水稻花色苷及其合成基因差異表達(dá)的研究進(jìn)展

袁昭弟，余顯權(quán)

(貴州大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

我國(guó)70%人口以稻米為主食，如今，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人民生活水平的提高，老百姓的飲食觀念逐漸由過去的吃得飽向現(xiàn)在的吃得好轉(zhuǎn)變。伴隨著富貴病(高血壓、高血糖、冠心病和肥胖癥等)也不斷出現(xiàn)，人們的膳食習(xí)慣發(fā)生了翻天覆地的變化。自古以來，我國(guó)中醫(yī)就提倡藥食同用、醫(yī)藥同源，有色稻不僅含有豐富的營(yíng)養(yǎng)元素(鐵、硒、鋅、鈣等礦質(zhì)元素)，還含有豐富的生物活性物質(zhì)如VE、胡蘿卜素、黃酮、生物堿、強(qiáng)心甙、木酚素、甾醇等[1-3]。因此，常被用于食療來改善體質(zhì)和預(yù)防各種疾病的發(fā)生。

花色苷是一種分布范圍廣、安全、無毒副作用的天然色素。從現(xiàn)有的有色稻資源中發(fā)掘花色苷含量高的品種和探究出適應(yīng)于高花色苷含量的色稻生態(tài)點(diǎn)，深入了解其遺傳規(guī)律、合成基因及調(diào)節(jié)基因差異表達(dá)，為稻米色素基因克隆和色稻種質(zhì)資源創(chuàng)新提供參考。

1 花色苷的結(jié)構(gòu)

該色素是由2-苯基-苯并毗喃(phenotyrilium)的產(chǎn)物組成，它的糖苷是由具備C6-C3-C6結(jié)構(gòu)的類黃酮花色素苷與糖配體結(jié)合的。

大部分的花色苷的3-，5-，7-碳位上有羥基代替。B環(huán)各碳位上有不同羥基或甲氧基取代，組成了形形色色的花色苷，目前已了解到的種類有二十多種，最重要的花色素有天竺葵素(Pelargonidin)、花青素(Cyanidin)、花翠素(Delphinidin)、甲基花青素(peonidin)、3'-甲花翠素(petunidin)及二甲花翠素(Malvidin)等結(jié)構(gòu)?；ㄉ卦谧匀唤缰型ㄟ^糖苷鍵與一個(gè)或許多葡萄糖、鼠李糖、半乳糖等合成花色苷。該色素的糖苷基與羥基還可以經(jīng)過酯鍵和一個(gè)或少許分子的對(duì)位香豆酸、阿魏酸、咖啡酸等合成牢固的花色苷[4-5]。

自然界已知的花色苷有22 大類[6-7]。食品中重要的有 6 類[8]，即矢車菊色素(cyanindin，Cy)、天竺葵色素(pelargonidin，Pg)、飛燕草色素(delphinidin，Dp)、芍藥色素(peonidin，Pn)、牽牛色素(petunidin，Pt)和錦葵色素(malvidin，Mv)。

徐杰等[9]采用柱層析和紙色譜的方法對(duì)貴州黑糯米稻的花色苷構(gòu)成進(jìn)行了研究，結(jié)果表明其成分為矢車菊素葡萄糖苷與矢車菊色素。Ryu等[10]研究 10個(gè)色稻種類表明其花色苷最重要的成分為矢車菊素葡萄糖苷與芍藥色素。蘇金為[11]對(duì)巖黑稻和巖紫糯的花色苷分析表明巖黑稻和巖紫糯花色苷是由矢車菊苷與矢車菊色素構(gòu)成。

張晴等[12]運(yùn)用黑米稻花色苷的吸收光譜對(duì)它的成份進(jìn)行檢測(cè)， 結(jié)果表明其成分由牽?；ㄋ靥擒战M成。Ichikawa 等[13]對(duì)紫黑米稻花色苷運(yùn)用毛細(xì)管電泳和聚已烯吡咯烷酮柱層析進(jìn)行分析， 結(jié)果表明該色素為矢車菊素葡萄糖苷。Cho等[14]研究報(bào)道， 黑米稻品種 Su-won415 的花色苷為矢車菊花色素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。Giaccherini 等[15]對(duì)黑米稻品種 Venere色素的研究，發(fā)現(xiàn)它是由矢車菊素葡萄糖苷組成。

