淺談冷沉淀制備過(guò)程中的質(zhì)量控制

揚(yáng)麗 陳健

[摘要] 目的 探討冷沉淀制備過(guò)程中的質(zhì)量控制。方法 將60份新鮮冰凍血漿隨機(jī)分為常規(guī)制備組和質(zhì)量控制制備組，每組30袋，常規(guī)制備組按照傳統(tǒng)離心法制備冷沉淀，質(zhì)量控制制備組采用冷沉淀制備儀制備冷沉淀。結(jié)果 常規(guī)制備組冷沉淀產(chǎn)品中抽檢有28份合格，2份不合格，合格率約93%；質(zhì)量控制制備組抽檢30份全部合格，合格率為100%。結(jié)論 掌控好制備方案、原材料、設(shè)備和環(huán)境溫度等質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，才能確保制備出優(yōu)質(zhì)合格的冷沉淀。

[關(guān)鍵詞] 冷沉淀；制備；質(zhì)量控制

[中圖分類號(hào)] R19 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1672-5654（2018）05（c）-0082-02

冷沉淀（Cryoprecipitate）是臨床上成分輸血中的一種重要制品，該制品是新鮮冰凍血漿（fresh frozen plasma，F(xiàn)FP）在1～6℃條件下融化后分離出大部分血漿、剩下的冷不溶解活性物質(zhì)，在1 h內(nèi)速凍成固態(tài)的成分血。冷沉淀富含纖維蛋白原（Fg）、凝血因子FⅧ、纖維結(jié)合蛋白、血管性血友病因子等多種活性成分，對(duì)于甲型血友病、先天性或獲獲得性纖維蛋白原缺乏癥、血管性血友病等都有較好治療效果。此外，它對(duì)于外科患者，尤其是血友病患者的手術(shù)中出血有顯著地預(yù)防和治療作用[1-2]。冷沉淀中FⅧ因子極其不穩(wěn)定，在體內(nèi)生物半衰期較短，一般為 8～12 h，其活性易喪失[3]。新鮮冰凍血漿融化后，F(xiàn)Ⅷ因子活性會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯的降低。但是從全血采集到新鮮冰凍血漿的制備再到冷沉淀的制備中很多環(huán)節(jié)都會(huì)影響冷沉淀的最終質(zhì)量，所以從采集原漿料開(kāi)始，一直到臨床輸注過(guò)程的整個(gè)環(huán)節(jié)中都應(yīng)盡量減少其中活性成分、尤其是纖維蛋白原和凝血因子FⅧ的破壞。因此對(duì)冷沉淀制備過(guò)程中關(guān)鍵控制點(diǎn)的把握，則是制備出優(yōu)質(zhì)冷沉淀、保證質(zhì)量的首要關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1 資料與方法

1.1 儀器

ZBK-LCD-A1冷沉淀凝血因子制備儀；賀利氏6000i 型大容量低溫離心機(jī)；SE250高頻電子熱合機(jī)；SPN1501F電子天平；MBF21血漿速凍機(jī)、4℃貯血冰箱。

1.2 原漿料來(lái)源

以2016年10月—2017年3月采集的健康無(wú)償獻(xiàn)血者全血為原料。

1.3 方法

1.3.1 冷沉淀凝血因子原料血漿 用山東威高集團(tuán)生產(chǎn)的白細(xì)胞除濾四聯(lián)袋（抗凝劑為CPDA-1）采集健康獻(xiàn)血者全血60人份、400 mL/份，且采集時(shí)間小于13 min。將其隨機(jī)分為常規(guī)制備組和質(zhì)量控制制備組，每組30袋。在采集后8 h內(nèi)離心分離出新鮮血漿，并于-50℃速凍冰箱速凍，凍結(jié)完好后放置于-25℃以下低溫冰箱中保存?zhèn)溆?。將冷?4 h以上且在保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿用于制備冷沉淀[4]，且新鮮冰凍血漿質(zhì)量均符合GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》的要求。

