茄葉斑鳩菊的化學(xué)成分研究

史茹茹，史資，陳新，章慧

摘要 [目的]研究茄葉斑鳩菊的化學(xué)成分。[方法]利用硅膠色譜、大孔樹脂層析、Sephadex LH-20和ODS反相層析等方法，對茄葉斑鳩菊提取物進(jìn)行分離純化，并根據(jù)理化性質(zhì)和波譜數(shù)據(jù)鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。[結(jié)果]從茄葉斑鳩菊中分離得到了6個神經(jīng)酰胺類化合物，分別鑒定為1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，8E）-2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino] -8-octadecene -1，3-diol、1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）- 2-hydroxypalmitoyl amino]-8 -octadecene-1，3，4-triol、Soya cerbroside I、 （2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxy tetracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol、（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol、（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypentracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol。[結(jié)論]6個化合物均為首次從該植物中分離得到，為茄葉斑鳩菊活性成分的開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 斑鳩菊屬；茄葉斑鳩菊；化學(xué)成分；神經(jīng)酰胺；分離純化

中圖分類號 R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 0517-6611（2018）06-0176-03

Study on Chemical Constituents of Vernonia solanifolia

SHI Ruru，SHI Zi，CHEN Xin et al （School of Biology and Pharmaceutical Engineering，Wuhan Polytechnic University，Wuhan，Hubei 430023）

Abstract [Objective] The research aimed to study the chemical components of Vernonia solanifolia.[Method]The components were isolated and purified by silica gel chromatography，macroporous resin chromatography，Sephadex LH-20 and ODS reverse phase chromatography and other methods，and the structure of the compound was identified by physicochemical properties and spectroscopic data.[Result]Six ceramide compounds were isolated from Vernonia solanifolia，and their structure were identified as 1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，8E）-2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino] -8-octadecene -1，3-diol；1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）- 2-hydroxypalmitoyl amino]-8 -octadecene-1，3，4-triol；Soyacerbroside I；（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxy tetracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol；（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol；（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypentracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol.[Conclusion]Six compounds were isolated from Vernonia solanifolia for the first time，which laid the foundation for the development and utilization of the active ingredients of Vernonia solanifolia.

Key words Vernonia；Vernonia solanifolia；Chemical constituents；Ceramide；Separation and purification

茄葉斑鳩菊（Vernonia solanifolia）是菊科斑鳩菊屬的植物，又名白花毛桃、咸蝦菊、涼藤、過山龍等，全草入藥，治腹痛、腸炎、痧氣等癥。該屬植物約1 000種，主產(chǎn)熱帶地區(qū)。我國有30余種，分布在西南至東南部和臺灣[1]。該屬植物我國民間作為草藥入藥，全草藥用，具有發(fā)表散寒、清熱止瀉的作用，可治療急性腸胃炎、風(fēng)熱感冒、頭痛、瘧疾等癥[2]；美洲該屬植物被用作驅(qū)蟲、抗瘧植物藥，療效顯著。國內(nèi)外學(xué)者曾對該屬植物的化學(xué)成分有較多研究，發(fā)現(xiàn)主要成分為倍半萜類、三萜、黃酮、甾體、揮發(fā)油等，這些成分展現(xiàn)了多方面的藥理活性，如抗腫瘤、抗真菌、抗瘧等[3]。史資等[4]對茄葉斑鳩菊提取物活性進(jìn)行了評價，發(fā)現(xiàn)該植物全草甲醇提取物具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性和抗氧化活性。但有關(guān)茄葉斑鳩菊的化學(xué)成分研究較少，為了發(fā)現(xiàn)抗腫瘤活性物質(zhì)，筆者對茄葉斑鳩菊甲醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 茄葉斑鳩菊全草采集于中國福建，由福建省亞熱帶植物研究所陳華良博士鑒定為Vernonia solanifolia，藥材標(biāo)本保存于武漢輕工大學(xué)天然產(chǎn)物資源開發(fā)與利用研究室。

1.2 儀器與試劑 Bruker AV 400型核磁共振波譜儀（瑞士布魯克公司）；十萬分之一分析天平（日本島津公司，AUWl20D）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州丹瑞實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司，HH-D4）；柱層析硅膠（100～200目，青島海洋化工廠）；MCI GEL CHP 20P （日本三菱化學(xué)公司）；D101大孔吸附樹脂（天津興南允能高分子技術(shù)有限公司）；ODS中壓色譜柱填料（日本YMC公司）；Sephadex LH-20 （Pharmacia 公司）；化學(xué)試劑均為分析純（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 試驗(yàn)方法 茄葉斑鳩菊全草5 kg，粉碎，以95%乙醇加熱回流提取3次，將提取液合并濃縮至無醇味，加水混懸，依次用石油醚、正丁醇萃取，得石油醚部位浸膏200 g，正丁醇部位浸膏300 g。

