BQ-123對蛛網膜下腔出血大鼠神經功能的保護作用研究*

趙雅寧，李建民，孫竹梅，趙旭，郭向飛，薛承景

（1.華北理工大學 護理與康復學院，河北 唐山 063210；2.華北理工大學附屬醫(yī)院，河北 唐山 063000）

近年的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)我國蛛網膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage，SAH）的發(fā)病率為1‰，死亡率高達30%。除此之外，約有60%以上的患者疑有認知功能缺失及精神障礙等后遺癥，嚴重影響患者生存質量及再就業(yè)[1]。目前，臨床治療中高度重視早期神經保護劑的應用，以防治SAH造成的神經缺陷。BQ-123是由5個氨基酸組成的五環(huán)肽，是內皮素受體（endothelin receptor A，ETA）拮抗劑，可降低血管痙攣、抑制交感神經系統(tǒng)及腎素-血管緊張素系統(tǒng)活性，目前已初步證實對SAH有一定的保護作用[2]，但具體機制尚不明確。研究顯示，SAH導致神經功能缺陷的關鍵是腦損傷后細胞正常的穩(wěn)態(tài)環(huán)境受到破壞，某些信號轉導系統(tǒng)發(fā)生紊亂，導致神經細胞死亡[1-3]。自噬是溶酶體對自身結構進行吞噬降解的過程。研究發(fā)現(xiàn)自噬廣泛存在于正常的生理病理過程中，該過程包括細胞廢物清除、結構重建、生長分化、營養(yǎng)缺乏和腫瘤發(fā)生等[4]。雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，其激活后通過磷酸化其下游的靶蛋白，進而影響細胞自噬進程，在中樞神經系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要作用[5]。但BQ-123對SAH神經功能損傷的保護作用是否與mTOR-自噬通路的活化有關，目前報道甚少。本研究復制大鼠SAH模型，應用mTOR特異抑制劑雷帕霉素和不同劑量BQ-123進行干預，觀察其對海馬區(qū)磷酸化mTOR、自噬關鍵因子Beclin-1和微管相關蛋白1（輕鏈LC3）-Ⅱ（兩者是自噬過程中特異因子，可折射出自噬發(fā)生、發(fā)展的程度）以及大鼠神經功能的影響，以探討B(tài)Q-123對SAH的治療機制。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實驗動物 清潔級雄性SD大鼠160只，體重350～450 g[購置于北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號SCXK（京）2009-003]。隨機分為假手術組（Sham組）、蛛網膜下腔出血組（SAH組）、雷帕霉素組、BQ-123低劑量組和BQ-123高劑量組，每組32只。每組分為6、24、72及144 h 4個時間亞組。

1.1.2 主要試劑 Anti-mTOR、Anti-Beclin1、Anti-LC3-Ⅱ（兔抗大鼠）（北京博奧森公司），mTOR、Beclin-1、LC3引物（生工生物工程上海股份有限公司），實時逆轉錄聚合酶鏈反應（real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，real-time RTPCR）試劑盒（大連寶生物公司），免疫組織化學二抗試劑盒pv6001（北京中杉金橋公司）。

1.2 儀器與設備

Nikon攝影生物光學顯微鏡（日本Nikon公司），5417R冷凍離心機（德國Eppendorf公司），ZH-CSC型穿梭箱及抓力測試儀（安徽正華生物儀器設備有限公司），眼科鑷、眼科剪、無菌線及縫合針等（上海手術器械廠）。

1.3 方法

1.3.1 動物模型復制 參考文獻[6]，采用經典的自體血2次枕大池注血法（間隔48 h分別向枕大池注射自體動脈血0.3 ml）復制大鼠SAH模型。Sham組向枕大池2次注入0.3 ml生理鹽水，余操作均與SAH組一致。雷帕霉素組：復制模型前30 min側腦室注射，劑量為5 μl（10 nmol）/只。BQ-123高、低劑量組：在復制模型前30 min尾靜脈注射BQ-123（將BQ-123用生理鹽水按10 μg/ml稀釋，低劑量組每次給予50 μg/kg、高劑量組每次給予75 μg/kg），然后再復制SAH模型。48 h后重復給藥1次。

1.3.2 模型復制成功判定標準 當行2次枕大池注血時，可見少量血性腦脊液在穿刺部位滲出，該現(xiàn)象充分說明穿刺針位置準確；剝離腦部時肉眼可見極其顯眼的血性液體散在分布腦底基底池部位。模型復制過程中，SAH組死亡7只，1只模型不符合標準被剔除；雷帕霉素組死亡8只，BQ-123低劑量組死亡4只，BQ-123高劑量組死亡2只。上述被剔除動物依次補齊，最終納入統(tǒng)計學分析：Sham組、SAH組、雷帕霉素組、BQ-123 低劑量組和BQ-123高劑量組，每組32只大鼠。

