胰升血糖素樣肽1對新診斷糖尿病患者分泌型卷曲相關(guān)蛋白1和β-連環(huán)蛋白表達水平的影響

王笑燁，袁景，孫崢，梁麗

[中國醫(yī)科大學人民醫(yī)院（遼寧省人民醫(yī)院） 內(nèi)分泌科，遼寧 沈陽 110016]

研究[1]發(fā)現(xiàn)，空腹血糖受損的肥胖人群β細胞量已降至正常人的60%，而新診斷2型糖尿?。╰ype 2 diabetes mellitus，T2DM）患者的β細胞量僅為正常人的30%～70%。Wnt信號通路在細胞正常增殖、復制、分化過程調(diào)控中發(fā)揮重要作用，其異?；罨c腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。其中，分泌型卷曲相關(guān)蛋白1（secreted frizzled related protein 1，SFRP1）和β-連環(huán)蛋白（β-catenin）在通路中均具有重要的作用[2]。胰升血糖素樣肽1（glucagon-like peptide 1，GLP-1）是由腸道L細胞分泌的具有多種功能的腸肽激素[3]，研究[4-5]發(fā)現(xiàn)，Wnt信號通路通過直接或與GLP-1、炎癥通路等相互作用的方式對胰島β細胞的新生、增殖及其功能發(fā)揮調(diào)控作用，且可能介導外周組織與β細胞的對話機制，但國內(nèi)該方面的相關(guān)研究較少。因此，本研究通過觀察接受GLP-1類似物利拉魯肽治療后新診斷T2DM患者SFRP1和β-catenin表達水平的變化，探討GLP-1對Wnt信號通路作用的可能機制，旨在為T2DM的治療提供新的思路和方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1～12月于遼寧省人民醫(yī)院內(nèi)分泌門診就診或病房住院治療的新診斷T2DM患者（T2DM組）72例作為研究對象，均符合1999年WHO關(guān)于糖尿病的診斷標準。其中，男性34例，女性38例；年齡45～65歲，平均（51.36±3.31）歲；糖尿病病程5～12個月，平均（6.19±2.08）個月。排除標準：T1DM、成人隱匿性自身免疫性糖尿病及其他特殊類型糖尿病患者；合并惡性腫瘤、嚴重肝腎功能障礙、急性感染、慢性炎癥、外傷等應激狀態(tài)者；患者入組前已開始接受降糖治療，包括口服藥、胰島素及開始控制飲食和運動干預。另選取同期體檢健康者80例作為健康對照（NC）組。其中，男性35例，女性45例；年齡44～63歲，平均（51.89±3.88）歲。本研究已經(jīng)過該院倫理委員會審核，研究對象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法 T2DM組給予GLP-1類似物治療（利拉魯肽，國藥準字J20160037，天津諾和諾德公司），前4周予1.2 mg 1次/d，4周后更改為1.8 mg 1次/d，共治療12周。同時給予飲食和運動干預治療。

1.2.2 指標測定 收集患者的性別、年齡、糖尿病病程、身高、體重等一般資料。分別于入組時、治療12周及停藥12周后測量患者的血壓，計算體重指數(shù)（BMI）?？崭?2 h以上于次日晨起抽取空腹靜脈血，檢測血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（Hemoglobin A1c，HbA1c）、胰島素、血脂。血糖和血脂采用日本奧林巴斯公司AU2700全自動生化分析儀，以酶法測定；空腹胰島素（fasting insulin，F(xiàn)ins）采用中國原子能科學研究院藥盒，以放射免疫法測定；HbA1c采用美國BIO-RAD公司生產(chǎn)的Variant Ⅱ糖化血紅蛋白分析儀，以高效液相色譜法測定。采用穩(wěn)態(tài)模型評估法評估胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）與胰島素β細胞功能指數(shù)（HOMA-β），即HOMA-IR=Fins×FPG/22.5，HOMA-β=（20×FIns）/（FPG-3.5）。