Choi等[16]對(duì) 13 份不同色稻品種的花色苷進(jìn)行研究， 結(jié)果表明它是由矢車菊素糖苷及芍藥色素構(gòu)成。鐘麗玉等[17]對(duì)黑米稻品種全黑粳運(yùn)用紙色譜、紫外可見光掃描及氣相色譜等方法進(jìn)行分析，該色素由矢車菊素糖苷和芍藥色素等 5 種構(gòu)成。Terahara 等[18]運(yùn)用高效液相色譜(HPLC)方法對(duì)香紅米稻花色苷測(cè)定，該色素的成分為矢車菊色素及芍藥色素。

2 水稻花色苷含量的影響因素

2.1 遺傳因素對(duì)稻米色素含量的影響

稻谷籽粒的外形結(jié)構(gòu)主要由穎殼與穎果構(gòu)成， 而內(nèi)部結(jié)構(gòu)的穎果由果皮、種皮、胚乳及胚構(gòu)成。張名位等[19]對(duì)黑米剝皮 2 min后檢測(cè)到花色苷含量占糙米色素總量的 6.5/10～7/10。

稻谷籽粒的穎殼和穎果內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)所含的花色苷有很大的差異，然而在不同的水稻品種間也有相似的規(guī)律。Koh等[20]對(duì)4類不同顏色的色稻品種進(jìn)行花色苷含量檢測(cè)，結(jié)果表明花色苷在褐米稻和紅褐米稻的含量為1.63～17.62 μg/g，在紅米稻的含量為 3.56～11.10 μg/g， 在紫米稻的含量為 28.11～401.22 μg/g，但在黑米稻的含量為3665.98 μg/g。Phoka等[21]測(cè)定結(jié)果表明， 淺黃稻 KDML105 的花色苷含量為 1.25 μg/g， 淺黃稻 BW4 的花色苷含量為 8.07 μg/g，紅黑稻JHN的花色苷含量為594.96 μg/g。張名位等[22]對(duì)5種花色苷含量不同的色稻進(jìn)行分析，檢測(cè)到這些品種的色素含量依次為：龍錦 1 號(hào) >黑豐糯 >秦稻 1 號(hào) >黑粘 110>豐澳粘。張晴等[12]對(duì)黑米稻烏貢和香血糯的花色苷進(jìn)行測(cè)定，含量分別為 842 μg/g和 2844 μg/g。Ryu等[23]對(duì) 591 份不同種類的水稻的花色苷含量進(jìn)行分析，結(jié)果表明該色素含量的變異范圍是 0～4751 μg/g， 則矢車菊色素為 0～4519 μg/g， 芍藥色素為 0～427 μg/g。

2.2 環(huán)境因素對(duì)水稻色素含量的影響

稻谷的花色苷含量不僅受遺傳控制，而且還受到環(huán)境影響[24]。張名位等[22]研究不同播期對(duì)花色苷含量的影響，結(jié)果表明該色素含量與其抽穗后 30 d 的各種氣候因素有關(guān)， 隨著日均溫及日均光照時(shí)數(shù)的升高累積量下降，而隨著日均相對(duì)濕度的上升而積累量升高。賀浩華等[25]將 5 個(gè)不同黑米稻品種設(shè)置不同的播期，探究在不同的播期下，各種氣候因子對(duì)花色苷積累的影響，得出不同播期種植的品種該色素對(duì)溫度反應(yīng)最為敏感，早期和中期播種的品種所處的溫度比較高，導(dǎo)致高溫逼熟，該色素累積不完全使其含量不高；晚期播種的品種處于溫度適宜的條件下，使穎果沉積色素一致，該色素含量上升。

蔡光澤[26]對(duì)紅米稻赤糯和黑米稻朝紫進(jìn)行研究，結(jié)果表明水稻花色苷含量的高低與溫度變化一致，溫度高有利于紅米稻的色素含量提高， 穎果沉積色素上升，而黑米稻則相反；黑色稻米適宜于冷涼、晝夜溫差大的生態(tài)點(diǎn)栽種，有助于該色素的積累，而紅色稻米適宜于溫度較高、晝夜溫差較小的生態(tài)點(diǎn)栽種，有助于苷色素的沉積。

