半枝蓮不同采收期質(zhì)量綜合評價

張洪坤等

摘要 ?[目的]以多成分含量為指標(biāo)，掌握半枝蓮不同采收期質(zhì)量變化規(guī)律，確定半枝蓮藥材的最佳采收期。[方法]采用紫外-可見分光光度法測定不同采收期半枝蓮中總黃酮含量，高效液相色譜法同時測定野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素等多成分的含量，并以水溶性、醇溶性浸出物為評價指標(biāo)。[結(jié)果]不同采收期總黃酮、野黃芩苷的含量從大到小依次為7月、9月、5月，不同生長期含量從大到小依次為開花期、開花前、果實期。其他多成分指標(biāo)中，野黃芩苷及浸出物含量均以7月開花期采收的半枝蓮最高，而木犀草素、芹菜素含量則表現(xiàn)不同的規(guī)律。[結(jié)論]不同采收期半枝蓮中質(zhì)量差異明顯，建議應(yīng)以7月開花期為半枝蓮最佳采收期。

關(guān)鍵詞 ??半枝蓮;采收期;多成分

中圖分類號R282.4文獻標(biāo)識碼A文章編號0517-6611（2018）36-0172-04

半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）為唇形科黃芩屬植物的干燥全草[1]，夏、秋兩季莖葉茂盛時采挖，味辛、苦，寒，歸肺、肝、腎經(jīng)，具有清熱解毒、化瘀利尿的功效。近代藥理學(xué)研究表明，半枝蓮具有抗腫瘤、抗病原、抑菌、解熱、保肝等活性，臨床用于治療各種癌癥、肝炎、疔瘡腫毒、咽喉腫痛、跌撲傷痛、水腫、黃疸、毒蛇咬傷等，療效確切[2-5]。半枝蓮生于海拔2 000 m以下的水田邊和溪邊或濕潤草地上[6]，為多年生草本，一次種植可連續(xù)采收，一年可收割3～4次[7]。為掌握不同采收期半枝蓮質(zhì)量變化規(guī)律，筆者以半枝蓮藥材中野黃芩苷等多成分含量為指標(biāo)，監(jiān)測不同采收期質(zhì)量變化情況，以期為半枝蓮最佳采收期的確定提供試驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試材。半枝蓮分別于2017年5、7、9月期間采自安徽壽縣半枝蓮基地，均經(jīng)廣州香雪制藥股份有限公司連林生高級工程師鑒定為唇形科黃芩屬半枝蓮（Scutellaria barbata D.Don）的干燥地上部分。采樣時要求所有樣品均從同一種植區(qū)域采集，共分三茬采樣，盡量保證每批樣品均勻。不同采收期（開花前、開花中、結(jié)果期）視半枝蓮生長情況而定（開花前及結(jié)果期采樣時間大約間隔7 d，分別采收2批次，開花期即采收時每隔4 d采收，開花期共采收5批次）。并對每批次樣品進行統(tǒng)一方法加工，加工方式如下：收獲時用刀齊地割取全株，除去雜草、泥沙及枯萎的枝葉等雜質(zhì)，將鮮品半枝蓮均勻平鋪，曬干或陰干至水分合格即可（≤13.0%）。

1.1.2儀器。RHP-100型高速多功能粉碎機（浙江永康市榮浩工貿(mào)有限公司）;XS204型電子天平（d=0.1 mg，Mettler Toledo）;電熱套（500 mL，海寧市新華醫(yī)療器械廠）;HWS-26型電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;DHG-9245A電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）;TU-1901雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;Agilent-1200型高效液相色譜儀;YMC Hydrosphere C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.1.3試劑。甲醇（色譜純，Merck）;甲醇（AR，170212-1，西隴科學(xué)股份有限公司）;無水乙醇（AR，161004-1，西隴科學(xué)股份有限公司）;石油醚（60～90 ℃）（AR，20160801-2，廣州化學(xué)試劑廠）;磷酸（色譜純，阿拉?。?醋酸（AR，20150601-2，廣州化學(xué)試劑廠）;野黃芩苷（110842-201508，中國食品藥品檢定研究院，含量以91.3%計）;野黃芩素（MUST-1602204，成都曼斯特生物科技有限公司）;木犀草素（111520-201605，中國食品藥品檢定研究院，含量以99.6%計）;芹菜素（MUST-1606130，成都曼斯特生物科技有限公司）。

