丁香枝枯病病原菌的分離和測定

楊小萌

摘 要：我們對山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)的丁香進行了抽樣調(diào)查。通過調(diào)查，發(fā)現(xiàn)丁香花的枝枯病病菌一般在枝梢上進行侵染且發(fā)病率為30%?；疾〔糠峙c健康部分分界明顯，其上散生黑色小粒點。用剪刀將發(fā)生病害與健康部分的交界處剪取一小段。此類病原菌在病部越冬，降雨的年份易發(fā)病。

關(guān)鍵詞：丁香；抗病性；分離；測定

文章編號：1004-7026（2018）07-0073-02 中國圖書分類號：S435 文獻標志碼：A

丁香學(xué)名Syringa oblate Lindl.木樨科丁香屬，落葉灌木或小喬木，高達5m，枝條粗壯無毛。葉廣卵型，通常寬大于長，寬5～10cm；先端銳尖，基部心型或截形，全緣。圓錐花序長6～15cm；花冠白色或紫色，先端4裂，開展；雄蕊生于花筒中部或中上部。蒴果長圓形，頂端尖，平滑?；ㄆ?～5月，果期9月[1]。

丁香的枝葉茂密，花美麗而芬芳，花期較早，是我國北方地區(qū)園林中最常用的花木之一。廣泛栽植與庭園、機關(guān)、居民區(qū)等處，常叢植于建筑物前、散置于園路兩旁或草坪之中景觀效果甚好[2]。

丁香的抗病性較強，常見的丁香病有花瓣斑病[3]、白粉病[4]、炭疽病[5]和枝枯病。我們對山西農(nóng)業(yè)大學(xué)校園內(nèi)的丁香枝枯病進行了調(diào)查，病菌侵染后丁香形成枯枝，枯死段有黑褐色微突起小點，感病枝與健康枝之間形成明顯的分界線，感染部位以上全部枯死[6]。

1 材料與方法

1.1 樣品處理

采集好標本以后，制作PDA培養(yǎng)基[9]。 取七個無菌培養(yǎng)皿，分別標上號：酒精—水-升汞-無菌水1-無菌水2-無菌水3-做容器，并放入相應(yīng)的溶液。依次放入滅過菌的超凈工作臺中。

（1）從采集的枝條標本上將病害部分切下2mm的小段4節(jié)。

（2）將病害部分和健康部分交界處切下2mm的8節(jié)。

全程滅菌操作三次之后放入容器中。取三個培養(yǎng)皿，然后將標本成對角線接種到平面培養(yǎng)基上，如圖1所示。完后將培養(yǎng)皿倒置。用特種鉛筆在培養(yǎng)皿背面做標記DX-1。

將病害部分和健康部分交界處切下的8小段用同樣的方法接種到另兩個培養(yǎng)基上 DX-2、DX-3。

將DX-1、DX-2、DX-3置入生化培養(yǎng)箱中，蓋上報紙遮光，進行培養(yǎng)菌落觀察，3d后長出呈灰綠色絨毛狀菌落。一個星期后，三個培養(yǎng)基中的菌絲覆蓋了整個培養(yǎng)基，以下就要對其進行純化，讓每一個培養(yǎng)基上只生長一種菌落。通過培養(yǎng)對比，選取具有代表性的DX-2并將其純化。

生長量的測定。每天下午4點對每個培養(yǎng)皿中菌落的生長量進行測量以測定該種真菌的生長速度。經(jīng)過測量計算，菌落每天的平均直徑從而可以看出菌落和生長速度。如菌落生長直徑圖表。

1.2 病原菌的觀察與測量

1.2.1 顯微標本的制作。將白色菌落中灰黑色部分挑出一小塊放到載玻片上的colley試劑中，用解剖針撥勻。蓋上蓋玻片即準備好了一個切片，標為（1）；同樣的方法，再做一個標本，標為（2）。然后在標定了刻度的顯微鏡下觀察菌絲和孢子的性狀并測量孢子的大小。

1.2.2 病原菌孢子的測量。經(jīng)過確定，052028號顯微鏡上，目鏡測微尺在10倍物鏡下刻度為6.5μm，40倍物鏡下刻度為1.6μm。經(jīng)過測量在40倍物鏡下測量的20個孢子的大小如下表：

設(shè)：X為每個孢子的長度 Y為每個孢子的寬度

病原菌孢子的長與寬各自的平均值為：長17.42μm 寬2.6μm

病原菌菌絲的粗度的平均值為：4.20μm

病原菌孢子的長與寬各自的標準差：長5.3μm 寬2.0μm

病原菌菌絲的粗度的標準差：0.86μm

病原菌孢子的長與寬各自的標準誤：長1.2μm 寬0.45μm

病原菌菌絲的粗度的標準誤：0.26μm

病原菌孢子的長與寬各自的變異范圍：長12.96～20μm 寬12.08～9.36μm

病原菌菌絲的粗度的變異范圍：3.33μm～4.87μm

孢子的大小為（12.96～20）μm×（12.08～9.36）μm

2 菌種鑒定

我們在載玻片上觀察到的病原菌形態(tài)特征為：分生孢子梗淡欖褐色，分枝，頂端長擴大而具有多個孢子痕，形狀橢圓形、卵形，有橫隔膜，縱隔膜，孢子有喙或無喙[11]。根據(jù)《真菌鑒定手冊》記載，可以確定我們分離出來的病原菌屬細交鏈孢霉[Alternaria.tenuis Nees]，隸屬半知菌亞門，叢梗孢目，[Alternaria Nees ex Wallr]。此種菌就是引起枝枯病的病原菌[12]。

結(jié)束語

通過本次實驗，使我們對丁香枝枯病的病原菌有了初步了解。在生產(chǎn)實踐中，防治方法建議如下：

（1）發(fā)現(xiàn)病枝及時剪除燒掉，防止傳播蔓延。

（2）加強栽培管理，提高植株抗病能力，盡量避免各種機械創(chuàng)傷。剪口可用1%硫酸銅溶液消毒，再涂以1：1：160倍等量式波爾多液予以保護。

（3）藥劑防治，休眠期選用波美3～5度石硫合劑噴灑，生長期選用1：1：160倍等量式波爾多液、70%甲基托布津可濕性粉劑500～1000倍液等殺菌劑噴灑，并著重噴布枝干，預(yù)防病菌侵染。

參考文獻：

[1]卓麗環(huán)，陳龍清.園林樹木學(xué)[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，2003年11月.

[2]金波.花卉資源原色圖譜[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，1999年9月.

[3]徐志華.園林花卉病蟲害圖監(jiān)[M].北京林業(yè)出版社，2006年1月.

[4]張寶棣.園林花木病蟲害診斷與防治[M].金盾出版社，2002年9月.

[5]楊子琪，曹華國.園林植物病蟲害防治圖鑒[M].中國林業(yè)出版社，2002年1月.

[6]岑炳沾，蘇星.景觀植物病蟲害防治[M].廣東科技出版社，2003年1月.

[7]顧鶴松.山西省地圖集[M].山西省測繪局，1995年.

[8]郭書普.木本花卉病蟲害防治原色圖鑒[M].安徽科技出版社，2003年6月.

[9]項存悌.林病研究法[M].東北林業(yè)大學(xué)出版社，1991年.

[10]普冠勤，毛建平.桑植枯菌核病病原菌的生物學(xué)特性研究[J].蠶業(yè)科學(xué)，2002年28.

[11]邵力平.真菌分類學(xué)[M].中國林業(yè)出版社，1984年12月.

[12]魏景超.真菌鑒定手冊[M].上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1979年9月.