1.3.2 冷沉淀制備方法 常規(guī)制備組按照傳統(tǒng)離心法操作規(guī)程進(jìn)行冷沉淀制備。質(zhì)量控制制備組采用冷沉淀制備儀制備冷沉淀，即按照冷沉淀制備儀說(shuō)明書(shū)操作，待水浴箱中水溫降至4℃并恒定，稱重托盤(pán)稱重清零后，開(kāi)門(mén)分批次將30袋新鮮冰凍血漿分別置于恒溫循環(huán)水槽中得各個(gè)托盤(pán)上，空聯(lián)袋置于水浴箱外下方的各個(gè)托盤(pán)處，形成落差。待管路軟化后放入蠕動(dòng)泵和夾管閥內(nèi)，關(guān)門(mén)啟動(dòng)制備程序。水浴箱的水循環(huán)流動(dòng)，冰凍血漿開(kāi)始融化，蠕動(dòng)泵運(yùn)轉(zhuǎn)形成虹吸，融化的大部分血漿流入空袋中。當(dāng)托盤(pán)上的血袋重量達(dá)到設(shè)定參數(shù)后冷沉淀制備儀會(huì)自動(dòng)稱重并關(guān)閉夾管閥。每批次完成就自動(dòng)報(bào)警。開(kāi)門(mén)，將血漿袋內(nèi)剩余的40～50 mL血漿和沉淀混合物即冷沉淀凝血因子熱合斷離后立即放置于-50℃深低溫冰箱中速凍備用。此過(guò)程僅需1人操作，并且1 h即可完成。

2 結(jié)果

常規(guī)制備組冷沉淀產(chǎn)品中抽檢有28份合格，2份不合格，合格率約93%。不合格原因均為FⅧ因子含量達(dá)不到80 IU或產(chǎn)品容量超標(biāo)。通過(guò)對(duì)冷沉淀制備過(guò)程各個(gè)環(huán)節(jié)的不斷改進(jìn)和控制，質(zhì)量控制制備組抽檢30份全部合格，合格率為100%。

3 討論

隨著成分輸血的逐步發(fā)展，冷沉淀這種血液產(chǎn)品的臨床應(yīng)用已經(jīng)受到國(guó)內(nèi)外高度重視，目前它也成為臨床上較常用的一種血液成分。由于冷沉淀為新鮮冰凍血漿制備而來(lái)，其內(nèi)含有濃縮的纖維蛋白原、纖維連結(jié)蛋白和包括Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅱ、V、X因子等在內(nèi)多種凝血因子。因而冷沉淀除了可以用于因嚴(yán)重創(chuàng)傷或疑難復(fù)雜外科手術(shù)的患者，因?yàn)槭а^(guò)多或反復(fù)出血，導(dǎo)致凝血因子消耗或者丟失過(guò)多，或又由于大量輸血或輸液，引起凝血因子稀釋性減少，而庫(kù)存血液中不穩(wěn)定的Ⅷ、V及Ⅺ因子等隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減少或失活，機(jī)體的凝血過(guò)程無(wú)法正常發(fā)揮作用時(shí)補(bǔ)充凝血因子，而且其中富含的纖維蛋白原還是一種粘性糖蛋白，具有促進(jìn)纖維蛋白交聯(lián)、誘導(dǎo)細(xì)胞粘著、促進(jìn)上皮細(xì)胞移行、修復(fù)和分化，從而促進(jìn)外傷或手術(shù)創(chuàng)面的肉芽組織增生，加快傷口愈合的神奇功效；同時(shí)冷沉淀還在機(jī)體炎癥反應(yīng)中表現(xiàn)為一種趨化因子，能夠誘導(dǎo)白細(xì)胞產(chǎn)生活性，增強(qiáng)單核巨噬細(xì)胞吞噬功能，從而產(chǎn)生抗炎、抑制細(xì)菌生產(chǎn)的作用[5]。冷沉淀制品中的FⅧ因子和纖維蛋白原含量是直接影響臨床輸注效果的重要因素。尤其是凝血因子FⅧ，因?yàn)樗且环N極其不穩(wěn)定的凝血因子。根據(jù)《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》要求，每200 mL全血制備的新鮮冰凍血漿所制備的冷沉淀中凝血因子的活性應(yīng)該≥80 IU。而冷沉淀內(nèi)凝血因子等的含量又受多種因素影響且與分離過(guò)程、制備過(guò)程密切相關(guān)，所以保證冷沉淀的治療顯得尤為重要。

