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    血清CGB和GnRH1 mRNA表達(dá)與妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤血行轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究

    2018-05-10 01:34:30李莉李濤
    關(guān)鍵詞:血清檢測

    李莉,李濤

    (西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 腫瘤科,四川 瀘州 646000)

    妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾?。╣estational trophoblastic disease,GTD)是一組來源于胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞的疾病,根據(jù)組織學(xué)將其分為葡萄胎(hydatidiform mole,HM)、侵蝕性葡萄胎(invasive mole,IM)、妊娠性絨毛膜癌(gestational choriocarcinoma,GCC)及胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤[1]。而侵蝕性葡萄胎、妊娠性絨毛膜癌和胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤又統(tǒng)稱為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤(gestational trophoblastic neoplasia,GTN)。GTN可繼發(fā)于葡萄胎、流產(chǎn)、異位妊娠及足月產(chǎn)等,其中約60%來源于葡萄胎[2]。一些腫瘤細(xì)胞擁有能力穿透血管壁,在血液中循環(huán),達(dá)到身體的其他領(lǐng)域。這些循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cell,CTC)是血行轉(zhuǎn)移和腫瘤進(jìn)展的重要原因之一[3]。因此檢測患者外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞可能對評估GTN早期血行轉(zhuǎn)移、檢測治療和預(yù)后起重要作用。

    人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)是由α和β 2條多肽鏈通過非共價(jià)鍵結(jié)合,β亞基決定其免疫特性[4],人絨毛膜促性腺激素β亞基(human chorionic gonadotropin beta subunit,CGB)作為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤標(biāo)志物之一,長期被用于GTN的診斷、療效評估和隨訪。人類促性腺激素釋放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)是由下丘腦分泌的十肽激素,在性成熟和生殖繁育能力方面起重要作用。人體中存在2種亞型GnRH1和GnRH2,在卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌和前列腺癌中GnRH1表達(dá)水平升高[5],并且已證明GnRH1的受體激動劑可以抑制卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡[6]。有研究表明在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜非典型增生時(shí)CGB的表達(dá)增加同時(shí)伴有GnRH1表達(dá)增加[7]。

    本研究通過采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測GTN患者血清CGB和GnRH1 mRNA表達(dá)情況,探討其表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的相互關(guān)系,尋找診斷GTN患者早期血行轉(zhuǎn)移的可能標(biāo)志物。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象

    選取2014年1月-2015年6月西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、四川省遂寧市射洪縣人民醫(yī)院和四川省腫瘤醫(yī)院3所醫(yī)院腫瘤科門診確診的GTN患者52例(GTN組)和HM患者21例(HM組),同期體檢正常妊娠婦女20例(正常妊娠組)和非妊娠婦女20例(非妊娠組)的基本臨床資料及外周血5 ml。52例GTN患者,年齡16~42歲,平均(29.7±0.31)歲;末次妊娠為葡萄胎者41例(78.8%),流產(chǎn)9例(17.3%),異位妊娠1例(1.9%),足月產(chǎn)1例(1.9%)。

    1.1.1 GTN組 納入標(biāo)準(zhǔn):①初診的妊娠性絨毛膜癌、侵蝕性葡萄胎或中間型滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤患者;②經(jīng)B超、影像學(xué)或病理學(xué)診斷確診。排除標(biāo)準(zhǔn):①已接受藥物或手術(shù)治療的GTN患者;②不能配合研究抽取外周血的患者;③非妊娠性絨毛膜癌患者;④其他腫瘤病史者。

    1.1.2 HM組 納入標(biāo)準(zhǔn):初診經(jīng)B超、影像學(xué)或病理學(xué)確診的葡萄胎患者。排除標(biāo)準(zhǔn):已接受過藥物或手術(shù)治療;其他腫瘤病史者。

    1.1.3 正常妊娠組 納入標(biāo)準(zhǔn):經(jīng)血β-HCG和B超確診的孕8~12周正常妊娠婦女。排除標(biāo)準(zhǔn):既往有葡萄胎病史;既往有其他腫瘤病史。

    1.2 GTN的診斷及FIGO分期

    根據(jù)患者妊娠后(包括葡萄胎組織排空以后或流產(chǎn)、異位妊娠及足月產(chǎn)后)出現(xiàn)的相應(yīng)癥狀和體征(如陰道流血,肺轉(zhuǎn)移等),結(jié)合患者的血清HCG水平,GTN的診斷可以確定,影像學(xué)和組織學(xué)檢測對診斷是非必須的。FIGO分期:所有患者依據(jù)國際婦產(chǎn)科協(xié)會(the International Federation of Gynecology and Obstetrics,F(xiàn)IGO)2002年頒布的新的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期及預(yù)后評分[8-9],0~6分為低危,≥7分為高危。