1.3.3 神經功能評測 學習能力評測：每組各時間取4只大鼠，參考文獻[7]，采用ZH-CSC型穿梭實驗視頻分析系統(tǒng)（shuttle box system，SBS）分別測定動物行為學能力。每只大鼠被電擊30次，記錄被動回避潛伏期（passive avoidance latency，PAL）和主動回避反應次數(shù)，主動回避反應次數(shù)占總訓練次數(shù)的百分比即為主動回避反應率（active avoidance reaction rate，AARR）。AARR越高，PAL越短，表明動物學習能力越強。抓力實驗：每組各時間點取4只大鼠，將大鼠放置于抓力測試儀上恰當位置，用腳踩下踏板將顯示器讀數(shù)歸零，用手拉住鼠尾向后下方施加輕微力量，待大鼠握緊抓力桿時，繼續(xù)增加力道，直至大鼠肢體無法抵抗外力且聽到“滴”的響聲時，記錄數(shù)值為本次拉力值。每只大鼠行3次測試，大鼠中間需休息5 min，取平均值作為最終結果。上述各組各時間完成動物神經功能評測后，分別處死，進行病理學及RT-PCR檢測。

1.3.4 腦組織皮質區(qū)形態(tài)結構觀察 每組各時間取4只大鼠，4%多聚甲醛灌注固定后，取腦，截取視交叉平面至大腦橫裂腦組織。石蠟包埋、冠狀切片，片厚5 μm，HE染色。光學顯微鏡下觀察。在有測微尺的光學顯微鏡（×400）下觀察海馬CA1區(qū)神經元形態(tài)變化并計數(shù)該視野下的存活神經元數(shù)量（有明顯細胞膜、細胞核和核仁為存活神經細胞）。具體方法：每只動物取5張海馬區(qū)切片，每張切片選取5個不重復的視野，所以每組都是100個視野，選用Motic 6.0圖像采集以及分析系統(tǒng)計算每個視野存活的神經元數(shù)，以CA1區(qū)每個視野下平均存活細胞數(shù)量表示。

1.3.5 免疫組織化學法檢測mTOR、Beclin-1和LC3-Ⅱ的表達 標本采集同HE染色，切片常規(guī)脫蠟至去離子水，滴加復合消化液后入37℃溫箱孵育20 min，經PBS洗滌3次，每次5 min，入3%過氧化氫封閉內源性過氧化物酶15 min，經PBS洗滌后滴加兔抗鼠mTOR、Beclin-1和LC3-Ⅱ多克隆抗體（1∶300，1∶250，1∶250），4℃過夜；37℃復溫45 min，PBS洗滌后滴加生物素化二抗，37℃ 40 min，PBS洗滌；DAB顯色，蘇木精輕度復染，脫水透明，封片。鏡下觀察并攝片。

1.3.6 real time RT-PCR檢測mTOR、Beclin-1及LC3 mRNA表達 各組各時間點取4只大鼠，致死后迅速取雙側海馬區(qū)組織，稱量0.6 g，加入1 ml RNAiso Plus溶液后勻漿，室溫靜置5 min后12 000 r/min 4℃離心5 min，取上清液移至新的1.5 ml離心管內，加入1/5 RNAiso Plus溶液體積的氯仿，震蕩混勻后室溫靜置5 min，12 000 r/min 4℃離心15 min，將上清液轉移至新離心管中，加入0.5～1.0倍RNAiso Plus溶液體積的異丙醇，室溫靜置10 min，12 000 r/min 4℃離心10 min，棄掉上清液，用與RNAiso Plus溶液等量的75%乙醇清晰沉淀，7 500 r/min 4℃離心5 min，棄上清保留沉淀，干燥（不可加熱），溶解于30 μl DEPC處理水中，測量OD260/280值，根據(jù)OD260計算RNA濃度，置入-80℃冰箱冷凍保存。