1.2方法

1.2.1浸出物含量測定。

1.2.1.1水溶性浸出物。取各半枝蓮樣品粗粉約4 g，精密稱定，置250 mL錐形瓶中，精密加水100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中、在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算供試品中水溶性浸出物的含量。

1.2.1.2醇溶性浸出物。取各半枝蓮樣品粗粉約2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中、在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量，計算供試品中醇溶性浸出物的含量。

1.2.2總黃酮含量測定。

1.2.2.1對照品溶液的制備。取野黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，即得。

1.2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。精密量取對照品溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL分別置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。以甲醇為空白，按照紫外-可見分光光度法（2015年版《中國藥典》 四部 通則0401），在335 nm的波長處分別測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2.3供試品溶液的制備。取本品粉末（過3號篩）約1 g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90 ℃）提取至無色，棄去醚液，藥渣揮去石油醚，加甲醇繼續(xù)提取至無色，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻即得。

1.2.2.4測定法。取供試品溶液，按照“1.2.2.2”方法，自“以甲醇為空白”起，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中野黃芩苷的重量（mg），計算，即得。

1.2.3多成分含量測定。

1.2.3.1色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗。色譜柱：YMC Hydrosphere C18（250 mm×4.6 mm，5μm）;檢測器：UV檢測器（335 nm）;以甲醇為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B，按表1中的規(guī)定進行梯度洗脫;柱溫為30 ℃;流速 1 mL/min。

1.2.3.2對照品溶液的制備。精密稱取野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素對照品適量，加甲醇制成每1 mL含野黃芩苷60 μg、野黃芩素4 μg、木犀草素5 μg、芹菜素8 μg的混合對照品溶液。

1.2.3.3供試品溶液的制備。精密稱取本品粉末（3號篩）0.2 g，置100 mL錐形瓶中，加70%乙醇25 mL，立即加熱回流15 min，冷卻至室溫。過濾，取濾液轉(zhuǎn)移于50 mL容量瓶中，重復(fù)提取1次，合并濾液，加70%乙醇至刻度，用0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

1.2.3.4線性關(guān)系的考察。取混合對照品溶液，按“1.2.3.1”色譜條件，分別吸取0.5、1.0、3.0、5.0、7.0、10.0 μL注入高效液相色譜儀進行測定。以峰面積（Y）為橫坐標(biāo)、進樣量（X）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸。

1.2.3.5

精密度試驗。取混合對照品溶液，按“1.2.3.1”色譜條件，重復(fù)進樣6次，記錄峰面積RSD。

1.2.3.6

穩(wěn)定性試驗。取同一份供試品溶液分別于配制0、2、4、6、8、10、12、16、20、24 h進行測定，記錄峰面積RSD。

1.2.3.7

重復(fù)性試驗。取同一批次樣品，按“1.2.3.3”方法制備6份供試品溶液，精密進樣10 μL，計算各多成分的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)和RSD。

1.2.3.8

加樣回收率試驗。精密稱取同一批次已知含量的樣品0.1 g，共6份，按1∶1加入野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素對照品適量，按“1.2.3.3”方法制備供試品溶液，按“1.2.3.1”色譜條件進樣10 μL，記錄峰面積，計算加樣回收率。

1.2.3.9測定法。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。

2結(jié)果與分析

2.1方法學(xué)考察

2.1.1

對照品與樣品的高效液相色譜峰圖。從圖1可以看出，在相同的色譜條件下，樣品在對照品相同出峰時間中均有相應(yīng)一個峰出現(xiàn)，且該條件下樣品中的目標(biāo)峰與相鄰峰的分離度較大，空白無干擾，說明此條件適合測定半枝蓮中野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素和芹菜素的含量。

