金昌市金川區(qū)2016年－2017年雞新城疫的檢測(cè)與分析

張登基 李曉霞 賈寧

摘? 要：為掌握金川區(qū)新城疫（Newcastle Disease，ND）的流行情況、實(shí)際的免疫效果以及帶毒情況，2016年-2017年筆者分4次在金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)、散養(yǎng)戶(hù)雞和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)中隨機(jī)采集雞血清648份、雞棉拭子樣品379份。應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)測(cè)定雞ND免疫抗體，同時(shí)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）方法測(cè)定雞ND病原。結(jié)果顯示，ND免疫抗體平均合格率為97.07%，其中2016年春季抗體檢測(cè)合格率為96.82%，2017年抗體檢測(cè)合格率為97.30%;ND病原學(xué)陽(yáng)性率為1.85%，表明金川區(qū)ND免疫效果良好，但有雞零星帶毒的情況，應(yīng)繼續(xù)做好雞ND的免疫防控。

關(guān)鍵詞：新城疫;血凝抑制試驗(yàn);逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng);抗體檢測(cè)

中圖分類(lèi)號(hào)：S855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1001-0769（2018）12-0053-03

新城疫（Newcastle Disease，ND）又叫亞洲雞瘟，是一種熱性、急性、敗血性、高度接觸性禽類(lèi)傳染病，主要由ND病毒引起，是目前家禽的主要傳染病之一[1-2]。ND具有呼吸困難、神經(jīng)紊亂、高熱、漿膜出血、下痢等特征，病死率高。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將ND列為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)農(nóng)業(yè)部將其列為一類(lèi)動(dòng)物疫病，并對(duì)其進(jìn)行重點(diǎn)防范[3-4]。

通過(guò)對(duì)ND抗體檢測(cè)和病原檢測(cè)，可以了解雞群的免疫狀況、驗(yàn)證現(xiàn)行的免疫程序、檢驗(yàn)疫苗的免疫效果、了解疫病的流行和發(fā)展情況。為進(jìn)一步全面掌握金川區(qū)ND免疫效果和雞帶毒情況，筆者分別于2016年和2017年春秋季，在金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)隨機(jī)采集樣品進(jìn)行了ND免疫抗體及病原學(xué)的測(cè)定，以科學(xué)研判金昌市金川區(qū)ND防控形勢(shì)，為防控決策提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1 試驗(yàn)器材

試驗(yàn)所用器材包括96孔V型血凝反應(yīng)板（100 μL，上海鼎杰生物科技有限公司）、離心機(jī)（H1650-W，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)儀器開(kāi)發(fā)有限公司）、單道移液器（0.5 μL～10 μL，德國(guó)艾本德股份公司）、多道移液器（15 μL～300 μL，德國(guó)艾本德股份公司）、微量振蕩器（ZW-A，蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司）、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）儀（T960型，杭州晶格科學(xué)儀器有限公司）、水浴鍋（DK-S26，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器公司）、電泳儀（JY600，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）、凝膠成像儀（JY04S-3C，北京君意東方電泳設(shè)備有限公司）等。

1.2 試驗(yàn)試劑

ND陽(yáng)性血清和血凝抑制抗原由中國(guó)哈爾濱動(dòng)物生物制品國(guó)家工程研究中心有限公司提供;RNA提取試劑盒、一步法反轉(zhuǎn)錄試劑盒和DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)由TaKaRa公司提供;無(wú)水乙醇、三氯甲烷和異丙醇為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.3 被檢樣品

在2016年4月和10月以及2017年4月和10月，筆者分別在金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)的3個(gè)規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)、220個(gè)散養(yǎng)戶(hù)雞群和3個(gè)活禽交易市場(chǎng)進(jìn)行樣品采集。樣品包括泄殖腔和咽喉雙份棉拭子379份以及血清樣本648份。樣品采集方法如下：雞翅靜脈采血2 mL，凝固析出血清，離心分離，備用;泄殖腔和咽喉雙份棉拭子樣品保存于磷酸鹽緩沖溶液中。

1.4 檢測(cè)方法

1.4.1 抗體檢測(cè)

依據(jù)GB/T16550-2008 ND診斷技術(shù)中血凝試驗(yàn)操作程序[5]，制備1%的雞紅細(xì)胞懸液，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)抗原進(jìn)行血凝效價(jià)測(cè)定，制備4 IU抗原，按照血凝抑制試驗(yàn)程序進(jìn)行血清抗體效價(jià)的測(cè)定。

1.4.2 病原學(xué)檢測(cè)

依據(jù)GB/T16550-2008診斷技術(shù)中逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）操作程序，設(shè)計(jì)一對(duì)引物P1和P2，按照RNA提取試劑盒方法，提取采集樣品棉拭子中的RNA，以提取的RNA為模板，以設(shè)計(jì)的引物P1和P2為模板，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒的方法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增。

P1：ATGGGCACCAGATCTTCTAC

P2：CTGCCACTGCTAGTTGTGATAATCC

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

抗體檢測(cè)：存欄禽群免疫抗體合格率≥70%判定為合格，抗體效價(jià)≥5 log2判定為合格。

RT-PCR：結(jié)果為陽(yáng)性，則判定為雞ND病原學(xué)陽(yáng)性。

2? 結(jié)果與分析

2016年和2017年，筆者在金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鎮(zhèn)和雙灣鎮(zhèn)分4次共采集血液樣本648份、咽喉和泄殖腔雙份棉拭子379份。對(duì)血液樣品分離血清，進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)，檢測(cè)ND抗體水平;將咽喉和泄殖腔棉拭子樣本混合后，提取RNA，進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

