運用微生物過濾器（Millif l ex Plus）膜過濾法微生物的檢驗及應用分析

潘凌子 大連市血液中心 血型室 （遼寧 大連 116001）

微生物檢驗是運用微生物學相關理論與方法，對待檢測樣本中微生物種類、性質、數(shù)量及其影響進行檢驗與分析的過程。膜過濾法微生物檢驗技術作為近年來廣泛應用于各行業(yè)領域的一種全新微生物檢驗技術，具有適用范圍廣、檢測結果可永久保存、檢驗結果準確度高以及可獲得定量檢測結果等一系列優(yōu)勢，應用效果備受肯定。本文即針對膜過濾法微生物檢驗技術及其應用問題展開分析與探討。

1.膜過濾法微生物檢驗概述

以得到定量檢測結果。

2.膜過濾法微生物檢驗應用

基于膜過濾法進行微生物檢驗是目前國際范圍內所公認的一種微生物標準檢驗方法，在西方國家藥典標準、EPA、以及FDA等組織中得到了肯定，目前在環(huán)境、食品及飲料、制藥、以及化品等工業(yè)品質檢測控制領域中得到了非常廣泛的應用[1,2]。

在微生物檢驗領域中，與常規(guī)直接檢驗方法相比，應用膜過濾法檢驗主要具備以下幾個方面的優(yōu)勢：第一，可提高所檢測樣品的覆蓋范圍，具有更好的適用性價值；第二，可以通過膜過濾濃縮效應的方式，提高微生物檢驗的準確度；第三，可以通過保存帶菌落濾膜的方式永久保存檢驗檢測記錄；第四，可以將濾膜上所培養(yǎng)菌落與檢測樣品直接對應，

2.1 實驗試劑與儀器

實驗試劑主要包括金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌，均由上海東琴環(huán)保生物科技有限公司提供；藍色素、紅色素均由上海東琴環(huán)保生物科技有限公司提供；沙氏瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基由上海撫生實業(yè)有限公司提供。實驗儀器為微生物過濾器，儀器型號為Millif l ex Plus，由默克公司提供。

2.2 樣品前處理

精密稱取1.0g劑量色素樣品置入9.0mL劑量無菌生理鹽水中，充分混合均勻后備用。用5.0mL劑量生理鹽水對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌以及白色念珠菌菌種斜面進行沖洗，以菌懸液終濃度2.0×103～3.0×104CFU/mL為最終調整標準[3-5]。

2.3 實驗方法

2.3.1 常規(guī)法

將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，分別置入15.0mL～20.0mL劑量胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，在36.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2～3d。針對白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為3d～5d?；厥諏嶒炛袑?.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水稀釋后色素樣品中，充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，分別置入15.0mL～20.0mL劑量胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基，在36.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2～3d。針對白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為3～5d。

表1. 藍色素中各菌種檢驗結果對比表

2.3.2 膜過濾法

將0.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，將每份樣品均移至帶濾過膜與含50.0mL劑量洗液的膜過濾裝置內進行過濾處理。用150.0mL～500.0mL劑量洗液進行清洗。然后將薄膜移至2個不同TSA平皿表面，在36.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2～3d。針對白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為3～5d?；厥諏嶒炛袑?.1mL劑量菌懸液與9.9mL劑量無菌生理鹽水充分混合均勻后靜置備用，吸取1.0mL劑量混合物2份至無菌平板中，將每份樣品均移至帶濾過膜與含50.0mL劑量洗液的膜過濾裝置內進行過濾處理。用150.0mL～500.0mL劑量洗液進行清洗。然后將薄膜移至2個不同TSA平皿表面，在36.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為2～3d。針對白色念珠菌，置入15.0mL～20.0mL劑量沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在30.0?C恒溫箱中進行培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為3～5d。

表2. 紅色素中各菌種檢驗結果對比表

2.4 實驗結果

實驗結果如下表（見表1～2）所示。結合表中數(shù)據(jù)可見：常規(guī)法對各種菌種的回收率均低于50%，不符合檢測要求，主要原因是色素中含有抑菌物質導致顏色干擾，菌落數(shù)難以準確辨識。而應用膜過濾法對各種菌種的回收率均高于70%，符合標準要求，提示本方法對色素微生物檢驗具有良好可行性。

本文在分析膜過濾法微生物檢驗技術基本原理與優(yōu)勢的基礎之上，以牙膏膏體色素原料中的微生物檢驗為例，對比分析常規(guī)檢驗方法與膜過濾法在微生物檢驗方面的應用價值，經(jīng)實驗結果證實膜過濾法對色素微生物檢驗具有良好可行性，望能夠引起各方人員的關注與重視。

參考文獻

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[4] 陳雯雯,段文峰,劉洋,等.新技術在食品微生物檢驗檢測中的應用[J].上海師范大學學報(自然科學版),2016,45(1):121-126.

[5] 鐘曉紅.食品微生物檢驗技術及未來發(fā)展趨勢研究探討 [J].工業(yè),2017,4(3):233.