萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合對(duì)煙草根結(jié)線蟲病的防治效果

楊章明　常寧濤 　吳先華　甘勇　杜方志

摘要 [目的]明確萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合對(duì)煙草根結(jié)線蟲病的防治效果。[方法]在大田試驗(yàn)中設(shè)置3個(gè)處理（單獨(dú)間作萬壽菊、單獨(dú)施用厚孢輪枝菌、間作萬壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌），對(duì)萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲病的協(xié)同增效效應(yīng)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。[結(jié)果]烤煙間作萬壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌，能顯著增加烤煙的株高和葉片寬度，煙草根結(jié)線蟲病的防效高達(dá)68.1%，較單獨(dú)間作萬壽菊的防效提高了25.6%，較單獨(dú)使用厚孢輪枝菌的防效提高了20.9%。[結(jié)論]萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲具有顯著的協(xié)同增效效應(yīng)。

關(guān)鍵詞 萬壽菊；厚孢輪枝菌；聯(lián)合防治；煙草根結(jié)線蟲病

中圖分類號(hào) S435.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2018）27-0160-03

Integrated Control Effect of Tobacco Rootknot Nematode Disease by Tagetes erecta and Verticillium chlamydosporium

YANG Zhangming ，CHANG Ningtao，WU Xianhua et al

（Panzhihua Branch of Sichuan Tobacco Corporation， Panzhihua，Sichuan 617000）

Abstract [Objective]To identify the integrated effect of Tagetes erecta and Verticillium chlamydosporium against tobacco rootknot nematode disease. [Method]A threetreatments （single intercropping T. erecta ， single using V. chlamydosporium， intercropping T. erecta at the same time using V. chlamydosporium） field experiment was set to make a comprehensive evaluation on integrated T. erecta and V. chlamydosporium against tobacco rootknot nematode disease. [Result]Intercropping T. erecta while using V. chlamydosporium could significantly increase the height and maximum width of tobacco， which gained a high control efficiency of 68.1%， the control efficacies increased by 25.6% and 209% in single intercropping T. erecta and single using V. chlamydosporium. [Conclusion]The synergism of T. erecta and V. chlamydosporium shows obviously increase effects on controlling tobacco rootknot nematode disease.

Key words Tagetes erecta；Verticillium chlamydosporium；Integrated control；Tobacco rootknot nematode disease

作者簡(jiǎn)介 楊章明（1979—），男，四川攀枝花人，助理農(nóng)藝師，從事煙葉生產(chǎn)技術(shù)推廣工作。*通訊作者，農(nóng)藝師，從事煙葉生產(chǎn)技術(shù)推廣工作。

收稿日期 2018-05-26； 修回日期 2018-06-05

全球每年因植物線蟲造成的損失高達(dá)數(shù)千億美元[1]，其中以根結(jié)線蟲Meloidogyne sp.為害最為嚴(yán)重[2]，已成為我國(guó)經(jīng)濟(jì)作物的重要病原線蟲[3]。近年來，復(fù)種指數(shù)居高不下、連作頻頻，導(dǎo)致全國(guó)煙草根結(jié)線蟲病為害面積呈逐年增加趨勢(shì)[4]。目前防治根結(jié)線蟲仍以化學(xué)防治為主[5]，其生產(chǎn)成本相對(duì)較高，且毒性相對(duì)較大，長(zhǎng)期使用不僅會(huì)污染環(huán)境，而且對(duì)人畜健康存在巨大的潛在威脅[4]，近年來，由于煙草上大批化學(xué)殺線蟲劑被禁止使用[6]，研究環(huán)境友好型其他防治措施來替代已迫在眉睫[7]。研究應(yīng)用新的環(huán)境友好型生物防治技術(shù)來防治煙草根結(jié)線蟲病，已成煙草行業(yè)公認(rèn)的有效防治措施[8]。