3 水稻花色苷的生物合成途徑

花色苷是由2-苯基苯并芘與黃烊鹽離子的多羥基及多甲氧基衍生物構(gòu)成的 18 種花色苷的糖苷合成物?；ㄉ帐菢?gòu)成色彩的主要物質(zhì)[27-28]。該色素的沉積大約有20 步生化反應(yīng)，總共有15個(gè)合成基因及2 類(myb和myc型)調(diào)節(jié)基因參加[29-31]。它的主要合成過程如圖 1[32-35]?；ㄉ赵诩t米穎果中的外表面累積，使穎果表明出現(xiàn)不同的顏色。

PAL：苯丙氨酸合成酶；C4H：肉桂酸-4-羥基羧化酶；4CL：對(duì)香豆酰-CoA 連接酶；CHS：查爾酮合成酶；CHI：查爾酮異構(gòu)酶；F3H：黃烷酮-3-羥基化酶；F3′H：類黃酮-3′-羥基化酶；F3′5′H：類黃酮-3′， 5′-羥基化酶；DFR：二氫黃酮醇還原酶；ANS：花色苷合成酶；3GT： 類黃酮葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶

3.1 參與色稻花色苷合成的主要基因

有15個(gè)合成基因及2 類(myb 和myc 型)調(diào)節(jié)基因參與該色素合成的生化反應(yīng)。借助于模式植物的研究， PAL、CHS、CHI、F3H、F3′H、F3′5′H、DFR、ANS、UFGT等基因從不同植物中獲得分離。

3.1.1苯丙氨酸合成酶(PAL)基因 苯丙氨酸合成酶(phenylalanine ammonia-lyase， PAL)是參與該色素生化反應(yīng)的第一個(gè)酶，并作為催化劑使L-丙氨酸快速合成反式肉桂酸。Koukol和Conn第一次從綠色植株中發(fā)現(xiàn)了PAL酶及對(duì)它做了最初的純化[36-37]。該基因存在于水稻的第5染色體上，能在水稻的所有部位表達(dá)，其中根和莖中的表達(dá)比其他部位高[38]。有研究表明，PAL的活性能被UV-B所誘導(dǎo)[39-40]。

3.1.2查爾酮合成酶(CHS)基因 在查耳酮合成酶(Chalcone synthase，CHS)催化下，丙二酰的3個(gè)乙酸基及4-香豆酰Co在對(duì)乙酸基合成查耳酮。CHS是花色苷合成途徑中第一個(gè)被分離的基因，最早是從歐芹(Petroseliumcrispum)懸浮細(xì)胞得到[41]。該基因位于水稻第11染色體，被定位于RFLP的RG2和RG103標(biāo)記之間[42]。它在水稻的所有部位均有表達(dá)，其中莖和種子中的表達(dá)量比較高，且花后13 d的種子表迗量顯著高于花后2和7 d的表達(dá)量[43]。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)表明，在花青素的生物合成途徑中，OsCHS同型二聚體以某一特定的方向與OsDFR和OsANS相互作用，共同形成了一個(gè)大分子聚合物[44]

3.1.3查爾酮異構(gòu)酶(CHI)基因 查爾酮異構(gòu)酶(Chalcone isomerase， CHI)催化類黃酮合成途徑的第二步反應(yīng)，它將查兒酮異構(gòu)化為黃烷酮(無色)。該反應(yīng)也可自發(fā)完成，黃烷酮是類黃酮合成途徑中第一個(gè)穩(wěn)定的中間產(chǎn)物。這個(gè)基因在不同禾本科植物基因組中的拷貝數(shù)不同，在玉米基因組中有三個(gè)拷貝，但在水稻與大麥基因組中卻只有一個(gè)拷貝[45]。

3.1.4黃烷酮3-羥化酶(F3H)基因 黃烷酮3-羥化酶(F3H)基因最早是從金魚草(Antirrhinummajus)中克隆得到[46]。F3H基因催化形成的二氫黃酮醇，在細(xì)胞漿中產(chǎn)生后轉(zhuǎn)移到液泡中轉(zhuǎn)化為花色苷[47]。F3H主要參與黃酮醇和花色苷的生物合成，它的表達(dá)量在花后13 d的黑米種子中最高[38]。Kim等克隆了水稻的三個(gè)F3H序列，發(fā)現(xiàn)F3H-1具有最高的酶活，F(xiàn)3H-2在所有組織中的表達(dá)量最高但在種子中不表達(dá)[48]。

