104、109～123、128～136、142～158、161～172、181～194、211、216～232和236位氨基酸，以上這些肽段形成抗原表位的可能性較大。

h：α-螺旋；e：β-折疊；c：無規(guī)則卷曲區(qū)域圖6 GOR4預(yù)測SjMBLAC1蛋白的二級結(jié)構(gòu)Fig.6 Secondary structures of SjMBLAC1 protein predicted by GOR4

2.3.5蛋白抗原表位的預(yù)測 利用在線程序IEDB分析SjMBLAC1蛋白的B細(xì)胞抗原表位。①Emini法預(yù)測SjMBLAC1氨基酸序列中表面可及性較高的區(qū)域為：62-67、98-104、130-135、144-149、168-173、186-195、197-202、221-228，如圖7A。②采用Karplus-Schulz法分析SjMBLAC1蛋白序列的可塑性，結(jié)果顯示共有10個可塑性較強區(qū)域，分別為：13-19、33-38、42-69、100-105、112-117、128-136、142-156、162-174、186-194、218-226，如圖7B。③運用Kolaskar-Tongaonkar法分析抗原性，結(jié)果表明SjMBLAC1氨基酸序列的平均抗原指數(shù)為1.031，抗原指數(shù)較高的區(qū)域為：5-14、19-33、37-43、70-75、78-84、123-129、135-143、154-160、172-183、212-226，如圖7C。④Parker法預(yù)測SjMBLAC1蛋白的親水性，其親水性區(qū)域分布較多，主要分布于14-27、57-68、72-80、98-103、110-116、129-135、144-155、169-174、182-196氨基酸，如圖7D。

綜合考慮表面可及性、可塑性、抗原性、親水性等多種預(yù)測方案，結(jié)合二級結(jié)構(gòu)的分析結(jié)果，若表面可及性指數(shù)≥1，可塑性指數(shù)≥1，抗原性指數(shù)≥1.031，親水性指數(shù)≥1.895，氨基酸序列位于無規(guī)則卷曲區(qū)域內(nèi)，且區(qū)段氨基酸個數(shù)≥7，則這一段區(qū)域具有成為SjMBLAC1蛋白優(yōu)勢B細(xì)胞抗原表位的潛力[10]。按照以上思路，本研究共篩選到9個優(yōu)勢B細(xì)胞抗原表位，相應(yīng)抗原表位的氨基酸序列見表2。

表2 SjMBLAC1蛋白B細(xì)胞抗原表位的氨基酸序列

Tab.2 Amino acid sequence of B cell antigenic epitope of SjMBLAC1 protein

起始位點終止位點多肽序列多肽長度/個4251NPGSAWNGPD105869ASGVSEPEDEIK127480TDGHAEH7110121DFSDGITPYEFD12128136GTPGQRGPQ9145156LKDSKSGECREP12166172FTDVQDA7183194GCHNETNYDKES12216230AYGPPFKVKPEYFST15

A：Emini表面可及性預(yù)測；B：Karplus & Schulz可塑性預(yù)測；C：Kolaskar & Tongaonkar抗原性預(yù)測；D：Parker親水性預(yù)測；圖7 IEDB預(yù)測SjMBLAC1蛋白的B細(xì)胞抗原表位Fig.7 B cell antigenic epitope of SjMBLAC1 protein predicted by IEDB

3 討 論

血吸蟲能夠在終末宿主體內(nèi)存活幾十年而不被其免疫系統(tǒng)所清除，蟲體不僅能夠逃避宿主免疫攻擊和攝取宿主營養(yǎng)物質(zhì)，甚至能夠利用宿主的內(nèi)分泌及免疫信號分子，在這些過程中，體被(尤其是其蛋白)起到了極其關(guān)鍵的作用[11-12]。例如，體被蛋白絲氨酸蛋白酶抑制劑(Serpin)能夠通過干擾宿主的免疫應(yīng)答反應(yīng)而對維持蟲體的生存起著重要作用[13]。血吸蟲自身無法合成脂肪酸，定位于體被上的CD36-like class B清道夫受體能夠幫助蟲體利用宿主的脂類物質(zhì)，從而維持蟲體在終末宿主體內(nèi)的生長發(fā)育[14]。因此，通過對體被蛋白的研究有可能發(fā)現(xiàn)新的抗血吸蟲病疫苗候選抗原分子及藥物靶標(biāo)，從而為該病的防治提供新思路。