石油醚部位浸膏，采用硅膠柱層析，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫，通過TLC檢測合并后得到4個組分（Fr I～I(xiàn)V）。Fr III經(jīng)D101大孔吸附樹脂乙醇梯度洗脫，反復(fù)硅膠柱層析、反相ODS柱層析和凝膠柱層析進(jìn)行分離純化，得到3個化合物，分別為化合物4（9.5 mg）、化合物5（12.8 mg）、化合物6（16.8 mg）。正丁醇部位浸膏，經(jīng)硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度洗脫），通過TLC檢測合并后得到3個組分Fr 1～3，F(xiàn)r 2經(jīng)過MCI樹脂（甲醇-水梯度洗脫），硅膠柱層析（氯仿-甲醇梯度洗脫）、反相柱層析（甲醇-水梯度洗脫）以及凝膠柱層析（甲醇洗脫）進(jìn)行分離純化，得化合物1（18.8 mg）、化合物2（21.2 mg）和化合物3（14.9 mg）。

2 結(jié)果與分析

試驗(yàn)分離得到的6個化合物的結(jié)構(gòu)見圖1，化合物1～6經(jīng)過核磁共振波譜技術(shù)測定，與參考文獻(xiàn)進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)6個化合物均為神經(jīng)酰胺類化合物，且均為首次從該植物中分離得到。

2.1 化合物1 白色膠狀固體，ESI-MS m/z：716 [M+H]+，分子式為 C40H77NO9。1H-NMR（DMSO-d6，400MHz） δ：7.49 （1H，d，J=9.0Hz，NH），5.36 （2H，m，H-8，9），4.13 （1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），3.91 （1H，m，H-1a），3.86 （1H，m，H-2′），3.78 （1H，m，H-2），3.68 （1H，dd，J=10.0，6.0 Hz，H-6″a），3.58 （1H，dd，J=10.0，3.8 Hz，H-1b），3.46 （1H，m，H-3），3.41 （1H，m，H-6″b），3.16 （1H，m，H-3″），3.12 （1H，m，H-5″），3.06 （1H，m，H-4″），2.96 （1H，m，H-2″），1.94 （4H，m，H-7，10），1.56 （4H，m，H-3′，4′），1.55 （2H，m，H-5），1.27 （2H，m，H-4），1.20～1.38 （16H，m，H-6，11-15，16，17），1.20～1.38 （22H，m，H-5′-15′），0.86 （6H，t，J=7.0 Hz，H-18，16′）；13C-NMR （DMSO-d6，100 MHz） δ：174.6 （C-1′），131.0 （C-8），128.7 （C-9），104.8 （C-1″），77.8 （C-3″），77.5（C-5″），74.4 （C-2″），71.9 （C-2′），70.5 （C-3），70.5 （C-4″），70.0 （C-1），62.0 （C-6″），53.6 （C-2），35.3 （C-3′），34.3 （C-4），33.0（C-7），32.8 （C-10），32.1 （C-16），32.1 （C-14′），28.0～29.5 （C-6，11-15），28.0-29.5 （C-5′-13′），25.6 （C-4′），25.1 （C-5），23.2 （C-17，15′），14.7（C-18，16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道的化合物1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，8E）-2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]-8-octadecene-1，3-diol基本一致。

2.2 化合物2 白色膠狀固體，ESI-MS m/z：732[M+H]+，分子式為C40H77NO10。1H-NMR（DMSO-d6，400MHz） δ：7.51 （1H，d，J=9.0 Hz，NH），5.38 （2H，m，H-8，9），4.14 （1H，d，J=8.0 Hz，H-1″），4.10 （1H，m，H-2），3.85 （1H，m，H-2′），3.80 （1H，m，H-1a），3.69 （1H，m，H-6″a），3.66 （1H，m，H-1b），3.37 （1H，m，H-3），3.44 （1H，m，H-6″b），3.35 （1H，m，H-4），3.14 （1H，m，H-3″），3.10 （1H，m，H-5″），3.04 （1H，m，H-4″），2.94 （1H，m，H-2″），1.93 （4H，m，H-7，10），1.49 （4H，m，H-3′，4′），1.19～1.36 （16H，m，H-5，6，11-17），1.19-1.36 （22H，m，H-5′-15′），0.88 （6H，t，J=7.0 Hz，H-18，16′）；13C-NMR （DMSO-d6，100 MHz） δ：174.7 （C-1′），131.2 （C-8），130.8 （C-9），104.6 （C-1″），77.8 （C-3″），77.5（C-5″），75.1 （C-4），74.4 （C-2″），71.9 （C-2′），71.5 （C-3），70.9 （C-4″），69.8 （C-1），62.0 （C-6″），50.8 （C-2），35.5 （C-3′），33.2 （C-7），32.9 （C-10），32.2 （C-16，14′），29.5～30.0 （C-6，11-15），29.5～30.0 （C-5′-13′），26.4 （C-5），25.3 （C-4′），23.0 （C-17，15′），14.9 （C-18，16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報道的化合物1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]- 8-octadecene-1，3，4-triol基本一致。