3.1.5類黃酮3′-羥化酶(F3′H)和類黃酮3′，5′-羥化酶(F3′5′H)基因 類黃酮-3′-羥化酶(flavonoid 3′-hydroxylase，F(xiàn)3′H)和類黃酮-3′，5′-羥化酶(flavonoid 3′，5′-hydroxylase，F(xiàn)3′5′H)分別屬于P450家族的CYP75B家族和CYB75A家族[49]。在花色苷合成途徑中，二氫棟精在二氫黃酮醇4-還原酶(DFR)和花色素合成酶(ANS)等酶的催化下生成紫紅色花色苷(矢車菊色素，cyanidin) F3′5′H催化DHK的B-環(huán)3'和5′位置羥基化生成二氫楊梅黃酮(Dihydromyricetin，DHM)， F3′5′H基因的表達(dá)趨向于合成花翠素，使花色偏藍(lán)[50]。秦宗燕等[51]對(duì)野生稻的幾個(gè)合成基因進(jìn)行研究，結(jié)果表明在葉中表達(dá)量最多的是F3′5′H，而 F3′H的表達(dá)量最少。Huang等[52]的研究表明這兩個(gè)基因同時(shí)編碼類黃酮代謝過程有關(guān)的酶、調(diào)控該色素的下游和合成類黃酮的“分界線”。Ryu等[36]分析了10個(gè)色稻品種， 認(rèn)為在色稻籽粒中相對(duì)于F3′5′H來說， F3′H的表達(dá)占優(yōu)勢(shì)， 使得下游途徑由二氫槲皮素(dihydroquercetin， DHQ)經(jīng)過DFR、ANS以及UFGT基因的催化而合成花色苷。

3.1.6二氫黃酮醇-4-還原酶(DFR)基因 育種家最初是在玉米與金魚草中發(fā)現(xiàn)并通過分離及克隆得到該基因，結(jié)果表明該色素的顯色機(jī)理是受DFR基因的調(diào)節(jié)[53]。DFR在不同品種間的表達(dá)表現(xiàn)出空間專一性調(diào)控[54]。將DFR轉(zhuǎn)入Rcrd水稻中，種皮顏色從褐色變成了紅色，表明Rd編碼了DFR蛋白[55]。Phoka等[56]對(duì)水稻花色苷含量運(yùn)用RT-PCR方法，得出該基因表達(dá)量的多少受溫度變化的影響，高溫使它的表達(dá)量降低，并且該基因表達(dá)量高低直接影響花色苷積累量。

3.1.7花色苷合成酶(ANS)基因 1990年Messen等采用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽技術(shù)從玉米中分離出了ANS基因[57]，之后在金魚草和矮牽牛中也分離出此基因[47，57]色素合成酶(ANS)是位于花色苷合成通路末端的酶，催化了無色花色素向花色素的轉(zhuǎn)化。ANS能催化無色花色素轉(zhuǎn)化成花色素，它具有一個(gè)雙層的β螺旋結(jié)構(gòu)[39]。ANS在水稻突變體中的過量表達(dá)導(dǎo)致花色素和其他類黃酮物質(zhì)的積累，而原花色素含量卻下降[39]。有研究表明，ANS在黑米花13 d后的表達(dá)量最高，在白米中也有少量表達(dá)[38]。因而，稻谷的種皮和果皮的著色差異是合成該色素基因的差異性表達(dá)。

3.1.8類黃酮-3-O-糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT)基因

使UFGT基因上的葡萄糖基移到C3羥基上(花色素)，使游離的花色素變?yōu)槔喂痰幕ㄉ?。UFGT生物活性最初在玉米的花藥中被發(fā)現(xiàn)和克隆[58]。糖基化的花色素分子有以下作用：改變植物花色、保持分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定及保證該色素勝利運(yùn)送到液泡中[59]。Phoka等[56]通過RT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，水稻中的葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT)基因也已經(jīng)克隆。

