HPLC法測定小葉女貞果實中齊墩果酸的含量

郭向群 曹建民 張志琴 聶奇華

[摘要]建立HPLC法測定小葉女貞果實中的齊墩果酸含量。測定齊墩果酸的色譜條件為：色譜柱 InertSustain C18（250mm×4.6mm， 5μm）；以乙腈-甲醇-0.3%H3PO4水溶液（65：25：10）為流動相進(jìn)行洗脫，流速為1.000 ml·min-1；檢測波長為210 nm；柱溫為 40℃。結(jié)果表明，齊墩果酸進(jìn)樣量在0.199～1.590μg 范圍內(nèi)（r = 0.9998）線性關(guān)系良好，平均回收率為99.15%（RSD% = 1.39，n = 6）。HPLC法操作簡便快捷、穩(wěn)定性好、重現(xiàn)性好，為小葉女貞果實作為藥材的開發(fā)利用提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]HPLC；小葉女貞果實；齊墩果酸；含量測定

[中圖分類號]R284.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

小葉女貞（Ligustrum quihoui Carr.）又名小葉冬青，為木犀科女貞屬小灌木，全國各地均有分布。其根葉可入藥用于外傷、燙傷等癥的治療，但該植物果實作為藥物應(yīng)用尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)記載。據(jù)文獻(xiàn)報道小葉女貞中含β-谷甾醇、齊墩果酸等化合物；其提取物具有免疫調(diào)節(jié)、清除自由基等作用；女貞子中的齊墩果酸具有抗炎、抗病毒及降低轉(zhuǎn)氨酶作用，已用于肝病治療。本課題用HPLC法對小葉女貞果實中所含活性成分齊墩果酸進(jìn)行了測定，為其作為藥材的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 儀器與試劑和藥品

1.1 儀器

LC-20A色譜儀（日本島津公司）；MS105型分析天平（瑞士梅特勒-托得多儀器有限公司）；SB-4200DT超聲清洗器（西安超杰儀器設(shè)備有限公司）；TG16-WS臺式高速離心機（鄭州宏朗儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 試劑和藥品

乙腈和甲醇（德國MERCK公司）為色譜純，水為三重蒸餾水，其他均為分析純試劑。對照品齊墩果酸（批號為110809-201004，中國食品藥品檢定研究院）。藥材9批，于冬至前采收，經(jīng)楚雄醫(yī)專天然藥物學(xué)教研室陸鴻奎副教授鑒定為小葉女貞果實。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱：InertSustain C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-甲醇-0.3%H3PO4水溶液；檢測波長：210 nm；流速：1.000 mL·min-1；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量10 μL；齊墩果酸的理論塔板數(shù)均大于 8000，分離度大于1.5（見圖2）。

2.2 對照品溶液

取齊墩果酸對照品，精密稱定，用甲醇制成每1 mL含齊墩果酸0.9940 mg溶液，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3 供試品溶液

取藥材粗粉1 g，精密稱定，加入甲醇50 mL，超聲30 min后，用甲醇補足減失質(zhì)量，濾過，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4 線性考察

精密吸取對照品溶液2、4、6、8、10、12、16μL，按“2.1”項下條件分別進(jìn)行測定，得齊墩果酸面積回歸方程： y = 680048x + 83405，r = 0.9999。結(jié)果表明，齊墩果酸在該色譜條件的進(jìn)樣量在1.98～11.93 μg之間與峰面積有良好的線性關(guān)系。齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。

2.5 精密度

取濃度為0.9940 mg·mL-1的同一份齊墩果酸對照品溶液10 μL，按“2.1”項下條件測定6次，測得其峰面積的RSD 為1.56%，表明所用儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性

稱取同一批藥材粗粉6 份，每份1 g，精密稱定，按“2.3”項下方法制備供試液，按“2.1”項下條件測得齊墩果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD 為1.02%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性

取同一供試品溶液分別于配制后 0、2、4、8、12、20 h 進(jìn)樣10μL，測得齊墩果酸峰面積的RSD 為 0.92%，表明供試品溶液在20 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率

取已知含量藥材粗粉6 份，每份0.5 g，精密稱定，加齊墩果酸對照品適量，按“2.3”項下方法制備供試液后測得齊墩果酸平均回收率為 99.15 %，RSD為1.39 %（見表1）。

2.9 樣品測定

精密稱取藥材粗粉1 g，按“2.3”項下方法制備供試液，測得齊墩果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)平均值為0.83%，RSD 為 1.73%。色譜圖見圖2，測定結(jié)果見表2。

3 討論

HPLC條件考察了Inertsil ODS-SP和InertSustain C18等不同色譜柱，其中InertSustain C18（5μm， 250mm×4.6mm）柱分離效果好、柱效高，故選該柱進(jìn)行含測。考察了甲醇-磷酸、乙腈-磷酸、乙腈-甲醇-磷酸，結(jié)果乙腈-甲醇-0.3%磷酸（65：25：10）分離效果較好，最終確定以該溶劑系統(tǒng)為洗脫劑。以二極管陣列檢測器于 210 nm 波長處進(jìn)行全波長掃描，基線噪聲較低，色譜圖信息較完全，特征峰響應(yīng)面高，故選210 nm為測定波長。建立的方法能簡捷、準(zhǔn)確地測定藥材中齊墩果酸的含量，該法測定比較穩(wěn)定，且回收率和重現(xiàn)性均較好。

從色譜圖可以看出藥材中除含齊墩果酸外，尚有很多未知色譜峰，有待進(jìn)一步研究。

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