    1.3 總RNA提取及RT-PCR

    RNA提取試劑盒RNAfast 200購自上海飛捷生物科技有限公司,RT-PCR試劑盒[Prime Script? RT reagent Kit(Perfect Real Time)]及 real-time PCR 試劑盒[SYBR?Premix Ex Taq?Ⅱ(Tli RNaseH Plus)]均購自寶生物工程(大連)有限公司。CGB引物(正向5'-AGCCAAAGACCGCTACG-3';反向5'-TG AGGGGACAAGCTACCG-3’),GnRH1引物(正向5'-GACCTGAAAGGACTCTGGA-3';反向 5'-CTTCTGGCC CAATGGATTTA-3')[10]均由上海吉瑪生物科技有限公司合成。按RNAfast 200說明書分別提取血液中總RNA,經(jīng)紫外分光光度計(jì)檢測,OD260/OD280者為合格樣品。取500 ng總RNA為模板,按RT-PCR試劑盒說明書配制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系,RNA水平使用2-??Ct方法相對定量。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn),組間兩兩比較使用q檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用例表示,采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 GTN組、HM組、正常妊娠組及非妊娠組血清CGB和GnRH1 mRNA表達(dá)情況

    各組CGB mRNA、GnRH1 mRNA RT-PCR典型條帶圖見圖1、2。20例非妊娠組血清中CGB mRNA陰性,GnRH1 mRNA表達(dá)較少;20例正常妊娠組CGB mRNA和GAPDH mRNA 較少量表達(dá);21例HM組和52例GTN組CGB mRNA和GAPDH mRNA表達(dá)均有所升高。4組患者血清CGB mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=9.748,P=0.005),說明4組血液中CGB mRNA表達(dá)水平不同,GTN組血清中CGB mRNA水平高于其余3組。4組血清GnRH1 mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=6.522,P=0.018),說明4組血液中GnRH1 mRNA表達(dá)水平不同,GTN組血清中GnRH1 mRNA水平升高,見表1。

    2.2 GTN組血清CGB mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

    根據(jù)臨床指標(biāo)中年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目、臨床分期、預(yù)后評分等因素分組。分別比較不同組中血清CGB mRNA表達(dá)情況。其中CGB mRNA表達(dá)與年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小無關(guān)(P>0.05);與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目、臨床分期、FIGO預(yù)后相關(guān)(P<0.05)。見表2。

    2.3 GTN組血清GnRH1 mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

    根據(jù)臨床指標(biāo)中年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目、臨床分期、預(yù)后評分等因素分組。分別比較不同分組中血清GnRH1 mRNA表達(dá)情況。其中GnRH1 mRNA表達(dá)與年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目無關(guān)(P>0.05);與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期、FIGO預(yù)后相關(guān)(P<0.05)。見表3。

    圖1 GnRH1 mRNA RT-PCR條帶圖

    圖2 CGB mRNA RT-PCR條帶圖

    表1 各組血清CGB和GnRH1 mRNA表達(dá)情況

    表2 GTN組血清CGB mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

    3 討論

    GTN是胚胎的滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生惡變而形成的腫瘤,包括中間型滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、侵蝕性葡萄胎和妊娠性絨毛膜癌。妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤患者死亡的重要原因多數(shù)是發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,如肺轉(zhuǎn)移、肝轉(zhuǎn)移、腦轉(zhuǎn)移等。一些腫瘤細(xì)胞擁有能力穿透血管壁,在血液中循環(huán),到達(dá)身體的其他領(lǐng)域。CTC反映了腫瘤的侵犯,因此早期發(fā)現(xiàn)血液中的CTC,對于患者預(yù)后判斷、療效評價(jià)和個(gè)體化治療都有著重要的指導(dǎo)作用。GTN是胚胎的滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生惡變,因此外周血中檢測惡變的細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞和合體滋養(yǎng)細(xì)胞,有助于早期發(fā)現(xiàn)腫瘤血行轉(zhuǎn)移。目前,直接檢測腫瘤細(xì)胞技術(shù)較為復(fù)雜,檢測周期較長,臨床推廣困難,因此檢測外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞的重要任務(wù)是尋找其特異性標(biāo)志物。國外對于檢測妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞的相關(guān)研究報(bào)道較多,而針對國人的報(bào)道則較少[11-12],本研究納入4組不同人群,收集臨床資料和外周血,使用RTPCR檢測各組患者血清CGB和GnRH1 mRNA表達(dá)情況,分析其與妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤早期轉(zhuǎn)移等臨床參數(shù)的關(guān)系,探究其與妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤血行轉(zhuǎn)移的相互關(guān)系。

