丙型肝炎病毒RNA檢測質(zhì)量控制因素分析

張文茂

[摘要] 目的 對丙型肝炎病毒RNA檢測的質(zhì)量控制因素進行分析，以保證丙型肝炎病毒RNA檢測結(jié)果的準確性，防止漏檢、誤檢，為丙型肝炎的防控提供準確的檢測依據(jù)。 方法 選取2018年1—4月共50例丙型肝炎患者的血液標本，分別根據(jù)血清標本存放時間、檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材是否經(jīng)過高壓滅菌分為對照組與觀察組，總結(jié)和分析保證丙型肝炎病毒RNA檢測結(jié)果準確的因素。 結(jié)果 檢測人員綜合能力，丙型肝炎檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌兩個因素的對照組與觀察組相比較在檢出率上，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.543，6.250，P<0.05）；第一個血清標本存放時間因素，對照組和觀賽組檢出率差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.102，P>0.05）。 結(jié)論 為了保證丙型肝炎RNA檢測的準確結(jié)果，檢測人員及檢測所用耗材需要嚴格選擇。-20℃保存標本在1周時間內(nèi)，血清HCV-RNA檢測結(jié)果影響不大。

[關(guān)鍵詞] 丙型肝炎；RNA檢測；質(zhì)量控制

[中圖分類號] R446.5 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）10（a）-0174-03

Analysis of Quality Control Factors of Hepatitis C Virus RNA Test

ZHANG Wen-mao

Department of Hereditary Eugenics， Yueyang Maternal and Infant Healthcare Hospital， Yueyang， Hunan Province， 414000 China

[Abstract] Objective To analyze the quality control factors of hepatitis C virus RNA test to ensure the accuracy of test results and prevent the missed diagnosis and misdiagnosis thus providing accurate test basis for the prevention and control of hepatitis C virus. Methods The blood specimens of 50 cases of patients with hepatitis C virus from January 2018 to April 2018 were selected， and divided into two groups according to the serum specimens storage time， comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not， and the factors of ensuring the accuracy of hepatitis C virus RNA test results were summarize and analyzed. Results The differences in the comprehensive ability of test staff， and whether the consumables used by the hepatitis C virus RNA test underwent the autoclaving or not between the two groups the differences were statistically significant（χ2=9.543， 6.250，P<0.05），and the difference in the serum specimens storage time between the two groups was not statistically significant（χ2=0.102，P>0.05）. Conclusion In order to ensure the accuracy results of hepatitis C virus RNA test， the test staff should strictly select the consumables， and the effect of serum HCV-RNA test results is not big when the specimen is stored within 1 week under -20℃.

[Key words] Hepatitis C； RNA test； Quality control

丙型肝炎病毒（hepatitis c virus， HCV）屬黃病毒科，HCV呈球形顆粒，核心含有單鏈正股RNA，長約9500個核苷酸。目前發(fā)現(xiàn)的全球HCV感染率約為3%，感染HCV的患者逐年上升，每年新發(fā)病例在300萬例左右[1-3]。HCV-RNA的檢測是判斷HCV感染的直接證據(jù)，提高HCV-RNA檢測的準確性，對丙型肝炎的及時診斷與治療十分重要[4]。RNA比DNA穩(wěn)定性差，檢測易出現(xiàn)假陰性。國內(nèi)針對丙肝RNA檢測質(zhì)量控制的文章極少，因此，該文選取2018年1—4月50例患者就HCV-RNA檢測細節(jié)入手，首次針對血清標本存放時間、檢測人員綜合能力、丙肝RNA檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌這3個容易被忽視的因素進行了分析以提高丙肝RNA檢測的準確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取共50例丙型肝炎患者的血液標本，根據(jù)標本存放時間、檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌分為對照組與觀察組分別進行檢測，對照組與觀察組所用設(shè)備同一型號，實驗操作參照標準流程一致。

1.2 方法

分別對分組后的血液樣本進行HCV-RNA檢測，如下實驗。

1.2.1 血清標本存放時間影響 觀察組：抽取丙肝患者血液3 mL，于含有惰性分離膠的黃色促凝管內(nèi)，室溫1 600rpm離心5 min分離出血清，取200 μL標本立即進行標本提取。

