精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液50R在模擬臨床使用過程中的穩(wěn)定性研究

梅麗　栗鳳娟　牛瑞娟　卓盼　王軍軍

[摘要] 目的 選取該公司生產(chǎn)的與原研廠家的精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R），按照萬邦筆使用說明書對筆芯內(nèi)精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）進(jìn)行完全模擬臨床注射操作，至注射行程終點(diǎn)，對其初始、中間、取樣后筆芯中剩余藥液的含量與可溶性重組賴脯胰島素進(jìn)行檢測，評價(jià)其在臨床使用中是否穩(wěn)定和符合相關(guān)規(guī)定。方法 采用Inertsil ODS-SP色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為0.2 mol/L 硫酸鹽緩沖液-乙腈（74∶26）；檢測波長為214 nm；流速為0.8 mL/min；柱溫為40℃。模擬臨床注射操作，在指定時間點(diǎn)取樣檢測。結(jié)果 全部樣品各時間點(diǎn)取樣與剩余藥液的含量均在產(chǎn)品標(biāo)示量的90.0% ～105.0%范圍內(nèi)，可溶性重組賴脯胰島素在45.0%～55.0%范圍內(nèi)，RSD（n=6）均在2.0% 以內(nèi)，符合相關(guān)規(guī)定。結(jié)論 患者在臨床使用中嚴(yán)格依據(jù)筆式注射器及筆芯使用說明書進(jìn)行操作，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）筆芯內(nèi)重組賴脯胰島素含量與可溶性重組賴脯胰島素均未發(fā)生顯著變化，穩(wěn)定性良好。

[關(guān)鍵詞] 精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）；萬邦筆；含量；可溶性賴脯胰島素；臨床使用；高效液相色譜儀

[中圖分類號] R587.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-4062（2017）12（b）-0024-03

[Abstract] Objective To evaluate whether it is steady and conforms to the related regulations in clinical use by selecting the mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection（50R） produced by our company and conducting the totally simulation clinical injection operation to the final point of injection course， and testing the content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin. Methods Inertsil ODS-SP chromatographic column （250 mm×4.6 mm，5 μm）； mobile phase 0.2 mol/L；sulfate buffers-acetonitrile（74：26）； detection wavelength 214 nm； flow rate 0.8 mL/min； column temperate 40℃， and the clinical injection operation was stimulated and the samples were selected for test at the specific time point. Results The samples at various time points and content of residual liquid of all samples were in the 90.0%～105.0%， and the soluble recombinant lyline insulin was 45.0%～55.0%， and RSD（n=6） was in 2.0%， conforming to the related regulations. Conclusion The patients should conduct the operation strictly according to the pen injector and instructions， and there are no obvious changes of mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）， content of residual liquid in cartridge and soluble recombinant lyline insulin， and the stability is good.

[Key words] Mixed protamine zinc recombinant human insulin lispro injection （50R）； Wanbang pen； Content； Soluble recombinant lyline insulin； Clinical use； High performance liquid chromatography

2型糖尿?。═2DM）是常見的一種內(nèi)分泌代謝疾病，該病具有遺傳易感性，尤其在環(huán)境因素的觸發(fā)下易發(fā)病[1]。近年來，隨著人們生活水平的不斷提高以及飲食結(jié)構(gòu)的不斷變化，其發(fā)病率呈上升趨勢[2-3]。精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）含有50%的可溶性重組賴脯胰島素和50%的精蛋白鋅重組賴脯胰島素，與可溶性賴脯胰島素相比，皮下吸收速度更加迅速，滿足餐后胰島素的需要。并且魚精蛋白結(jié)合后釋放緩慢，作用時間比較長，可以替代基礎(chǔ)分泌[4]。林旋等人[5]的研究還發(fā)現(xiàn)精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）可明顯改善2型糖尿病患者血糖代謝，增強(qiáng)其免疫功能，減輕炎癥反應(yīng)，從而降低其心血管事件的發(fā)生。張宏穎等[6]的研究結(jié)果表明精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）可以更好的控制餐后血糖，尤其是早晚餐后血糖，并且無嚴(yán)重的低血糖事件發(fā)生，具有較好的安全性。而且注射時間非常靈活，進(jìn)餐即打針，給患者帶來了極大的方便。目前大量研究表明精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（商品名：優(yōu)泌樂50）在臨床治療2型糖尿病安全、方便、有效，值得臨床推廣應(yīng)用[7]。所以研究精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液在臨床使用過程中的穩(wěn)定性研究具有非常重要的意義。