4 結(jié)語與展望

目前大多通過肉眼和顯微鏡觀察稻米花色苷的著色規(guī)律，對(duì)糙米的著色深淺給予評(píng)價(jià)，應(yīng)對(duì)稻米花色苷含量進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)不同的含量進(jìn)行顏色分級(jí)，為今后稻米花色苷含量的評(píng)價(jià)給予參考。稻米的花色苷主要存在于種皮和果皮中，它是經(jīng)過一系列的生理、生化反應(yīng)和結(jié)構(gòu)基因、運(yùn)用調(diào)節(jié)基因的參與形成，今后可通過對(duì)各種基因定位和育種手段培育出谷粒中富含花色苷的稻米新品種。對(duì)稻米花色苷的合成相關(guān)基因和轉(zhuǎn)錄因子的研究?jī)H停留在表達(dá)水平上，花色苷合成相關(guān)基因的全長(zhǎng)和啟動(dòng)子序列在不同品種間是否有差異，基因的功能尚未鑒定，花色苷合成關(guān)鍵候選基因在品種間的遺傳多樣性還有待進(jìn)一步研究明確，今后應(yīng)進(jìn)一步研究花色苷生物合成相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控機(jī)制、克隆稻米的基因及其了解差異表達(dá)機(jī)理，為獲得花色苷含量高的稻米提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Chung H S，Woo W S. A quinoline alkaloid with antioxidant activity from the Aleurone layer of anthocyanin-pigmented rice[J].JNatProd，2001，64(12)：1579-1580.

[2] 胡培松.功能性稻米研究與開發(fā)[J]. 中國(guó)稻米，2003(5)：3-5.

[3] 張名位，郭寶江.色米的營(yíng)養(yǎng)功能特點(diǎn)及相應(yīng)加工技術(shù)研究[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2002，18(增刊)：18- 24.

[4] 方忠祥，倪 元. 花青素生理功能研究進(jìn)展[J]. 廣州食品工業(yè)科技，2001，17(3)：60-62.

[5] 龐志申. 花色苷研究概況[J]. 北京農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000，18(5)：37-42.

[6] Andersen M. Anthocyanins. In： Encyclopedia of Life Sciences.LondonMac[M]. Millan Publishers Ltd. 2002： 597-605.

[7] Devia B， Llabres G， Wouters J，etal. New 3- deoxyanthocyanidins from leaves of Arrabidaea chica[J].PhytochemicalAnalysis，2002， 13： 114-120.

[8] Escribano-Bailón M T，Santos-Buelga C，Rivas-Gonzalo J C. Anthocyanins in cereals[J].JournalofChromatographyA，2004(1054)：129-141.

[9] 徐 杰，林正眉. 貴州黑糯米稻米種皮成分的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào)， 2003，18(2)：9- 13.

[10] Ryu S N，Park S Z，Ho C T . High performance liquid chromatog raphic determination of anthocyanin pigments in some varieties of black rice[J].JournalofFoodandDrugAnalysis， 1998，6(4)：729-736.

[11] 蘇金為. 黑米色素的提取和組分分析[J]. 福建農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，28(2)：233- 237.

[12] 張 晴，陳 勇，李 釤，等. 黑米色素的吸收光譜及色差分析研究[J]. 食品科學(xué)，1999(7)：12-16.

[13] Ichikawa H，Ichiyanagi T，Xu B，etal. Antioxidant activity of an-thocyanin extract from purple black rice[J] .JMedFood， 2001，4(4)：211- 218.

[14] Cho M H，Paik Y S，Yoon H H，etal. Chemical structure of the major color componet from a Korean pigmented rice variety[J].AgriculturalChemistryandBiotechnology，1996，39(4)：304-308．

[15] Giaccherini C，Mulinacci N，Gallori S，etal. Black rice Venere：pigment analysis[J].TecnicaMolitoria，2002，53(7)：660-664.

[16] Choi S W，Nam S H，Choi H C. Antioxidative activity of ethano-lic extracts of rice brans[J].FoodandBiotechnology，1996，5(4)：305-309.

[17] 鐘麗玉，胡秋林.黑米色素分子結(jié)構(gòu)解析[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，1996，11(6)：26-35.

[18] Terahara N，Saigusa N，Ohba R，etal． Composition of anthocyanin pigments in aromatic red rice and its wine[J].JournaloftheJapaneseSocietyforFoodScienceandTechnology，1994，41(7)：519-522.