該站在工作中發(fā)現(xiàn)，冷沉淀制備的質(zhì)量關(guān)鍵控制點(diǎn)涉及采集、運(yùn)輸、制備、保存等諸多環(huán)節(jié)中的環(huán)境溫度、離體時(shí)間、制備方法、制備條件、儲(chǔ)存溫度等，這其中通過(guò)制備過(guò)程嚴(yán)格掌控是提高其質(zhì)量的最有效方法之一。所以在冷沉淀制備過(guò)程中，必須嚴(yán)格控制從血液采集到血液成品整個(gè)過(guò)程的冷鏈及時(shí)間控制，盡量減少冷沉淀中的活性成分，尤其是不穩(wěn)定成分的損失，確保制備的冷沉淀符合《全血及成分血質(zhì)量要求》中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)且達(dá)到最優(yōu)化。

該站目前采用冷沉淀制備儀制備時(shí)主要從以下幾個(gè)方面進(jìn)行控制：原料FFP選用無(wú)混濁、無(wú)乳糜、無(wú)溶血、無(wú)纖維蛋白原析出的保存期內(nèi)并冷凍24 h 以上的，且質(zhì)量符合GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》的要求。原料全血嚴(yán)格篩選，必須是采集流暢且采集時(shí)間小于13 min的400 mL全血，并于采集后8 h內(nèi)用于制備新鮮冰凍血漿；改善轉(zhuǎn)運(yùn)條件，增加接血車(chē)數(shù)量，把采集的新鮮全血從站外采血點(diǎn)分多批次及時(shí)接回，用預(yù)降溫的血液專用隔熱冷藏箱運(yùn)輸血液，使其保持4℃的冷鏈環(huán)境；采集后8 h內(nèi)的全血錄入電腦并預(yù)選分離方案，與其它成分制備沖突時(shí)優(yōu)先2 h內(nèi)制備出新鮮冰凍血漿；先將濾白柜，離心機(jī)，低溫操作臺(tái)的溫度預(yù)冷到4℃，盡可能快地濾白，離心分離出新鮮冰凍血漿，最大限度地分離出血漿；盡量縮短常溫下的操作，快速打印標(biāo)簽并及時(shí)送待檢庫(kù)速凍；優(yōu)先選用-50℃速凍冰箱，將血漿平鋪放于平板速凍機(jī)，速凍20 min，這可以更好地讓新鮮冰凍血漿在60 min內(nèi)將血漿的中心溫度降至-30℃以下，然后移入-18℃以下冰箱保存作為原料漿。在冷沉淀的制備過(guò)程中，傳統(tǒng)離心法溫度不好控制，且需時(shí)2.5 h，容量常有誤差。而且有文獻(xiàn)報(bào)道，延長(zhǎng)制備時(shí)間對(duì)新鮮冰凍血漿中凝血因子Ⅷ含量有著很大影響[6]。所以要盡可能縮短制備時(shí)間。該站目前已大部分采用冷沉淀凝血因子制備儀設(shè)定的程序進(jìn)行制備冷沉淀。密閉式4℃水浴箱中并保證恒定溫度，制備時(shí)間約為1 h。當(dāng)血漿袋中的冷沉淀的重量達(dá)到設(shè)定參數(shù)后冷沉淀凝血因子制備儀會(huì)自動(dòng)稱重報(bào)警，剩余的40～50 mL白色絮狀結(jié)晶即為冷沉淀凝血因子。容量達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化，避免了人為造成的容量差異，為制備優(yōu)質(zhì)的冷沉淀打下良好基礎(chǔ)。熱合封口后立即-50℃速凍備用。其產(chǎn)品經(jīng)檢驗(yàn)FVⅢ含量≥ 80 IU/200 mL，F(xiàn)g含量≥150～200 mL，容量（25±5）mL/袋，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[7]。

綜上所述，掌控好制備方案、原材料、設(shè)備和環(huán)境溫度等質(zhì)量控制環(huán)節(jié)，才能保證制備出優(yōu)質(zhì)合格的冷沉淀，為臨床治療保駕護(hù)航。此外，由于冷沉淀的特殊性，臨床上輸注前宜在37℃水溫條件下10 min內(nèi)融化，融化后的冷沉淀必須盡快輸注，否則將導(dǎo)致不穩(wěn)定的凝血因子Ⅷ的活性降低甚至喪失。

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（收稿日期：2018-02-23）