長(zhǎng)期以來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者在利用殺線蟲植物防治根結(jié)線蟲方面進(jìn)行了大量研究，并取得了顯著成果[9]，近年來研究較多的殺線蟲植物為萬壽菊[10-12] 。厚孢輪枝菌（Verticillium chlamydosporium）是一種在許多國(guó)家被廣泛開發(fā)應(yīng)用的食線蟲生防真菌[11]，其能夠寄生于胞囊線蟲及其蟲卵內(nèi)，對(duì)根結(jié)線蟲具有良好的防治效果[12-13]，因而被廣泛應(yīng)用于根結(jié)線蟲生物防治領(lǐng)域[14-18]，但由于田間生態(tài)環(huán)境復(fù)雜多變，且近年來氣候條件不斷變化，致使厚孢輪枝菌表現(xiàn)出防效不穩(wěn)定且見效慢的現(xiàn)象[19]。為解決上述問題，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)利用植物組織提取物與根結(jié)線蟲生防真菌聯(lián)合防治根結(jié)線蟲病進(jìn)行了大量研究，但主要集中在植物組織提取物與淡紫擬青霉聯(lián)合應(yīng)用上[8，20-21]，鑒于此，筆者聯(lián)合利用萬壽菊與厚孢輪枝菌2種線蟲生防因子，探索它們之間的協(xié)同增效機(jī)制，以期為煙葉生產(chǎn)中根結(jié)線蟲病防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試植物：萬壽菊，由云南綠葉生防科技有限公司提供的萬壽菊種子培育。

供試菌劑：2.5億活孢子/g厚孢輪枝菌，由云南陸良酶制劑有限責(zé)任公司提供。

供試作物：烤煙云85，由四川省煙草公司攀枝花市公司提供。

1.2 方法

大田試驗(yàn)安排在攀枝花市仁和區(qū)干壩子植煙區(qū)，海拔1 830 m，試驗(yàn)地屬于根結(jié)線蟲病歷年發(fā)病較為嚴(yán)重地塊，各試驗(yàn)小區(qū)的土壤類型 、栽培條件及水肥管理?xiàng)l件等均勻一致。煙株于4月27日移栽，株行距1.2 m×0.5 m。試驗(yàn)共設(shè)4個(gè)處理，3次重復(fù)，共12個(gè)小區(qū)，每小區(qū)植煙60株，采用完全隨機(jī)區(qū)組排列方式。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目及方法

1.3.1 煙株農(nóng)藝性狀。

于烤煙打頂期在各小區(qū)定株測(cè)量 5 株烤煙的株高、 莖圍、 最大葉長(zhǎng)、 最大葉寬，進(jìn)行農(nóng)藝性狀比較，調(diào)查方法參照文獻(xiàn)[22]，略有改動(dòng)。

1.3.2 根結(jié)線蟲病發(fā)病情況。

煙葉采收結(jié)束，采用5點(diǎn)取樣法，在各處理小區(qū)挖取10 株完整的煙株根系，按照 GB /T 23222—2008 標(biāo)準(zhǔn)記載各處理煙株根部煙草根結(jié)線蟲病的發(fā)病情況，計(jì)算各處理小區(qū)的病情指數(shù)及防效。

病情指數(shù) = ∑[（ 病級(jí)數(shù) × 該病級(jí)株數(shù)）/（ 調(diào)查總數(shù) ×最高級(jí)值）] × 100

防治效果 =（ 空白病情指數(shù) - 處理病情指數(shù)）/空白病情指數(shù) × 100%

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用DPS 7.0軟件中Duncans新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較并進(jìn)行顯著性差異檢驗(yàn)分析[23]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理煙株農(nóng)藝性狀比較

從表1可以看出，打頂期，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組各處理均能在一定程度上對(duì)烤煙農(nóng)藝性狀有所改善，其中株高促進(jìn)效率以處理TV最高，達(dá)406%；莖圍在處理VC與TV之間差異不顯著，但顯著優(yōu)于空白；烤煙最大葉長(zhǎng)在試驗(yàn)組各處理間差異不顯著，但顯著優(yōu)于對(duì)照；烤煙最大葉寬以處理TV最大，達(dá)43.0 cm，較對(duì)照增加了47.8%。因此，烤煙間作萬壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌處理的烤煙農(nóng)藝性狀綜合表現(xiàn)最好。