對照組：血液標本按上述方法離心后，取200 μL血清-20℃放置7 d后進行標本提取。由同一名經(jīng)過專業(yè)培訓的檢測人員按照HCV-RNA檢測的標準操作規(guī)范進行操作，HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組都是同一型號，實驗所用耗材均經(jīng)過高壓滅菌，實驗室安全等級均為二級生物安全。

1.2.2 檢測人員綜合能力影響 觀察組：負責HCV-RNA檢測的操作人員必須具備2年以上關(guān)于病源微生物及病毒檢測的工作經(jīng)驗，接受過正規(guī)的省級PCR技術(shù)人員上崗培訓，并獲得培訓證書。工作中每隔一定的時間進行與工作相關(guān)的微生物檢測知識的培訓與學習，同時具有較好的綜合能力，特別是心理素質(zhì)必須良好，嚴格遵守實驗室標準操作程序和制度進行。

對照組：負責HCV-RNA檢測的技術(shù)人員為一般的檢驗人員，未經(jīng)過專業(yè)的PCR技術(shù)人員上崗培訓，操作過程嚴格按照HCV-RNA檢測的標準操作程序進行。比較二者對于HCV 陽性的復檢率。HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組均為同一型號，實驗所用耗材均經(jīng)過高壓滅菌，實驗室安全等級均為二級生物安全，保證對HCV-RNA檢測的樣品預處理相同。

1.2.3 丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材是否高壓滅菌 觀察組：丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材（1.5 mL離心管，0.2 mL PCR反應(yīng)管，10 μL、200 μL、1000 μL Tip頭）均經(jīng)過高壓滅菌（121℃，30 min）。

對照組：丙型肝炎病毒RNA檢測所用耗材未經(jīng)高壓滅菌，HCV-RNA檢測所用設(shè)備與觀察組均為同一型號，實驗室安全等級均為二級生物安全，保證對HCV-RNA檢測的樣品預處理相同，由同一名獲得PCR技術(shù)人員上崗證的專業(yè)檢驗人員進行操作。

1.3 統(tǒng)計方法

分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用（%）表示，進行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

對觀察組和對照組進行HCV-RNA檢測進行實驗：檢測人員綜合能力、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌這兩個因素的對照組與觀察組相比較，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），血清存放時間的對照組與觀察組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），見表1。

3 討論

血中HCV含量僅為HBV的千分之一，熒光定量PCR技術(shù)可以在極低的病毒載量檢測到HCV-RNA的存在，是臨床診斷的有力工具，對HCV-RNA檢測進行質(zhì)量控制是保證結(jié)果準確的關(guān)鍵[5-6]。該研究主要針對HCV-RNA檢測中的3個方面，即血清標本存放時間影響、檢測人員綜合能力影響、丙型肝炎病毒檢測所用耗材是否高壓滅菌。實驗結(jié)果顯示“血清存放時間”的對照組檢出率為88%， 與觀察組相比，差異無統(tǒng)計學意義（χ2=0.102，P>0.05），說明血清-20℃保存一周對檢測結(jié)果影響不大，所以丙肝RNA檢測所用血清如果暫時不檢測需立馬放到-20℃冰箱進行保存，盡量在一周之內(nèi)進行檢測。檢測人員綜合能力對照組檢出率為64%，與觀察組相比，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=9.543，P<0.05），說明檢測人員綜合能力影響檢出率，檢測人員必須要經(jīng)過嚴格培訓并具有良好心理素質(zhì)。檢測所用耗材是否經(jīng)高壓滅菌對照組檢出率為70%，與觀察組相比， 差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.250，P<0.05），說明所用耗材是否進行高壓滅菌影響檢出率，所以RNA檢測所用耗材必須要經(jīng)過高壓滅菌。HCV-RNA熒光定量檢測不僅需要保證PCR實驗室安全衛(wèi)生等級、實驗儀器的校準及試劑盒的篩選，與此同時也需要保證檢測人員隊伍極高的綜合能力和耗材必須高壓滅菌，才能夠保證HCV-RNA檢測質(zhì)量，從而減少檢測的誤差率，提高HCV-RNA診斷率。

[參考文獻]

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[6] 尹秀華.丙型肝炎檢測方法的研究進展[J].醫(yī)學理論與實踐，2013，6（2）：171-173.

（收稿日期：2018-00-00）