    表3 GTN組血清GnRH1 mRNA表達(dá)與臨床指標(biāo)的關(guān)系

    CGB是有胎盤合體滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的一種糖蛋白。本研究顯示非妊娠組外周血中無CGB mRNA表達(dá),GTN組外周血中CGB mRNA表達(dá)水平高于HM組、正常妊娠組。GTN組外周血中GnRH1 mRNA表達(dá)水平高于HM組、正常妊娠組和非妊娠組。提示CGB和GnRH1表達(dá)可能作為妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤檢測的標(biāo)志物之一。

    本研究顯示,GTN組外周血CGB mRNA 表達(dá)陽性與年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小無關(guān);與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目、臨床分期、FIGO預(yù)后相關(guān)。GnRH1 mRNA表達(dá)陽性與年齡、前次妊娠、最大腫瘤大小、轉(zhuǎn)移灶數(shù)目無關(guān);與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、臨床分期和FIGO預(yù)后相關(guān)。CGB mRNA和GnRH1 mRNA表達(dá)陽性有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組患者高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組,臨床分期Ⅲ組高于臨床分期Ⅰ、Ⅱ組,F(xiàn)IGO高危組高于FIGO低危組,這些均提示外周血CGB mRNA和GnRH1 mRNA表達(dá)與轉(zhuǎn)移相關(guān)臨床指標(biāo)相關(guān),因此CGB和GnRH1可能成為評估妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤早期血行轉(zhuǎn)移的有效評價(jià)指標(biāo)。

    參 考 文 獻(xiàn):

    [1] SANTORO G, LAGANà A S, MICALI A, et al. Historical,morphological and clinical overview of placental site trophoblastic tumors: from bench to bedside[J]. Archives of Gynecology and Obstetrics, 2017, 295(1): 173.

    [2] 朱曉旭, 錢建華, 掌佩文, 等. 不同HCG水平妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤的臨床特征和治療分析[J]. 浙江醫(yī)學(xué), 2016, 38(9): 611-613.

    [3] GERGES N, RAK J, JABADO N. New technologies for the detection of circulating tumour cells[J]. British Medical Bulletin,2010, 94(1): 49-64.

    [4] COHEN L, BOUSFIELD G R, BEN-MENAHEM D. The recombinant equine LHβ subunit combines divergent intracellular traits of human LHβ and CGβ subunits[J]. Theriogenology, 2015,83(9): 1469-1476.

    [5] HUANG P P, BRUSMAN L E, IYER A K, et al. A novel gonadotropin-releasing Hormone 1 (Gnrh1) enhancer-derived noncoding RNA regulates Gnrh1 gene expression in GnRH neuronal cell models[J]. PLoS One, 2016, 11(7): eo158597.

    [6] FAN L, SHIEKHATTAR R. Enhancer RNAs: the new molecules of transcription[J]. Current Opinion in Genetics & Development,2014, 25(4): 38-42.

    [7] PNUELI L, RUDNIZKY S, YOSEFZON Y, et al. RNA transcribed from a distal enhancer is required for activating the chromatin at the promoter of the gonadotropin α-subunit gene[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2015, 112(14): 4369-4374.

    [8] COMMITTEE F O. FIGO staging for gestational trophoblastic neoplasia 2000. FIGO Oncology Committee[J]. International Journal of Gynecology & Obstetrics, 2002, 77(3): 285-287.

    [9] 雷呈志, 向陽, 萬希潤, 等. 足月產(chǎn)后絨毛膜癌患者的臨床特征與預(yù)后分析[J]. 中華婦產(chǎn)科雜志, 2006, 41(11): 752-755.

    [10] MIROS?AW A. CGB and GNRH1 expression analysis as a method of tumor cells metastatic spread detection in patients with gynecological malignances[J]. Journal of Translational Medicine,2011, 9(1): 1-9.

    [11] SUZUKA K, MATSUI H, IITSUKA Y, et al. Detection of betasubunit human chorionic gonadotropin mRNA in the peripheral blood of patients with nonmetastatic gestational trophoblastic disease[J]. Gynecologic Oncology, 2002, 86(1): 53-56.

    [12] 朱建春. 妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤外周血腫瘤細(xì)胞檢測方法的臨床研究[J]. 醫(yī)藥論壇雜志, 2011, 13(21): 98-100.

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