2.3 化合物3 白色無定型粉末，ESI-MS m/z：737 [M+Na]+，分子式為C40H75NO9。1H-NMR（C5D5N，400MHz） δ：8.39 （1H，d，J=9.0 Hz，NH），5.98 （2H，m，H-5，9），5.48 （2H，m，H-4，8），4.94 （1H，d，J=7.6 Hz，H-1″），4.52 （1H，m，H-6′b），4.39 （1H，m，H-6′a），4.26 （2H，m，H-1a，3″），4.23 （2H，m，H-1b，4″），4.07 （3H，m，H-2，3，2′），3.92 （2H，m，H-2′，5″），2.15 （4H，s，H-6，7），1.98 （2H，m，H-10），1.72 （2H，m，H-3′），1.38 （2H，m，H-4′），1.20～1.36 （14H，m，H-11-17），1.20～1.38 （22H，m，H-5′-15′），0.87 （6H，t，J=7.0 Hz，H-18，16′）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz） δ：174.6 （C-1′），131.6 （C-5），131.2 （C-9），130.2 （C-4），129.5 （C-8），104.5 （C-1″），77.4 （C-3″），77.1 （C-5″），74.1 （C-2″），71.6 （C-2′），70.3 （C-3），70.3 （C-4″），69.1 （C-1），61.8 （C-6″），53.7 （C-2），34.8 （C-3′），33.9 （C-10），33.3 （C-6），33.2 （C-7），29.4～30.1 （C-11-16），29.4～30.1 （C-5′-14′），24.8 （C-4′），22.1 （C-17，15′），13.5 （C-18，16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報道的化合物Soya cerbroside I基本一致。

2.4 化合物4 白色粉末，ESI-MS m/z：682[M+H]+，分子式為C42H83NO5。1H-NMR（C5D5N，400MHz） δ：8.95 （1H，d，J=8.6 Hz，NH），5.79 （2H，m，H-8，9），5.31 （1H，m，H-2），4.96 （1H，m，H-2′），4.86 （1H，dd，J=10.6，4.7 Hz，H-1a），4.75 （1H，dd，J=10.6，4.7 Hz，H-1b），4.65 （1H，m，H-4），4.71 （1H，m，H-3），1.60～1.65 （14H，m，H-11-17），1.60-1.65 （38H，m，H-4′-23′），1.21 （6H，t，J=6.5 Hz，H-18，24′）；13C-NMR （C5D5N，100 MHz） δ：175.6 （C-1′），131.6 （C-9），131.4 （C-8），75.8 （C-3），71.8 （C-4），71.4 （C-2′），61.1 （C-1），52.3 （C-2），34.6 （C-3′），32.8 （C-5），32.1 （C-10），31.8 （C-7），25.9 （C-6），31.4 （C-16，22′），29.1～31.2 （C-11-15），29.1～31.2 （C-5′-21′），24.6 （C-4′），22.1 （C-17，23′），13.2 （C-18，24′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報道的化合物（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxytetracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol基本一致。

2.5 化合物5 白色無定形粉末，ESI-MS m/z：570[M+H]+，分子式為C34H67NO5。1H-NMR（C5D5N，400MHz） δ：8.62 （1H，d，J=8.5 Hz，NH），5.61 （2H，m，H-8，9），5.06 （1H，m，H-2），4.59 （1H，m，H-2′），4.51 （1H，dd，J=10.6，4.6 Hz，H-1a），4.32 （1H，dd，J=10.6，4.6 Hz，H-1b），4.21 （2H，m，H-3，4），2.18 （4H，m，H-3′，5），1.98 （6H，m，H-6，7，10），1.65 （4H，m，H-15′，17），1.20～1.38 （22H，m，H-4′-14′），1.20～1.38 （12H，m，H-11-16），0.89 （6H，t，J=6.5 Hz，H-18，16′）；13C-NMR （C5D5N，100 MHz） δ：174.3 （C-1′），131.5 （C-9），131.2 （C-8），75.5 （C-3），71.6 （C-2′），71.0 （C-4），60.7 （C-1），51.6 （C-2），34.6 （C-3′），32.5 （C-5），32.0 （C-6），31.7 （C-4′），30.8 （C-7，10），26.8～30.1 （11-16），26.8～30.1 （5′-14′），21.6 （C-17，15′），13.2 （C-18，16′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的化合物 （2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol基本一致。

