皖南煙區(qū)不同時期雜草中煙草普通花葉病毒檢測與分析

嚴丹侃　姜超強　周鳳艷

摘要[目的]明確安徽省煙草不同種植時期煙田雜草攜帶煙草普通花葉病毒的情況。[方法]采集安徽省皖南煙區(qū)煙田3個不同時期的17科35種雜草，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法（DAS-ELISA）檢測煙草普通花葉病毒。[結(jié)果]煙田不同時期多種雜草均攜帶煙草普通花葉病毒，且不同時期采集的雜草中煙草普通花葉病毒感染率分別為煙草收獲期66.7%，煙田空閑期28.6%，煙草種植前期25.0%。菊科雜草帶毒率較高，是該病毒的重要寄主。通過雜草汁液摩擦接種試驗得出，不同時期雜草中攜帶的煙草普通花葉病毒均可侵染健康煙苗產(chǎn)生煙草花葉病，并造成危害。[結(jié)論]該研究為煙田雜草攜帶煙草普通花葉病毒病的綜合防治提供理論依據(jù)。

關鍵詞煙田雜草；煙草普通花葉病毒；煙草；皖南煙區(qū)

中圖分類號S435.72文獻標識碼A文章編號0517-6611（2018）28-0137-03

Detection and Analysis of Tobacco Mosaic Virus in Main Weeds of Tobacco Fields in the South of Anhui Province

YAN Dankan1， JIANG Chaoqiang2， ZHOU Fengyan1 et al

（1. Institute of Plant Protection and AgroProducts Safety， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Heifei，Anhui 230031；2.Tobacco Research Institute， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei，Anhui 230031）

Abstract[Objective] To explore the weeds infected with tobacco mosaic virus in tobacco fields of Anhui Province. [Method]We detected 35 species weeds belonging to 17 families that were collected in 3 tobacco fields in the south of Anhui Province by DASELISA method. [Result] The tobacco mosaic virus（TMV） could be infected by the tobacco mosaic virus in different periods and the TMV were detected 66.7%，28.6%and 25.0% of the samples in tobacco harvest period， tobacco field free period and tobacco planting period， respectively. The most species of the detected weeds were infected by TMV belong to the weeds of the composite family. Healthy tobacco seedling could be infected by TMV through the mechanical friction of the juice of the infected weeds by TMV. [Conclusion] The results provide the theoretical basis for integrative control of tobacco mosaic virus.

Key wordsWeeds in tobacco fields；Tobacco mosaic virus；Tobacco；The south of Anhui Province

煙草普通花葉病毒是引起煙草花葉病的主要病原，其危害造成煙葉品質(zhì)下降，產(chǎn)量降低[1-2]。煙草普通花葉病毒的檢測主要包括生物學檢測方法[3]、電鏡檢測方法[4]、血清學檢測方法[5]和分子生物學檢測方法[6]。煙草普通花葉病毒寄主范圍廣泛，在多種植物上均可寄生[7-8]，而雜草是一類煙田中普遍存在的有害生物，目前研究集中于田間雜草的種類、危害[7-8]和防治方法[9-10]，以及雜草攜帶病毒的調(diào)查[11-12]，但煙田不同種植時期雜草攜帶病毒情況，雜草中所攜帶病毒是否對雜草造成危害，對煙草種植是否產(chǎn)生影響尚不清楚。筆者對采自安徽主要煙區(qū)的雜草進行病毒檢測，以期為該病毒的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

供試煙草品種為云煙87，由安徽省農(nóng)業(yè)科學院煙草研究所提供。

1.2雜草樣本采集

在煙草種植的3個關鍵時期（2015年7月煙草收獲期、2016年1月煙田空閑期、2016年3月煙草種植期），分別對皖南煙區(qū)煙田雜草進行采集。將采集的雜草用樣品袋裝好并做好記錄帶回室內(nèi)存放于-20 ℃冰箱內(nèi)，用于病毒檢測。

1.3雜草樣本鑒定

將采集到的雜草進行種類鑒定[13]，選取部分雜草葉片進行檢測。

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（DAS-ELISA）[14]病毒檢測血清試劑盒（美國阿格迪（agdia）公司）。選取的目標病毒為煙草普通花葉病毒（TMV）。