1 儀器與試藥

儀器：島津20A高效液相色譜儀。對照品：賴脯胰島素對照品（批號：140729-200501）。參比制劑：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（商品名：優(yōu)泌樂50，批號：C509110A）。樣品：精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）（批號：B201608501、B201608502、B201608503）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Inertsil ODS-SP（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：0.2 mol/L硫酸鹽緩沖液-乙腈（74：26）；柱溫：40℃；流速：0.8 mL/min；檢測波長：214 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.2 系統(tǒng)適用性

取賴脯胰島素對照品適量，加0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋制成每1 mL中含1 mg的溶液，放置，使A21脫氨賴脯胰島素含量為0.8%～11.0%。在上述色譜條件下，重組賴脯胰島素主峰與A21脫氨賴脯胰島素峰之間的分離度不小于3.0，重組賴脯胰島素主峰的拖尾因子不大于1.5。該色譜條件用于含量測定，按外標(biāo)法以賴脯胰島素峰與A21脫氨賴脯胰島素峰面積之和計(jì)算。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取賴脯胰島素對照品適量，用0.01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1 mL中含20單位的溶液，作為對照品溶液。

2.4 檢測方法及結(jié)果

每批樣品分別取12 支，分為6組（2支/組）進(jìn)行試驗(yàn)。按照筆式注射器及筆芯使用說明書緩慢顛倒或滾動筆芯至規(guī)定次數(shù)，將筆芯和注射器針頭正確安裝于胰島素筆式注射器上，排出筆芯中的氣泡后，正確設(shè)置注射劑量為30 IU[d1～d9，模擬臨床中患者用法與用量，按照體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量計(jì)算]，并注射出藥液，取下注射器針頭，將上述裝有筆芯的筆式注射器于室溫下避光靜置。每24 h重復(fù)上述操作，分別在d1、d3、d6、d9收集注射出的藥液至容器中，并迅速用微量移液槍快速精密吸取兩份200 μL藥液備用。按照上述方法注射至行程終點(diǎn)前15 IU處（預(yù)實(shí)驗(yàn)測定），放置24 h，將筆式注射器及筆芯緩慢顛倒或滾動筆芯規(guī)定次數(shù)，推注藥液至行程終點(diǎn)，用微量移液槍從容器中快速精密吸取200 μL藥液，用于剩余藥液混勻后的檢測[1]。

取200 μL藥液，加入0. 99 mol/L鹽酸溶液6 μL，振搖使其完全澄清，用0. 01 mol/L鹽酸溶液溶解并制成每1 mL中含20單位的溶液，作為含量供試品溶液。取200 μL 藥液與0.1 mol/L 200 μL Tris-鹽酸緩沖液[pH （8.2，25±1）℃]，混合，振搖，（25±1）℃放置1 h，用0.2 μm微孔濾膜濾過，取濾液，每1 mL加入0. 99 mol/L鹽酸溶液15 μL，作為可溶性賴脯胰島素供試品溶液，見表1。

3 總結(jié)與討論

該研究選取該公司生產(chǎn)的三批精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）和禮來公司的優(yōu)泌樂50，按照使用說明書，完全模擬臨床注射操作，按照體重75 kg，0.4 IU/（kg·d）的給藥劑量計(jì)算，選擇注射劑量為30 IU，并且選取了患者單次注射劑量100 μL （ 即10 IU） 作為小樣本量待測樣品溶液的體積。同時，為排除胰島素注射筆的注射精度對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，采用先注射出較大體積的藥液，再用微量移液槍吸取的方式，盡量排除可能引入的系統(tǒng)誤差，孫雪等[8]的研究發(fā)現(xiàn)小樣本量法及大樣本量法檢測同批次預(yù)混注射液，得到的結(jié)果無顯著區(qū)別，并符合方法學(xué)的驗(yàn)證，因此該次研究可以真實(shí)反映每只筆芯的實(shí)際含量。