2.6 化合物6 白色無定形粉末，ESI-MS m/z：696[M+H]+，分子式為C43H85NO5。1H-NMR（C5D5N，400 MHz） δ：8.65 （1H，d，J=8.6 Hz，NH），5.59 （1H，m，H-8），5.56 （1H，m，H-9），5.15 （1H，m，H-2），4.67 （1H，m，H-2′），4.56 （1H，m，H-1a），4.49 （1H，m，H-1b），4.40 （1H，m，H-4），4.35 （1H，m，H-3），2.33 （2H，m，H-6），2.29 （2H，m，H-3′a），2.23 （2H，m，H-10），2.09 （2H，m，H-3′b），2.07 （2H，m，H-7），2.03 （2H，m，H-5），1.80 （2H，m，H-4′），1.25～1.38 （14H，m，H-11-17），1.25～1.38 （40H，m，H-5′-24′），0.86 （6H，t，J=6.7 Hz，H-18，25′）；13C-NMR （C5D5N，100MHz） δ：174.3 （C-1′），129.9 （C-9），129.6 （C-8），75.9 （C-3），71.9 （C-4），71.5 （C-2′），61.0 （C-1），52.0 （C-2），34.7 （C-3′），33.2 （C-5），32.8 （C-6），32.3 （C-10），32.0 （C-7），25.7 （C-4′），22.0～31.1 （11-17），22.0～31.1 （5′-24′），13.2 （C-18，25′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報道的化合物 （2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypentracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol基本一致。

3 結(jié)論

該研究通過系統(tǒng)分離純化，從茄葉斑鳩菊全草提取物中分離鑒定了6個神經(jīng)酰胺類化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定分別為1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3R，8E）-2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino] -8-octadecene -1，3-diol、1-O-β-D-glucopyranosyl-（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）- 2-hydroxypalmitoyl amino]-8 -octadecene-1，3，4-triol、Soya cerbroside I、 （2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxy tetracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol、（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypalmitoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol、（2S，3S，4R，8E） -2-[（2′R）-2-hydroxypentracosanoyl amino]-8-octadecene-1，3，4-triol。經(jīng)檢索，6個化合物均為首次從該植物中分離得到，該類化合物具有顯著的抗腫瘤、抗HIV、抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗菌、抗炎等活性[10-12]。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國科學(xué)院《中國植物志》編輯委員會.中國植物志[M].北京：科學(xué)出版社，1985：47，74.

[2] 劉清華，楊峻山，索茂榮.斑鳩菊屬的倍半萜內(nèi)酯類及甾體皂苷類化學(xué)成分及藥理活性研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2007，32（1）：10-17.

[3] 孫力，巴玉蘭，于魯海，等.斑鳩菊屬植物藥理活性研究進(jìn)展[J].新疆中醫(yī)藥，2009，27（6）：82-85.

[4] 史資，陳新，劉梁.DPPH法測定茄葉斑鳩菊不同極性部位的抗氧化活性[J].食品研究與開發(fā)，2017，38（9）：19-21.

[5] LING T J，XIA T，WAN X C，et al.Cerebrosides from the roots of Serratula chinensis[J].Molecules，2006，11（9）：677-683.

[6] SHIBUYA H，KAWASHIMA K，SAKAGAMI M，et al.Sphingolipids and glycerolipids.I.Chemical structures and ionophoretic activities of soyacerebrosides I and II from soybean[J].Chem Pharm Bull，1990，38（11）：2933-2938.

[7] 酈皆秀，李進(jìn)，徐麗珍，等.西藏產(chǎn)冬蟲夏草化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志，2003，38（7）：499-501.

[8] KANG S S，KIM J S，XU Y N，et al.Isolation of a new cerebroside from the root bark of Aralia elata[J].J Nat Prod，1999，62（7）：1059-1060.

[9] 李彬，曾金香，李晶，等.杭白芍的化學(xué)成分[J].藥學(xué)與臨床研究，2009，17（3）：204-206.

[10] FATTORUSSO E，MANGONI A.Progress in the chemistry of natural products[M].New York：Springer Wien，1997：215-301.

[11] YOSHIDA H，IKEADA K，ACHIWA K，et al.Synthesis of sulfated cerebroside analogs having mimicks of ceramide and their antihuman immunodeficiency virus type I activities[J].Chem Pharm Bull，1995，43（4）：594-602.

[12] GARG H S，SHARMA M，BHAKUNI D S，et al.An antiviral sphingosine derivative from the green alga Ulva fasciata[J].Tetrahedron letters，1992，33（12）：1641-1644.