1.3.7 檢測步驟 m-TOR引物：正向5'-GGTGGACG AGCTCTTTGTCA-3'，反向5'-AGGAGCCCTAACACT CGGAT-3'；Beclin-1 引物：正向 5'-CTCTCGTCAAGGC GTCACTTC-3'，反向 5'-CCTTAGACCCCTCCATTCCTC A-3；LC3引物：正向5'-ACCCTCTACGATGCTGGTG A-3'， 反 向 5'-GCTGTCCTCAATGTCCTTCTG-3'。 進 行real time One Step RT-PCR反應：反應條件為95℃預變性10 min后，95℃ 5 s，60℃ 31 s進行30個循環(huán)，72℃ 延伸10 min。將所擴增的PCR產物進行熔解曲線分析。用Gen Amp 5700 SDS Software分析結果及PCR擴增產物生成曲線。以內參GAPDH mRNA CT值標化mTOR、Becline-1和LC3 mRNA的Ct值，得到相對Ct值，具體采用2-△△Ct法（△Ct=目的基因平均Ct值‐管家基因平均Ct值，△△Ct=實驗組△Ct‐對照組△Ct，相對表達量=2-△△Ct）進行計算。

1.4 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 組織病理學檢測結果

采用單因素方差分析，結果顯示，各組大鼠海馬區(qū)存活神經細胞數(shù)量比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與Sham組比較，SAH組術后各時間存活神經細胞數(shù)降低（P＜0.05）；與SAH組比較，雷帕霉素組、低和高劑量BQ-123組術后各時間點存活神經細胞數(shù)增加（P＜0.05）；高劑量BQ-123組術后各時間點存活神經細胞數(shù)量高于低劑量BQ-123組（P＜0.05）（見表1）。Sham組，海馬區(qū)神經細胞排列整齊、細胞形態(tài)結構正常，神經元胞體較大，胞核大而圓，核仁清晰；SAH組，海馬區(qū)可見神經細胞變性水腫，細胞輪廓模糊，亦可見死亡神經細胞，表現(xiàn)為細胞出現(xiàn)核溶解、核碎裂或核消失結構不清；雷帕霉素組神經元結構損傷減輕，大部分細胞排列整齊、細胞結構完整；低和高劑量BQ-123組各時間點神經細胞形態(tài)結構減輕，視野中結構完整神經細胞增多，在高劑量BQ-123組變化尤為明顯（見圖1）。

2.2 神經功能檢測結果

2.2.1 穿梭實驗結果 采用單因素方差分析，結果顯示各組大鼠不同時間AARR和PAL比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與Sham組比較，SAH組大鼠對刺激反應遲鈍，動物的AARR減少、PAL延長（P＜0.05）；與SAH組比較，雷帕霉素組、低和高劑量BQ-123組大鼠對刺激反應靈敏，動物的AARR增多、PAL縮短（P＜0.05），上述變化在高劑量BQ-123組最為明顯。見表2、3。

表1 各組大鼠不同時間海馬區(qū)存活神經細胞數(shù)量比較 （個/高倍視野，±s）

表1 各組大鼠不同時間海馬區(qū)存活神經細胞數(shù)量比較 （個/高倍視野，±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 188.65±20.90 189.8±19.85 190.10±20.05 189.80±19.90 SAH 組 120.65±16.501） 93.00±12.651） 72.60±10.801） 80.75±9.801）雷帕霉素組 140.56±15.302） 122.8±14.252） 98.36±15.202） 110.72±10.552）低劑量BQ-123組 132.45±18.452） 110.80±16.452） 84.25±12.602） 92.20±10.252）高劑量 BQ-123 組 152.80±19.70 2）3） 130.75±17.50 2）3） 136.90±18.752）3） 134.80±16.80 2）3）F值 204.797 225.012 240.014 133.630 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 各組大鼠24 h海馬CA1區(qū)神經細胞形態(tài) （HE染色×400）

表2 各組大鼠不同時間AARR比較 （%，±s）

表2 各組大鼠不同時間AARR比較 （%，±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 73.67±1.63 74.17±2.14 75.67±1.86 76.83±1.72 SAH 組 40.33±1.631） 48.17±2.321） 53.00±1.551） 59.17±2.041）雷帕霉素組 44.05±1.342） 51.95±1.962） 56.45±1.682） 64.38±2.042）低劑量BQ-123組 43.78±1.292） 52.53±1.832） 55.13±1.522） 64.27±2.162）高劑量 BQ-123組 45.83±1.722）3） 55.12±1.472）3） 60.17±2.142）3） 65.67±2.252）3）F值 122.422 152.477 92.428 95.288 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2.2 抓力實驗結果 采用單因素方差分析，結果顯示各組大鼠不同時間的抓力實驗拉力值比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與Sham組比較，SAH組各時間抓力測定分值顯著降低，其中6 h拉力值最低（P＜0.05）；與SAH組比較，雷帕霉素組、低和高劑量BQ-123組大鼠各時間點分值均有所升高（P＜0.05）；上述變化在高劑量BQ-123組最為明顯。見表4。

