非對(duì)稱場流分離檢測(cè)鮑內(nèi)臟多糖

朱曉培　簡文杰　侯夢(mèng)然

摘要[目的]建立非對(duì)稱場流分離檢測(cè)鮑內(nèi)臟多糖的方法。[方法]采用非對(duì)稱場流分離系統(tǒng)與靜態(tài)光散射、光電二極管陣列和示差折光檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)分離表征鮑內(nèi)臟多糖。以0.05 mol/L NaNO3 [含0.02%（W/V）NaN3] 為流動(dòng)相，研究橫向流速和樣品濃度對(duì)非對(duì)稱場流分離多糖的影響，并利用動(dòng)靜態(tài)光散射測(cè)量鮑內(nèi)臟多糖的分子特性（分子量、均方根旋轉(zhuǎn)半徑、分子構(gòu)象、流體力學(xué)半徑）。[結(jié)果]不同橫向流速對(duì)多糖的分離表征有顯著影響；一定范圍內(nèi)，不同多糖濃度對(duì)分離效果及分子特性結(jié)果無顯著差異。鮑內(nèi)臟多糖分子量為（25.40±1.78）kD，均方根旋轉(zhuǎn)半徑為（16.70±0.30）nm，流體力學(xué)半徑為（143.23±15.49）nm，分子為無規(guī)則線團(tuán)構(gòu)象。[結(jié)論]非對(duì)稱場流技術(shù)適用于鮑內(nèi)臟多糖的分離檢測(cè)。

關(guān)鍵詞非對(duì)稱場流；鮑內(nèi)臟多糖；分離表征；動(dòng)靜態(tài)光散射

中圖分類號(hào)S917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2018）28-0164-03

Detection of Polysaccharide from Abalone Viscera by Asymmetrical Flow FieldFlow Fractionation

ZHU Xiaopei1，2，JIAN Wenjie2，HOU Mengran1 et al

（1. Fisheries College of Jimei University，Xiamen，F(xiàn)ujian 361021；2.Nutrition and Food Safety Research Office of Xiamen Medical College，Xiamen，F(xiàn)ujian 361021）

Abstract[Objective] To establish an asymmetric flow fieldflow fractionation （AF4） method for the detection of polysaccharide from abalone viscera （AV）. [Method]AF4 technique was used to isolate polysaccharide from AV coupled with static light scattering device， photodiode array and differential refractive index detector. The effect of varying the cross flow and sample concentration on AF4 had been studied where 0.05 mol/L NaNO3 and 0.02%（W/V） NaN3 aqueous solution as carrier phase. The molecular characteristics （weightaverage molar mass （Mw）， root mean square radius （RMS）， molecular conformation， hydrodynamic radius） of polysaccharide from AV were measured by dynamic and static light scattering. [Result]The different cross flow had a significant effect on the determination of polysaccharide separation. Within a certain range， there was no significant difference in the separation effect and molecular property results between different polysaccharide concentrations.The Mw， RMS and hydrodynamic radius of polysaccharide from AV were （25.40±1.78） kDa， （16.70 ±0.30） nm and （143.23±15.49） nm， respectively. And the molecular conformation was random coil. [Conclusion] The AF4 is suitable for the separation and detection of polysaccharide from abalone viscera.

Key wordsAsymmetrical flow fieldflow fractionation；Polysaccharide from abalone viscera；Separation and characterization；Dynamic and static light scattering

基金項(xiàng)目國家海洋局海洋公益性行業(yè)科研專項(xiàng)（201405016）；福建省高等學(xué)校新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃項(xiàng)目（20170008）；福建省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2017D0009）；福建省科技引導(dǎo)性項(xiàng)目（2016N0022）。

非對(duì)稱場流分離技術(shù)（asymmetrical flow field flow fractionation，AF4）是用于顆粒分離及表征的技術(shù)[1]，是一種基于流動(dòng)的分離方法，結(jié)合了色譜和場驅(qū)動(dòng)技術(shù)的基本要素，樣本在外加垂直于層流方向的場力作用下，不同尺寸的被分離物層流層與通道壁的距離不同，具有不同的淋洗速度而達(dá)到分離的目的[2]。AF4無需固定相和填充物，具有較低的壓力和剪切力，有助于保護(hù)脆弱的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，減少大分子降解[3-4]，最大限度地保護(hù)樣品的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性[5]，可快速高分辨率地分離1 nm～100 μm的樣品。由于AF4技術(shù)分離條件溫和且表征范圍廣，因此被廣泛應(yīng)用于牛血清蛋白[6]、透明質(zhì)酸[7]、淀粉[8]、脂蛋白[9]和脂質(zhì)體[10]等生物顆粒和生物分子的分離檢測(cè)。在生物分析領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力[11]。

3結(jié)論

通過非對(duì)稱場流分離系統(tǒng)與靜態(tài)光散射、光電二極管陣列和示差折光檢測(cè)器聯(lián)用技術(shù)分離表征鮑內(nèi)臟多糖，發(fā)現(xiàn)其分子量為（25.40±1.78）kD，均方根旋轉(zhuǎn)半徑為（16.70±0.30）nm，流體力學(xué)半徑為（143.23±15.49）nm，分子為無規(guī)則線團(tuán)構(gòu)象，與前期采用GPC-MALLS分離表征鮑內(nèi)臟多糖結(jié)果相似[20]，樣品處理與操作過程簡便，分離條件更加溫和且用時(shí)短。因此，AF4適用于鮑內(nèi)臟多糖的分離檢測(cè)。

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