[19] 張名位. 特種稻米及其加工技術(shù)[M]. 北京：中國(guó)輕工業(yè)出版社，2000：120-125.

[20] Koh H J，Won Y J，Cha G W. Varietal variation of pigmentation and some nutritive characteristics in colored rices[J].KoreanJCropSci，1996，41(5)：600- 607.

[21] Phoka N，Tragoonrung S，Vanavichit A . Anthocyanin intensityin rice grain is regulated by splicing efficiency of dihydroflavonol-4-reductase and is temperature sensitive[J]. Web site：http：//dna.kps.ku.ac .th，2005.

[22] 張名位，郭寶江，池建偉，等.黑米皮的營(yíng)養(yǎng)與抗氧化評(píng)價(jià)及其加工處理的保質(zhì)效果[J]. 農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(bào)，2004，20(6)：165-169.

[23] Ryu S N，Han S J，Park S Z，etal. Antioxidative activity and varietal difference of cyaniding 3-glucoside and peonidin 3-glucoside contents in pigmented rice[J] .KoreanJournalofCropScience，2000，45(4)：257- 260.

[24] 蔡光澤. 環(huán)境因素對(duì)有色米糙米著色程度的影響[J]. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2003，19(4)：71-74.

[25] 賀浩華，余秋英，潘曉云，等. 不同環(huán)境條件對(duì)特種稻產(chǎn)量性狀和色素含量的影響[J]. 耕作與栽培，1997(1-2)：57-60.

[26] 蔡光澤. 不同溫度處理對(duì)有色米糙米著色程度的影響[J]. 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，19(4)：366-368.

[27] 熊 飛，王 忠，顧蘊(yùn)潔，等. 施氮時(shí)期對(duì)揚(yáng)稻6號(hào)穎果發(fā)育及稻米品質(zhì)的影響[J].中國(guó)水稻科學(xué)，2007，21(6)：637-642.

[28] 張 旭，劉彥卓，孔清霞. 高CO2濃度下水稻高產(chǎn)品種特三矮2號(hào)的生長(zhǎng)、產(chǎn)量與米質(zhì)的研究[J]. 應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，1998，4(3)：238-342.

[29] 闕金華，張洪程，戴其根，等. 氮肥對(duì)稻米品質(zhì)影響的研究進(jìn)展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2002(6)：14-16.

[30] 唐傳核.植物生物活性物質(zhì)[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2004：218-231.

[31] 張建明，樸鐘澤，陸家安，等. 中國(guó)特種稻的研究利用現(xiàn)狀與前景[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2002，18(增刊)：53-57.

[32] De Majnik J，Tanner G J，Joseph R G，etal. T ransient expres-sion of maize anthocyanin regulatory genes influences anthocyanin production in white clover and peas Aust[J].JPlantPhysiol，1998(25)：335-343.

[33] Holton T A，Cornish E C. Genetics and biochemistry of anthocyanin biosynthesis[J].ThePlantCell，1995(7)：1071-1083.

[34] Tanaka Y， Tsuda S，Kusumi T . Metabolic engineering to modify flower color[J].PlantCellPhysiol，1998，39(11)：1119-1126.

[35] 孫明茂，韓龍植，李圭星，等. 水稻花色苷含量的遺傳研究進(jìn)展[J]. 植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2006，7(2)：239-245.

[36] Cunha A.Purification，characterization and induction of L-phenylalanine ammonia-lyase in phaseolus vulgaris[J].EurJBiochem，1998，178(1)：243-248.

[37] 歐陽光察，薛應(yīng)龍. 植物苯丙烷代謝的生理意義及調(diào)控[J]. 植物生理學(xué)通訊，1988(3)：9-16.

[38] Kim B.G，Kim J.H，Min S.Y，etal. Anthocyanin content in rice is related to expression levels of anthocyanin biosynthetic genes [J].JournalofAgriculturalandFoodChemistry，2007(55)：1241-1247.

[39] Reddy A.M，Reddy V.S，Scheffler B.E，etal. Novel transgenic rice overexpressing anthocy-anidin synthase accumulates a mixture of flavonoids leading to an increased antioxidant potential [J].MetabolicEngineering，2007(9)：95-111.