表3 各組大鼠不同時間PAL比較 （s，±s）

表3 各組大鼠不同時間PAL比較 （s，±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 16.33±1.21 16.67±1.03 16.67±1.21 17.33±0.82 SAH組 50.83±1.471） 40.17±1.601） 34.17±1.721） 28.33±1.501）雷帕霉素組 47.56±1.672） 36.85±1.352） 30.23±1.662） 23.96±1.522）低劑量BQ-123組 48.12±1.552） 37.50±1.522） 29.83±1.602） 24.83±1.382）高劑量 BQ-123組 46.00±1.412）3） 35.83±1.172）3） 27.67±1.372）3） 20.83±1.472）3）F值 44.492 83.102 105.428 97.955 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.3 各組大鼠mTOR、Beclin-1、LC3-II陽性表達比較

mTOR、Beclin-1、LC3-Ⅱ陽性表達主要位于細胞核，陽性細胞的胞核可見細小的棕黃色顆粒。Sham組可見少量mTOR、Beclin-1、LC3-Ⅱ陽性細胞，染色棕黃。與Sham組比較，SAH組各時間的磷酸化mTOR、Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫陽性反應增強；與SAH組比較，雷帕霉素組mTOR免疫陽性反應降低，Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫陽性反應增高；與SAH組比較，BQ-123干預組mTOR免疫陽性反應降低，Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫陽性反應進一步增強。見圖2。

表4 各組大鼠不同時間的抓力實驗拉力值比較 （±s）

表4 各組大鼠不同時間的抓力實驗拉力值比較 （±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 2 000.53±0.26 2 000.40±0.21 2 000.43±0.29 2 000.47±0.22 SAH 組 776.93±18.311） 1 110.17±16.301） 1 333.57±11.201） 1 435.48±15.531）雷帕霉素組 905.30±16.262） 1 253.36±18.252） 1 495.62±12.652） 1 598.20±12.452）低劑量BQ-123組 916.07±15.192） 1 224.02±20.182） 1 421.47±11.502） 1 511.02±36.102）高劑量 BQ-123組 1 077.08±30.842）3） 1 439.02±13.412）3） 1 612.43±13.652）3） 1 717.95±13.162）3）F值 267.764 588.619 823.885 224.161 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.4 各組大鼠mTOR、Beclin-1、LC3 mRNA表達比較

由表5～7可見，采用單因素方差分析，結果顯示各組大鼠海馬區(qū)mTOR、Beclin-1及LC3 mRNA表達水平比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；與Sham組比較，SAH組各時間mTOR、Beclin-1及LC3 mRNA表達水平增高，其中mTOR mRNA 24 h達高峰，持續(xù)至72 h仍有較高水平表達，而Beclin-1、LC3 mRNA表達水平于24 h達高峰后，72 h迅速下降，但仍高于Sham組（P＜0.05）；與SAH組比較，雷帕霉素組各時間點mTOR mRNA表達降低，Beclin-1和LC3 mRNA表達水平增高（P＜0.05）；與SAH組比較，BQ-123干預組各時間mTOR mRNA表達水平降低、Beclin-1和LC3 mRNA表達水平增高（P＜0.05），且Beclin-1和LC3 mRNA高表達持續(xù)至72 h。

圖2 各組大鼠24 h海馬CA1區(qū)mTOR、Beclin-1和LC3-Ⅱ表達 （免疫組織化學法×400）

表5 各組大鼠海馬區(qū)mTOR的mRNA相對表達量比較 （±s）

表5 各組大鼠海馬區(qū)mTOR的mRNA相對表達量比較 （±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 SAH 組 1.847±0.0041） 2.375±0.0061） 2.156±0.0041） 1.536±0.0041）雷帕霉素組 1.232±0.0022） 1.426±0.0032） 1.319±0.0022） 1.117±0.0022）BQ-123低劑量組 1.698±0.0042） 1.924±0.0052） 1.628±0.0032） 1.310±0.0032）BQ-123 高劑量組 1.446±0.0032）3） 1.430±0.0042）3） 1.235±0.0022）3） 1.124±0.0022）3）F值 41.840 44.502 38.551 44.842 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

表6 各組大鼠海馬區(qū)Beclin-1的mRNA相對表達量比較 （±s）

表6 各組大鼠海馬區(qū)Beclin-1的mRNA相對表達量比較 （±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 SAH 組 1.063±0.0021） 1.160±0.0021） 1.024±0.0021） 1.024±0.0021）雷帕霉素組 1.411±0.0022） 1.526±0.0022） 1.519±0.0012） 1.207±0.0022）BQ-123低劑量組 1.124±0.0042） 1.362±0.0062） 1.356±0.0042） 1.124±0.0032）BQ-123 高劑量組 1.447±0.0022）3） 1.671±0.0052）3） 1.706±0.0062）3） 1.286±0.0042）3）F值 121.642 125.643 107.433 47.048 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