2.1.2線性關(guān)系的考察。以峰面積（Y）為橫坐標(biāo)、進樣量（X）為縱坐標(biāo)，分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，具體結(jié)果見表2。結(jié)果表明，野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素在相應(yīng)濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.3精密度試驗。按照“1.2.3.5”方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素和芹菜素的峰面積RSD分別為0.1%、0.1%、0.1%、0.3%，表明儀器精密度良好。

2.1.4穩(wěn)定性試驗。按照“1.2.3.6”方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素和芹菜素的峰面積RSD分別為0.5%、2.1%、1.4%、0.8%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.5重復(fù)性試驗。按照“1.2.3.7”方法操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素的平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為0.775%、0.035%、0.063%、0.103%，RSD分別為1.1%、2.0%、1.7%、1.3%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.6加樣回收率試驗。從表3可以看出，野黃芩苷、野黃芩素、木犀草素、芹菜素的平均加樣回收率分別為100.8%、95.3%、95.2%和92.1%，RSD分別為1.7%、1.2%、1.5%、1.4%，表明該方法回收率較好，方法可行。

注：a.對照品;b.供試品;c.空白對照;1.野黃芩苷;2.野黃芩素;3.木犀草素;4.芹菜素

Note：a.Standard;b.Sample;c.Blank control;1.Scutellarin;2.Scutellarein;3.Luteolin;4.Apigenin

2.2含量測定方法確定并驗證后，取不同采收期半枝蓮樣品進行各指標(biāo)含量測定，結(jié)果表明（表4），總黃酮含量均符合2015年版《中國藥典》要求，可見該產(chǎn)地采收期內(nèi)半枝蓮總黃酮含量符合要求，其中7月采收期含量顯著高于5月、9月采收期，5月與9月采收期含量差別不大，從大到小總體表現(xiàn)為7月、9月、5月;多成分含量測定中，7月、9月采收期野黃芩苷含量均顯著高于5月采收期，而野黃芩素、木犀草素含量比較中，9月采收的則明顯高于5月、7月，5月與7月間無顯著差異;而芹菜素的含量則相反，5月采收的則明顯高于7月、9月。浸出物含量比較中，無論是水溶性浸出物還是醇溶性浸出物，7月采收期與另外2者均有顯著性差異，含量顯著高于5月、9月采收期。按生長期比較，不同月份采收期中，開花期各指標(biāo)綜合含量均較開花前、結(jié)果期高，開花前與結(jié)果期則均差別不大。

3討論

半枝蓮為多年生草本，生長過程中幾乎無病害發(fā)生，易種易管，一次種植可連續(xù)采收，一年可收割3～4次，而由于2018年安徽壽縣半枝蓮基地入冬早，雨水不充足，第四茬半枝蓮生長速度放緩，長勢矮小，莖枝細(xì)小，產(chǎn)量降低，因此并未采收比較。據(jù)統(tǒng)計，半枝蓮不同采收期中第一茬生長期長，枝葉最為粗壯，產(chǎn)量最高，占全年產(chǎn)量的50%。二茬產(chǎn)量占30%，三茬四茬產(chǎn)量在20%。

通過分析比較發(fā)現(xiàn)，藥典規(guī)定指標(biāo)中，不同采收期總黃酮的含量從大到小總體依次為7月、9月、5月，不同生長期含量從大到小總體依次為開花期、開花前、果實期。其他多成分指標(biāo)中，野黃芩苷及浸出物含量均以7月開花期采收的半枝蓮最高，而木犀草素、芹菜素含量則表現(xiàn)不同的規(guī)律，其中木犀草素隨著月份的增加，含量明顯增高，芹菜素含量則相反，頭茬半枝蓮含量最高，但與7月采收期均差別不大?？梢?個采收時間的半枝蓮以7月開花期的綜合質(zhì)量最高，該結(jié)果與文獻報道基本一致[8-10]，這可能與植物的光照、溫度、濕度等因素有關(guān)，該時期陽光、雨水均充足，莖葉最為茂盛，而不同生長期比較中，開花期期間莖葉最為茂盛，有效成分較為豐富。因此建議于各茬開花期期間采收半枝蓮。

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