Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)

陳 嬉，金海麗

(臺(tái)州恩澤醫(yī)療中心(集團(tuán))恩澤醫(yī)院 病理科，浙江 臺(tái)州 318050)

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，發(fā)病率高，已成為我國(guó)重大公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。乳腺癌的病因尚未完全清楚，有研究認(rèn)為，乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展是多種因素綜合作用的結(jié)果，某些生物學(xué)標(biāo)記物的表達(dá)可能與乳腺癌患者的預(yù)后有關(guān)[2]。Mel-18基因是多梳基因家族中的一員，在細(xì)胞增殖、衰老和腫瘤的發(fā)生中都具有重要的作用。Mel-18編碼負(fù)性調(diào)控蛋白，抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[3]；Notch-1的異常表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4]；PLK-1是廣泛存在于真核細(xì)胞中的絲/蘇氨酸激酶，與細(xì)胞的有絲分裂密切相關(guān)，PLK-1可以參與細(xì)胞凋亡的調(diào)控，有利于腫瘤的靶向治療[5]。浸潤(rùn)性乳腺癌是乳腺癌中常見的病理類型，本研究分析生物標(biāo)記物Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)情況，探討三者在浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能的作用。

1 材料與方法

1.1 材料收集 2014年11月—2016年9月我院病理科的乳腺組織89例，其中正常乳腺組織40例，浸潤(rùn)性乳腺組織49例。49例乳腺癌患者均為女性，年齡33～72歲，平均52.311.4歲。標(biāo)本入選條件：術(shù)前未經(jīng)任何抗癌治療，無(wú)重大手術(shù)及外傷史，且組織類型均經(jīng)病理檢查證實(shí)。

1.2 主要試劑與設(shè)備 Mel-18鼠抗人單克隆抗體(Abcam公司，產(chǎn)品編號(hào)：ab203638)、Notch-1兔抗人抗體(博士德公司，產(chǎn)品編號(hào)：BA2743-2)、PLK-1兔抗人單克隆抗體(Abcam公司，產(chǎn)品編號(hào)：ab138496)、光學(xué)顯微鏡Nikon Eclipse E200(日本)。

1.3 操作方法 用4%中性甲醛溶液將所有標(biāo)本固定，經(jīng)過(guò)石蠟包埋并切片備用。Mel-18、Notch-1和PLK-1的工作濃度分別為1:200、1:100和1:200。采用羅氏全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色儀進(jìn)行染色，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.4 陽(yáng)性率判定 ①以著色細(xì)胞數(shù)占視野細(xì)胞總數(shù)(鏡下隨機(jī)取10個(gè)視野)的百分比計(jì)分。1分：≤10%的核陽(yáng)性；2分：11%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。②根據(jù)染色強(qiáng)度進(jìn)行計(jì)分。1分：陰性；2分：弱染色；3分：中度染色；4分：重度染色。將上述兩種方法的計(jì)分結(jié)果進(jìn)乘積，若乘積≥4分，便認(rèn)為陽(yáng)性，否則為陰性。Mel-18和PLK-1主要在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，呈現(xiàn)棕褐色或者棕黃色顆粒。Notch-l主要在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)表達(dá)，呈現(xiàn)棕黃色或黃色顆粒。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Mel-18、Notch-1及PLK-1的表達(dá) Mel-18、Notch-1、PLK-1在正常乳腺組織中的陽(yáng)性率與在浸潤(rùn)性乳腺組織中的陽(yáng)性率，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；見表1。

表1 Mel-18、Notch-1及PLK-1

2.2 Mel-18、Notch-1及PLK-1與浸潤(rùn)性乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性 Mel-18的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡和組織學(xué)分級(jí)無(wú)關(guān)(P>0.05)；Notch-1和PLK-1的表達(dá)均與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，與患者年齡無(wú)關(guān)(P>0.05)。見表2。

3 討論

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤之一，發(fā)病率高，但死亡率卻呈逐年下降趨勢(shì)。究其原因，一是乳腺癌篩查工作的開展，二是乳腺癌綜合治療的開展。因此，乳腺癌的早期篩查或診斷是降低乳腺癌死亡率的關(guān)鍵。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，乳腺癌生物標(biāo)記物的研究也越來(lái)越深入。本研究對(duì)Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤(rùn)性乳腺癌中的表達(dá)進(jìn)行研究，以期為臨床浸潤(rùn)性乳腺癌的研究和乳腺癌的預(yù)后提供有力支撐。

表2 Mel-18、Notch-1及PLK-1與浸潤(rùn)性乳腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

Mel-18定位于染色質(zhì)17q12，由13個(gè)外顯子組成，通過(guò)結(jié)合序列5'-GACTNGACT-3'起轉(zhuǎn)錄抑制作用，此序列位于c-myc，bcl-2，hox基因的非編碼區(qū)或調(diào)控區(qū)。Mel-18基因通過(guò)下調(diào)c-myc基因的表達(dá)，調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖，加速細(xì)胞衰老[6]，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Mel-18在正常乳腺組織中的表達(dá)高于浸潤(rùn)性乳腺組織，且Mel-18的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，這與贠田等[7]研究結(jié)果相似，對(duì)于乳腺癌的預(yù)后具有重要的意義。

Notch-1定位于染色體9q34，是許多重要信號(hào)通路(調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖)的交匯點(diǎn)，在細(xì)胞分化、發(fā)育中具有一定的作用，且影響其下游多種癌基因參與細(xì)胞的增殖、分化及凋亡過(guò)程[8]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Notch-1在浸潤(rùn)性乳腺組織中的表達(dá)高于正常組織，且Notch-1的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)(P<0.05)，表明在一定程度高表達(dá)Notch-1加劇了乳腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良。

人類的PLK基因定位于16p12.3，PLK-1是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的重要分子，位于細(xì)胞周期的中心環(huán)節(jié)。PLK-1穩(wěn)定分裂細(xì)胞基因組，參與了細(xì)胞周期各個(gè)檢測(cè)點(diǎn)功能，在細(xì)胞DNA修復(fù)后，進(jìn)入有絲分裂，從而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[9]。本研究結(jié)果顯示PLK-1在浸潤(rùn)性乳腺組織中的表達(dá)高于正常組織，且PLK-1的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期有關(guān)，說(shuō)明PLK-1在腫瘤中高表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)行為及預(yù)后有密切關(guān)系，這與King等[10]研究結(jié)果相似。

綜上所述，Mel-18、Notch-1及PLK-1在浸潤(rùn)性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中具有一定的作用，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期密切相關(guān)，可能是影響浸潤(rùn)性乳腺癌預(yù)后的重要指標(biāo)。

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