在前期日本血吸蟲體被免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究的基礎(chǔ)上，本研究以金屬β內(nèi)酰胺酶結(jié)構(gòu)域蛋白1(MBLAC1，ID：FN319125.1)為對象進(jìn)行了初步研究。在本實驗中，成功提取了日本血吸蟲成蟲總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄獲得成蟲cDNA，并以其為模板首次克隆獲得SjMBLAC1的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。測序結(jié)果分析表明，SjMBLAC1擴(kuò)增片段大小為711 bp(含終止密碼子)，基因序列與預(yù)期目的片段大小相符且無核苷酸突變。該基因編碼236個氨基酸，預(yù)測蛋白質(zhì)分子量約為26 kDa，理論等電點為4.84。利用生物信息學(xué)技術(shù)對SjMBLAC1蛋白序列的結(jié)構(gòu)域、糖基化位點和B細(xì)胞抗原表位等方面進(jìn)行了分析，從而有助于了解SjMBLAC1蛋白的生物學(xué)特性。

結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)中具有特異空間結(jié)構(gòu)和獨立功能的區(qū)域，能夠決定蛋白質(zhì)發(fā)揮關(guān)鍵的生物學(xué)效用。在同一蛋白家族中，所有蛋白質(zhì)中都具有不變或相同的結(jié)構(gòu)域，為該家族蛋白質(zhì)功能的承擔(dān)者，不能被改變，稱其為保守結(jié)構(gòu)域。SjMBLAC1氨基酸序列的保守結(jié)構(gòu)域?qū)儆贛BL超級家族。在該家族中，除了包括能夠水解β-內(nèi)酰胺類抗生素的金屬β-內(nèi)酰胺酶以外，還有多個成員，例如，乙二醛酶II能夠水解2-D-丙醇酰谷胱甘肽而生成谷胱甘肽，后者具有抗氧化作用，從而維持免疫系統(tǒng)的正常功能[15]。磷酸二酯酶可以通過水解核苷酸(尤其是ATP和腺苷)來影響血小板聚集，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞增殖、分化、運動等多種生理過程[16]。因此，我們推測SjMBLAC1可能參與維持抗氧化系統(tǒng)來抵抗活性氧對蟲體造成的損傷性，或者是通過調(diào)節(jié)ATP的分解而參與到蟲體的能量代謝過程，從而完成血吸蟲的正常生長發(fā)育。

糖基化是一種普遍存在的蛋白質(zhì)翻譯后修飾，能夠影響蛋白質(zhì)折疊的正確性及構(gòu)想的穩(wěn)定性，從而參與到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、免疫應(yīng)答、受體激活等多種重要的生命活動中。由于與細(xì)胞外環(huán)境能夠發(fā)生直接接觸，膜蛋白與分泌蛋白常常被作為疫苗、診斷及治療靶標(biāo)而研究[17]。研究表明，這兩類蛋白易發(fā)生N-連接糖基化。經(jīng)本研究分析發(fā)現(xiàn)，SjMBLAC1的第186位氨基酸發(fā)生了N-糖基化，而且被我們前期圍繞日本血吸蟲體被展開的免疫蛋白質(zhì)組學(xué)研究鑒定到，我們推測其很可能是定位于血吸蟲體被上的糖蛋白，進(jìn)一步說明可以將其作為抗血吸蟲病疫苗候選抗原分子進(jìn)行探討。

抗原分子表面能夠被B細(xì)胞表面受體或抗體特異性識別并結(jié)合的化學(xué)基團(tuán)，稱為B細(xì)胞抗原表位，一般由5～15個氨基酸殘基組成[18]。作為抗原的核心組分，B細(xì)胞抗原表位是引起機體體液免疫的物質(zhì)基礎(chǔ)，因此，一直以來，其都是研究人員探索疾病免疫預(yù)防的重點。若能準(zhǔn)確地預(yù)測B細(xì)胞抗原表位，將不僅有助于基礎(chǔ)免疫學(xué)的研究，而且能促進(jìn)疫苗及抗體的開發(fā)，最終促進(jìn)實現(xiàn)對疾病的防控[19]。目前，蛋白質(zhì)B細(xì)胞抗原表位的單一參數(shù)預(yù)測方法主要包括表面可及性、可塑性、抗原性、親水性、二級結(jié)構(gòu)等多種方案，通過綜合考慮以上分析結(jié)果，可以提高抗原表位預(yù)測的準(zhǔn)確性。在本研究分析SjMBLAC1蛋白的B細(xì)胞抗原表位時，利用GOR4預(yù)測了該蛋白的二級結(jié)構(gòu)，又結(jié)合Emini表面可及性方案、Karplus-Schulz可塑性方案、Kolaskar-Tongaonkar抗原性方案及Parker親水性方案等多種方法綜合分析，我們推測該蛋白具有9個較優(yōu)的B細(xì)胞抗原表位，分別為42-51、58-69、74-80、110-121、128-136、145-156、166-172、183-194、216-230位氨基酸。

綜上所述，本研究利用生物信息學(xué)技術(shù)對SjMBLAC1蛋白的生物學(xué)特性進(jìn)行了較為全面的了解，并推測該蛋白具有9個較優(yōu)的B細(xì)胞抗原表位，從而為開展該蛋白的生物學(xué)功能研究及篩選抗血吸蟲病疫苗候選分子提供了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn):

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