2.2 不同處理防治效果比較

從表2可以看出，烤煙采收結(jié)束，處理TV平均防效最高，達(dá)68.1%，較單獨(dú)間作萬壽菊平均防效提高25.6%，較單獨(dú)施用厚孢輪枝菌防效提高209%。這說明萬壽菊與厚孢輪枝菌之間具有顯著的協(xié)同增效作用，兩者聯(lián)合使用，既能改善烤煙的綜合農(nóng)藝性狀，又能提升煙草根結(jié)線蟲病的防治效果。

3 結(jié)論與討論

該研究結(jié)果表明，萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合使用時(shí)能使厚孢輪枝菌對(duì)煙草根結(jié)線蟲病的防治效果提高20.9%，且顯著改善烤煙的高度與葉片寬度，這說明萬壽菊與厚孢輪枝菌之間存在顯著的協(xié)同增效作用，兩者聯(lián)合使用可作為1種具有生防潛質(zhì)的根結(jié)線蟲綜合生防因子加以研究與應(yīng)用。

土壤抑菌作用被認(rèn)為是影響生防菌防治效果的重要因素[24]，研究發(fā)現(xiàn)，萬壽菊根部提取物對(duì)多種病原菌具有明顯的抑制作用，如枯萎病病菌、青霉、枯草芽孢桿菌等[25-26]。該研究發(fā)現(xiàn)，間作萬壽菊同時(shí)施用厚孢輪枝菌能顯著提高煙草根結(jié)線蟲病的防治效果，這可能是萬壽菊根系產(chǎn)生了某些具有抑制病原菌的生物堿解除了部分土著病原菌（青霉、枯草芽孢桿菌）對(duì)厚孢輪枝菌的抑制作用，從而提高了厚孢輪枝菌在土壤中的定殖率，更有利于根結(jié)線蟲病的防治，但此假設(shè)還需要大量的抑菌試驗(yàn)加以驗(yàn)證。

Kerry等[27]認(rèn)為，衡量1株根結(jié)線蟲生防菌生防潛質(zhì)的重要指標(biāo)應(yīng)包括以下3個(gè)方面：①產(chǎn)孢能力；②對(duì)線蟲及蟲卵的作用活性；③菌株在土壤中的定殖能力。研究表明，萬壽菊與淡紫擬青霉在防治根結(jié)線蟲之間存在顯著協(xié)同增效機(jī)制[8，21]，這些協(xié)同增效機(jī)制主要包括：萬壽菊適合淡紫擬青霉生長(zhǎng)、產(chǎn)孢和萌發(fā)，能促進(jìn)淡紫擬青霉對(duì)根結(jié)線蟲卵的抑制，淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus 和厚孢輪枝菌 V.chlamydosporium 是防治根結(jié)線蟲的2種重要生防真菌，它們同屬絲孢綱，具有一定的相似性[28]。該研究發(fā)現(xiàn)，萬壽菊與厚孢輪枝菌聯(lián)合防治煙草根結(jié)線蟲具有顯著的協(xié)同增效機(jī)制，這一協(xié)同增效機(jī)制可能與萬壽菊與淡紫擬青霉的協(xié)同增效機(jī)制相似，但這一假設(shè)，還需通過萬壽菊對(duì)厚孢輪枝菌的生長(zhǎng)適應(yīng)性、產(chǎn)能和萌發(fā)，促進(jìn)厚孢輪枝菌對(duì)根結(jié)線蟲卵的抑制等進(jìn)一步驗(yàn)證。土壤中的 Cu2+和Mg2+是影響厚孢輪枝菌在土壤中定殖和生長(zhǎng)的2種重要金屬離子[29]，該研究萬壽菊促進(jìn)了厚孢輪枝菌對(duì)根結(jié)線蟲防治效果可能是萬壽菊根系分泌物影響了煙株根系土壤中Cu2+和Mg2+所致，這一假設(shè)還需要進(jìn)一步研究。萬壽菊根、莖、葉、花等對(duì)根結(jié)線蟲都具有一定的毒殺作用，不同部位效果不同， 在防治煙草根結(jié)線蟲方面建議聯(lián)合厚孢輪枝菌使用，既能增產(chǎn)，又能提高根結(jié)線蟲的防治效果，但在兩者之間如何更好地聯(lián)合使用（使用時(shí)間、間作密度、使用根或秸稈或葉或花）還需要進(jìn)一步研究。

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