1.2.3 SFRP1和β-catenin水平檢測 于入組時、治療12周時及停藥12周時，分別抽取空腹靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心10 min，分離取上層血清，置于-80℃冰箱冷凍保存。采用酶聯(lián)吸附免疫法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測SFRP1和βcatenin水平，試劑盒購自武漢艾美捷科技有限公司，均按照說明書進行操作，批內(nèi)差異＜10%，批間差異＜15%。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，同組間不同時間比較采用方差分析，兩兩比較采用配對樣本t檢驗，并對檢驗水準進行校正。計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組治療前基線資料的比較

T2DM 組 BMI、FPG、Fins、HbA1c、HOMA-IR、SFRP1及β-catenin與NC組比較，經(jīng)獨立樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=-6.426、-21.059、-16.954、-24.688、-57.261、-13.510 及 -48.714，均P=0.000），T2DM組高于NC組。兩組HOMA-β比較，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.560、P=0.000），T2DM組低于NC組。見表1。

2.2 T2DM組不同時間基線資料和SFRP1及β-catenin水平變化的比較

治療12周和停藥12周時BMI、FPG、HbA1c、TC、HDL-C及HOMA-IR與入組時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.307、5.567、3.173、8.800、7.991、7.694、9.044、2.978、4.338、3.498、10.002 及 10.592，P=0.000、0.000、0.004、0.000、0.000、0.000、0.000、0.006、0.000、0.002、0.000 及0.000），治療12周和停藥12周低于入組時；治療12周和停藥12周時HOMA-β與入組時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=-3.968和-2.054，P=0.000和0.003），治療12周和停藥12周高于入組時。治療12周時和停藥12周時SFRP1與入組時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=-9.294和-9.927，均P=0.000），治療12周時和停藥12周時高于入組時；停藥12周時SFRP1與治療12周時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=6.355，P=0.000），停藥12周時低于治療12周時。治療12周時和停藥12周時β-catenin與入組時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=18.468和6.956，均P=0.000），治療12周時和停藥12周時低于入組時；停藥12周時β-catenin與治療12周時比較，采用配對樣本t檢驗，差異有統(tǒng)計學意義（t=18.129，P=0.000），停藥12周時高于治療12周時。見表2和附圖。

表1 兩組治療前基線資料的比較

表2 T2DM組不同時間基線資料和SFRP1、β-catenin水平變化的比較 （n =72，±s）

表2 T2DM組不同時間基線資料和SFRP1、β-catenin水平變化的比較 （n =72，±s）

注：1）與入組時比較，P ＜0.05；2）與治療12周比較，P ＜0.05

項目 入組時 治療12周 停藥12周 F值 P值BMI/（kg/m2） 25.07±1.62 23.50±1.171） 22.96±0.941） 52.212 0.000 SBP/mmHg 114.46±9.37 113.49±6.23 111.07±7.43 3.621 0.028 DBP/mmHg 74.77±12.38 71.99±9.77 73.44±11.53 1.094 0.337 FPG/（mmol/L） 7.73±1.33 6.68±1.131） 6.80±1.091） 16.851 0.000 Fins/（mmol/L） 10.92±1.21 10.14±3.24 9.62±3.58 3.732 0.026 HbA1c/% 9.33±1.32 6.63±1.301） 6.77±0.961） 114.625 0.000 TC/（mmol/L） 4.89±0.65 3.81±0.531） 3.73±0.331） 111.612 0.000 TG/（mmol/L） 1.59±0.46 1.40±0.30 1.49±0.34 4.677 0.01 LDL-C/（mmol/L） 2.90±0.72 2.61±0.74 2.69±0.60 3.398 0.035 HDL-C/（mmol/L） 1.67±0.38 1.30±0.301） 1.27±0.521） 21.238 0.000 HOMA-IR 3.82±0.22 2.85±0.491） 2.93±0.371） 147.199 0.000 HOMA-β 52.40±41.73 85.91±25.561） 67.65±30.871） 18.162 0.000 SFRP1/（ng/L） 279.90±23.39 378.88±48.091） 363.71±47.211）2） 120.633 0.000 β-catenin/（ng/L） 15.92±2.49 6.93±0.781） 11.87±2.231）2） 376.649 0.000