1.4接種方法

2016年3月25日移栽健康煙苗，4月8日使用雜草汁液對煙株進行煙草普通花葉病毒接種，2016年4月26日觀察結(jié)果、取樣并檢測。采用汁液摩擦接種方法分別接種，以患煙草普通花葉病的煙葉為陽性對照，接種前將攜帶煙草普通花葉病毒的雜草和煙草各100 g，放入已消毒的研磨袋中，加入 100 mL超純水研磨，吸取汁液用于接種，每個重復接種2株煙。煙株管理措施按優(yōu)質(zhì)烤煙栽培生產(chǎn)技術規(guī)范，每次澆水和施肥均認真消毒，避免交叉感染。

2結(jié)果與分析

2.1不同時期雜草煙草普通花葉病毒檢測結(jié)果

采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法對皖南煙區(qū)煙田的43種雜草樣本進行檢測，其中包括3個關鍵時期，即2015年7月煙草收獲期的雜草15種，2016年1月煙田空閑期的雜草7種，2016年3月煙草種植期的雜草21種。檢測結(jié)果表明，煙草收獲期煙草普通花葉病毒感染率最高為66.7%，其次為煙田空閑期的煙草普通花葉病毒感染率28.6%，煙草種植期煙草普通花葉病毒感染率最低為25.0%（表1）。

2.2不同種類雜草煙草普通花葉病毒檢測結(jié)果

所采集雜草共17科35種，不同時期雜草種類差異較大，煙草普通花葉病毒的感染率也有所不同。煙草收獲期煙田雜草包括8科15種雜草，其中菊科6種，且全部攜帶煙草普通花葉病毒，是此時期該病毒的主要寄主。此外，蓼科的酸模葉蓼、莎草科的黃穎莎草、?？频臉嫎?、唇形科的荔枝草均檢出煙草普通花葉病毒，而禾本科的3種雜草未檢出。煙田空閑期為冬季，煙田雜草數(shù)量較少，所采集7種雜草分布于5個科，其中菊科鼠麴草中檢出煙草普通花葉病毒。煙草種植期的雜草最多，包括14個科20種雜草。菊科4種，其中3種攜帶煙草普通花葉病毒，是該時期病毒的主要寄主，此外禾本科看麥娘和牻牛兒苗科野老鸛也檢測出該病毒（表1）。

2.3不同時期雜草攜帶煙草普通花葉病毒的致病性檢測結(jié)果

分別選取不同時期攜帶煙草普通花葉病毒的雜草進行接種，包括煙草收獲期唇形科荔枝草、煙田空閑期菊科鼠麴草和煙草種植期菊科小飛蓬，表明接種攜帶煙草普通花葉病毒的雜草汁液可以造成煙苗感染煙草普通花葉病毒，表現(xiàn)花葉病毒病癥狀，且通過雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法病毒檢測接種煙草葉片為陽性，這表明不同時期攜帶煙草普通花葉病毒的雜草均具有致病性（圖1）。

3結(jié)論與討論

該研究通過對安徽省池州市東至縣煙草田不同種植時期17科35種雜草的煙草普通花葉病毒的血清學（ELISA）檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)煙田不同種植期的雜草中均攜帶煙草普通花葉病毒，且該病毒在菊科、蓼科、莎草科、?？啤⒋叫慰?、禾本科和牻牛兒苗科雜草中均有攜帶，表明該病毒在煙田雜草中存在時間長，雜草寄主廣泛。此外，煙田不同種植時期之間帶毒率存在顯著差異，其中煙草收獲期的帶毒率最高，這可能與煙田收獲后，煙稈還田增加了煙田中普通花葉病毒基數(shù)，導致雜草帶毒率高。對該試驗檢測結(jié)果進一步分析發(fā)現(xiàn)，不同雜草之間帶毒率存在差異，其中菊科雜草種類最多，且?guī)Ф韭首罡?。通過攜帶煙草普通花葉病毒的雜草汁液摩擦接種健康煙草，發(fā)現(xiàn)煙草不同種植時期的煙田雜草中攜帶的煙草普通花葉病毒均具有侵染性，可以侵染健康煙苗，影響煙草品質(zhì)。

該研究結(jié)果表明，煙草不同種植時期的多種煙田雜草是煙草普通花葉病毒的中間寄主，且雜草中的病毒可以侵染健康煙苗，造成危害。因此，及時清除田間雜草，不僅可以減輕雜草本身危害，還可以減輕田間病毒病原數(shù)量，從而達到減輕煙田煙草普通花葉病毒病危害的目的。但不同時期煙田雜草帶毒率存在差異，防控雜草以減輕病毒病的發(fā)生程度，仍需要進一步研究。

46卷28期嚴丹侃等皖南煙區(qū)不同時期雜草中煙草普通花葉病毒檢測與分析

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