由表1和表2可以看出，2016年金川區(qū)兩個(gè)鎮(zhèn)共檢測(cè)血清315份，合格305份，合格率為96.82%;2017年共檢測(cè)血清333份，合格324份，合格率為97.30%。金川區(qū)ND抗體合格率普遍較高，連續(xù)兩年雞ND抗體合格率均達(dá)97%以上，高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%合格標(biāo)準(zhǔn)。病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，2016年對(duì)184份樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，在4份樣品中檢出ND病毒，陽(yáng)性率為2.17%;2017年對(duì)195份樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)，在3份樣品中檢出ND病毒，陽(yáng)性率為1.54%;ND病毒陽(yáng)性檢出率呈下降趨勢(shì)。

由表3可知，金川區(qū)2016年和2017年在不同監(jiān)測(cè)點(diǎn)對(duì)ND免疫抗體水平和病原學(xué)進(jìn)行了檢測(cè)。養(yǎng)雞場(chǎng)的抗體合格率達(dá)98.96%，散養(yǎng)戶(hù)抗體合格率達(dá)97.29%，交易市場(chǎng)的抗體合格率為93.06%。養(yǎng)雞場(chǎng)沒(méi)有檢測(cè)出ND病毒;在185份散養(yǎng)戶(hù)樣品中檢出3份陽(yáng)性病毒，陽(yáng)性率為1.62%;在105份交易市場(chǎng)樣品中檢出4份陽(yáng)性病毒，陽(yáng)性率為3.81%。

3? 討論

近年來(lái)，金昌市金川區(qū)進(jìn)一步落實(shí)動(dòng)物防疫責(zé)任制，建立了有力的組織保障體系，建立健全了法制保障、體制保障、科技保障、經(jīng)費(fèi)保障、體系保障等各項(xiàng)保障措施，各部門(mén)按職責(zé)分工，監(jiān)督實(shí)施免疫接種、檢驗(yàn)檢疫、疫病監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)實(shí)施隔離、撲殺、消毒、封鎖、無(wú)害化處理等，加強(qiáng)冷鏈體系建設(shè)，嚴(yán)格落實(shí)免疫責(zé)任，進(jìn)一步提升了動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫能力。金川區(qū)依托縣鄉(xiāng)兩級(jí)動(dòng)物疫病預(yù)防部門(mén)和村級(jí)防疫員，強(qiáng)化疫苗物流冷鏈和使用管理，進(jìn)一步構(gòu)建和完善基層動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫工作網(wǎng)絡(luò)，使得全區(qū)動(dòng)物疫病的免疫和監(jiān)測(cè)工作取得了實(shí)效。

2016年和2017年全區(qū)ND抗體和病原學(xué)的檢測(cè)結(jié)果表明：全區(qū)ND免疫抗體平均合格率達(dá)到97.07%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn);其中2016年春季抗體檢測(cè)合格率為96.82%，2017年抗體檢測(cè)合格率為97.30%，免疫抗體的合格率呈上升趨勢(shì);養(yǎng)雞場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)的合格率分別達(dá)到98.96%和97.29%;農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)的ND抗體合格率稍低，主要原因是由于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)雞的來(lái)源復(fù)雜。這提示我們，以后需進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)雞流通市場(chǎng)的監(jiān)管，防止疫病擴(kuò)散。ND病原學(xué)的檢測(cè)結(jié)果表明：金川區(qū)農(nóng)戶(hù)散養(yǎng)雞和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)ND帶毒陽(yáng)性率為1.85%，雖然沒(méi)有臨床表現(xiàn)，但隱性帶毒仍然存在ND感染風(fēng)險(xiǎn)。這提示我們，今后需進(jìn)一步做好免疫和免疫監(jiān)測(cè)工作，對(duì)檢出的ND陽(yáng)性雞（帶ND病毒雞），要及時(shí)采取消毒、隔離甚至撲殺等綜合措施，并進(jìn)行緊急預(yù)防接種。對(duì)養(yǎng)雞場(chǎng)應(yīng)定期進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)和分析，根據(jù)抗體的均勻度以及平均滴度確定是否需要強(qiáng)化免疫，為ND的防控提供科學(xué)依據(jù)[6-7]。

此外，從檢測(cè)結(jié)果可以看出，抗體免疫水平與養(yǎng)殖規(guī)模成正比，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)免疫效果普遍好于散養(yǎng)戶(hù)。這主要是因?yàn)橐?guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)防疫意識(shí)更強(qiáng)，思想上更積極主動(dòng)，且能夠嚴(yán)格執(zhí)行免疫程序。農(nóng)村散養(yǎng)戶(hù)則對(duì)雞ND防疫意識(shí)比較淡薄，認(rèn)為養(yǎng)殖雞數(shù)量少，免疫無(wú)關(guān)緊要[8]。

總之，ND具有很高的發(fā)病率和死亡率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病，與高致病性禽流感并列為世界公認(rèn)的最重要的兩類(lèi)禽類(lèi)疫病。及時(shí)進(jìn)行免疫接種，并對(duì)ND進(jìn)行抗體檢測(cè)，評(píng)價(jià)其免疫水平和免疫效果，是預(yù)防ND的關(guān)鍵，也有利于指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，減少ND對(duì)養(yǎng)禽業(yè)造成的損失[9]。

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