該研究中的注射行程終點(diǎn)是依據(jù)萬邦筆的使用說明書“注射筆停止”的描述進(jìn)行確定。在預(yù)試驗(yàn)中考察了三批筆芯樣品的實(shí)際裝量，并檢測了注射至行程終點(diǎn)時殘余在筆芯中的藥液體積，依據(jù)上述數(shù)據(jù)最終確定注射至行程終點(diǎn)的取樣時間點(diǎn)，并最終選取了注射至行程終點(diǎn)前15 IU 處作為剩余藥液的混勻體積，以考察玻璃珠在筆芯內(nèi)的運(yùn)動空間減小后，樣品中的重組賴脯胰島素含量和可溶性重組賴脯胰島素是否穩(wěn)定和符合規(guī)定。結(jié)果表明，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在使用過程中和使用終末期含量和可溶性賴脯胰島素沒有顯著差異，并且含量和可溶性賴脯胰島素均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求（90.0%～105.0%與40.0%～ 55.0%），因此，精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在使用中和使用終末期可保證成分充分混勻。

由于該實(shí)驗(yàn)的溫度僅是模擬臨床使用藥常見的使用和保存溫度，不能代表其他特殊溫度條件。患者在使用過程中嚴(yán)格按照使用說明書操作時可以完全保證藥品的質(zhì)量。

在可溶性賴脯胰島素的檢測過程中，通過向藥液中加入tris緩沖液使部分與魚精蛋白物理吸附的可溶性重組賴脯胰島素達(dá)到解吸附的效果。混懸液中的晶體大小約為1～20 μm，0.2 μm 濾膜可將其完全濾過，從而使可溶性重組賴脯胰島素的檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

隨著精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）在臨床中的廣泛應(yīng)用，已經(jīng)有不少學(xué)者研究其在臨床應(yīng)用中的療效，但是對筆芯質(zhì)量控制及檢測使用中的筆芯質(zhì)量還沒有見報(bào)道[9-12]。該實(shí)驗(yàn)?zāi)M臨床使用精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）的操作及室溫保存條件，運(yùn)用高效液相色譜法測定胰島素含量，考察其在使用過程中的變化，為臨床開啟預(yù)混胰島素注射液后正確使用和保存提供依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Marateb HR， Mansourian M， Faghihimani E， et al. A hybrid intelligent system for diagnosing microalbuminuria in type 2 diabetes patients without having to measure urinary albumin[J]. Comput Biol Med， 2014， 45（7）： 34-42.

[2] 潘長玉，金文勝.2型糖尿病流行病學(xué)[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志，2005，21（5）：5S-1-5S-5.

[3] 王紅霞，梁秀芬，張玉敏，等.我國2型糖尿病的流行病學(xué)及危險(xiǎn)因素研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)雜志，2006，38（2）：156-159.

[4] Reviriego J， Herzmroach P. Improved glycamic control without increased risk of hypoglycaemia with a 25% insulin/lispro 75% NPL mixture twice daily compared with NPL twice daily in patients with Type2 diabetes[J].J Appl Ther Res， 2004， 4（5）：19-25.

[5] 林旋，郎江明，魏愛生，等.精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液對2型糖尿病患者糖代謝與免疫功能的影響及其炎癥機(jī)制研究[J].中國生化藥物雜志，2015（4）：144-146.

[6] 張宏穎，張廣穎，楊志霞.賴脯胰島素25治療2型糖尿病臨床觀察[J].河北醫(yī)藥，2011，33（12）：1827-1828.

[7] 張繼斌，陳勝業(yè)，郭貞臻.優(yōu)泌樂25在臨床治療2型糖尿病的療效觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2016，14（10）：132-133.

[8] 孫雪，黃元禮，馮曉明，等.小樣本量預(yù)混精蛋白重組人胰島素注射液的效價(jià)測定[J].藥物分析雜志，2011，31（10）：1987-1989.

[9] 艾新泉.優(yōu)泌林70/30和優(yōu)泌樂25治療2型糖尿病效果研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2012，21（19）：2108-2109.

[10] 岳建美，井慶平.優(yōu)泌樂50與優(yōu)泌樂25治療2型糖尿病療效觀察[J].山東醫(yī)藥，2012，52（1）：93-94.

[11] 彭永梅.優(yōu)泌樂25和優(yōu)泌林30R治療2型糖尿病臨床觀察[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2010，26（10）：1507-1508.

[12] 韋艷鴻，龐翠軍，肖常青.精蛋白鋅重組賴脯胰島素混合注射液（50R）強(qiáng)化治療初診2型糖尿病療效觀察[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2016，4（30）：407-408.

（收稿日期：2017-09-20）