[40] Sarma A.D，Sharma R. Purification and characterization of UV-B induced phenylalanine ammonia-lyase from rice seedings[J].Phytochemistry，1999(50)：729-737.

[41] Kreuzaler F，Ragg H，F(xiàn)autz E，etal. UV-induction of chalcone synthase mRNA in cell suspension cultures ofPetrosklinumhortense[J].ProcNatlAcadSciUSA，1983，80(1)：2591-2593.

[42] Win-Shirley B.Biosynthesis of flavonoids and effects of stress[J].CurrOpinPlantBiol，2002，5(3)：218-223.

[43] Han Y，Wang J，Han N，etal. Duplication and sequence divergence of rice chalcone synthase genes[J].RussianJournalofplantPhysiology，2009(56)：417-422.

[44] Reddy A.R，Scheffler B，Madhuri G，etal. Chalcone synthase in rice (OryzasativaL.)： detection of the CHS protein in seedings and molecular mapping of the chs locus[J].PlantMolecularBiology，1996(32)：735-743.

[45] Druka A，Kudrna D，Rostoks N，etal. Chalcone isomerase gene from rice (Oryzasativa) and barley (Hordeumvulgare)： physical，genetic and mutation mapping[J].Genes，2003(302)：171-178.

[46] Martin C，Carpenter R，Sommer H，etal. Control of anthocyanin biostnthesis in flowers of Antirrhinum majus[J].PlantJ，1991(1)：37-49.

[47] Wanger G J. Content and vacuo leoextravacuole distribution of neutral sugars，free amino acids and anthocyanin in protoplasts [J].PlantPhysiol，1979(64)：88-93.

[48] Kim J S，LeeY J，Kim B G，etal. Flavanone 3 beta-hydroxylase from rice： key enzymes for favonol and anthocyanin biosynthesis [J].Moleculesandcells，2008(25)：312.

[49] Brugliera F，Barri-Rewell G，Holton TA，etal. Isolation and characterization of a flavonoid 3′-hydroxylase cDNA clone corresponding to theHtllocus ofPetuniahybrida[J].PlantJ，1999，19(4)：441-451.

[50] Holton TA，Brugliera F，Lester DR，etal. Cloning and expression of cytochrome P450 genes controlling flower color [J].Nature，1993，366(6452)：276-279.

[51] 秦宗燕， 劉石娟，包 穎. 藥用野生稻葉中花色苷合成基因的序列特點(diǎn)與表達(dá)差異[J]. 植物生理學(xué)報(bào)，2016，52 (8)： 1248-1254.

[52] Huang W， Sun W， Wang Y. Isolation and molecular characterisation of flavonoid 3′-hydroxylase and flavonoid 3′，5′-hydroxy-lase genes from a traditional Chinese medicinal plant， Epimedium sagittatum [J].Gene， 2012，497 (1)： 125-130.

[53] O’Reilly C，Shepherd NS，Pereira A，etal. Molecular cloning of the al locus inZeamaysusing the transposable elements En and Mul[J].EMBOJ，1985(4)：877-882.

[54] 林 泉. 色素基因的表達(dá)和調(diào)控植物發(fā)育的分子機(jī)理[M]. 北京：科學(xué)出版社，1998：107-119.

[55] Furukawa T，Maekawa M，Oki T，etal. TheRcandRdgenes are involved in proanthocyanidin synthesis in rice pericarp[J].TheplantJoural，2007(49)：91-102.

[56] Phoka A.N，Tragoonrung S，Vanavichit A. Anthocyanin intensity in rice grain is regulated by splicing efficiency of dihydroflavonol-4-reductase is temperature sensitive[J].http：//dna.kps.ku.ac.th，2005.

[57] Messen A，Hohmann S，Martin W，etal. The En/Spn transposable element of Zea mays contains splice sites at the termini generating a novel intron from a dSpm element in the A2 gene[J].EMBOJ，1990(9)：3051-3058.

[58] Weiss D，Vander Luit A.H，Kroon JTM，etal. The petunia homologue of theAntirrhinummajuscandi andZeamaysA flavonoid genes：homology to flavonone 3-hydroxylase and the ethylene forming enzyme[J].PlantMol.Biol，1993(22)：893-897.

[59] 盧 枉，董現(xiàn)義，杜景平，等. 花色苷研究進(jìn)展[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，35(2)315-320.