附圖 T2DM組不同時間SFRP1及β-catenin水平變化的比較

3 討論

Wnt信號轉(zhuǎn)導通路參與調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化、運動及凋亡等，是細胞發(fā)育及形態(tài)形成所必需。Wnt信號通路的卷曲蛋白受體在人的胚胎以及成年胰腺的外分泌部和胰島細胞上均有表達，Wnt信號通路的各種組成成分與胰島母細胞增殖及胰島素分泌關(guān)系密切。SFRP1是Wnt信號通路的負調(diào)控因子，是Wnt信號通路的主要拮抗劑，而β-catenin作為Wnt信號傳導途徑的核心元件參與通路調(diào)節(jié)，異常激活可以導致腫瘤、纖維增生等疾病的發(fā)生[6-7]。動物實驗[8-9]發(fā)現(xiàn)，SFRP1和β-catenin與腎小管間質(zhì)纖維化具有密切關(guān)系，可能導致糖尿病慢性腎臟疾病的發(fā)生和發(fā)展。在本研究中，T2DM組SFRP1和β-catenin水平高于NC組，提示糖尿病患者血清SFRP1和β-catenin水平較健康人升高，考慮可能與Wnt/β聯(lián)蛋白信號通路在胰島β細胞功能調(diào)控中的作用有關(guān)。Wnt/β聯(lián)蛋白信號通路不僅可以調(diào)控β細胞的生長存活，且對調(diào)控成熟胰島β細胞的分泌功能也有重要的作用。RULIFSON等[10]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)純化的Wnt-3a蛋白溶液通過細胞周期調(diào)節(jié)蛋白刺激小鼠原代β細胞增殖，陽性β細胞的數(shù)量增加2倍，胰島素的分泌量也明顯增加，同時發(fā)現(xiàn)，SFRP1可阻斷此作用。DESSIMOZ等[11]敲除胰腺上皮細胞的β-catenin基因后，發(fā)現(xiàn)胰島細胞數(shù)量減少，胰島素分泌量減少。

陸靜爾等[12]研究發(fā)現(xiàn)，與二甲雙胍治療比較，采用GLP-1治療對于新診斷T2DM患者可以更有效的控制空腹血糖和餐后血糖，同時降低血脂、血壓，改善胰島素抵抗水平等。本研究發(fā)現(xiàn)，與入組時比較，經(jīng)過利拉魯肽治療12周后，T2DM組BMI、FPG、HbA1c、TC、HOMA-IR均較治療前降低，HOMA-β較治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義，與以往研究[13]結(jié)果類似。規(guī)范使用GLP-1類似物利拉魯肽治療HbA1c可降低1.3%～1.5%，并能保護胰島β細胞功能，增加胰島素合成，改善血脂、降低血壓等。本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，利拉魯肽治療12周時和停藥12周時SFRP1較入組時升高，β-catenin較入組時降低，提示GLP-1可調(diào)節(jié)SFRP1和β-catenin的水平。有學者[14]認為，Wnt信號通路可能參與GLP-1對于胰島β細胞的調(diào)控作用，是Wnt/β聯(lián)蛋白通路在糖尿病領域受到重視的原因之一。作為β聯(lián)蛋白與TCF的核內(nèi)結(jié)合蛋白之一，TCF7L2可介導GLP-1在刺激β細胞增殖中的作用[15]。一項以鋰模擬Wnt配體活性效益的動物實驗[16]發(fā)現(xiàn)，在鋰的刺激下，活化的β聯(lián)蛋白可刺激大鼠ppI啟動子的活性，也可以促進原代胎小鼠腸道細胞內(nèi)源性ppI信使RNA的表達和GLP-1的產(chǎn)生。而TCF7L2與ppI啟動子區(qū)域的G2部分的TCF結(jié)合序列在體內(nèi)存在相互作用，且CF7L2基因多態(tài)性與T2DM發(fā)生風險的相關(guān)性已廣泛受到關(guān)注。另外，Wnt配體蛋白Wnt 3a可以刺激ppI啟動子的活化和mRNA的表達，GLP-1對Wnt信號通路可能也有影響[17]。

綜上所述，GLP-1可提高新診斷T2DM患者SFRP1水平，降低β-catenin水平，其原因可能與GLP-1對Wnt信號通路的影響有關(guān)，但具體機制仍需進一步研究。

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