表7 各組大鼠海馬區(qū)LC3 mRNA相對表達量比較 （±s）

表7 各組大鼠海馬區(qū)LC3 mRNA相對表達量比較 （±s）

注：1）與Sham組比較，P ＜0.05；2）與SAH組比較，P ＜0.05；3）與低劑量BQ-123組比較，P ＜0.05

組別 6 h 24 h 72 h 144 h Sham 組 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 1.000±0.000 SAH 組 1.329±0.0041） 1.692±0.0101） 1.146±0.0121） 1.018±0.0041）雷帕霉素組 1.655±0.0082） 2.428±0.0092） 2.173±0.0382） 1.344±0.0032）BQ-123低劑量組 1.444±0.0042） 1.892±0.0102） 1.728±0.0122） 1.186±0.0042）BQ-123 高劑量組 1.737±0.0102）3） 2.319±0.0122）3） 2.296±0.0152）3） 1.452±0.0132）3）F值 67.342 132.586 72.740 38.389 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

本實驗中組織病理學和動物行為學結果顯示，BQ-123對SAH大鼠有較好的神經保護作用，與國外學者的研究結果基本一致[8-9]。BQ-123是特異性內皮素受體ETA阻斷劑，可以直接阻斷ETA活性而對ETB受體幾乎無作用，具有高特異性、高親和力和水溶的特點。藥理學研究顯示BQ-123可抑制血管的痙攣，改善腦組織灌注壓，保證腦組織的血供，使細胞的缺血缺氧得到相應的改善，緩解腦組織的缺血缺氧，神經細胞得到保護[10]。

目前，自噬已經成為醫(yī)學研究領域的一個新熱點。研究表明[4]，在帕金森病中，自噬功能的紊亂導致蛋白質出現(xiàn)變構或錯誤折疊與發(fā)病密切相關，提示自噬在神經系統(tǒng)疾病中的調節(jié)作用。最近有研究結果提示[11-12]，在缺血性腦卒中及腦出血動物模型中，自噬被不同程度地激活。也有文獻報道自噬的相關通路在SAH后被激活，石曉勇等[13]通過復制蛛網膜下腔出血模型，應用自噬激動劑RAP干預自噬后，發(fā)現(xiàn)自噬相關蛋白LC3和Beclin-1的表達增高，自噬增強，同時大鼠神經功能評分好轉，腦水腫指數(shù)下降，血腦屏障通透性好轉。Beclin-1和LC3被認為是自噬過程的特征調控基因和蛋白，其表達水平是檢測自噬高低水平的重要指標。本研究中BQ-123組Beclin-1 mRNA、LC3 mRNA不僅表達水平較SAH組增加，且兩者高表達狀態(tài)持續(xù)至72 h，且上述指標呈BQ-123劑量依賴式變化，說明BQ-123可以提高SAH后大鼠海馬區(qū)Beclin-1、LC3的表達水平，即增強神經細胞自噬激活的程度。結合上述形態(tài)學和行為學變化特征，筆者認為在BQ-123的干預下，腦供血得到改善，細胞低氧、氧自由基及ATP耗竭等各種因素緩解[14]，使自噬過程或程度增加，丟失的神經細胞明顯減少，神經功能恢復。

研究顯示[15]，mTOR信號通路對于抑制細胞自噬的發(fā)生、調節(jié)細胞的生長代謝及增殖有重要作用。有學者[16]應用小鼠腦中動脈阻塞缺血性腦卒中模型，發(fā)現(xiàn)通過調制神經元內Akt-mTOR信號通路可使其介導的自噬水平提高，減輕小鼠缺血性卒中腦缺血損傷，提高缺血神經元存活率。在神經元氧糖剝奪（OGD）模型中，應用細胞自噬抑制劑3-MA抑制mTOR信號后，能夠誘導醇母基因（SIR3）表達增加，減少OGD誘導的乳酸脫氫酶（LDH）的釋放和神經元凋亡，并且通過調節(jié)AMPK-mTOR通路減輕過度自噬造成的缺血后神經元損傷[17]。本研究發(fā)現(xiàn)應用mTOR抑制劑雷帕霉素后，發(fā)現(xiàn)Beclin-1和LC3表達增多，存活神經細胞數(shù)量增多，說明SAH后海馬區(qū)神經細胞自噬與mTOR信號活化有關。筆者發(fā)現(xiàn)與SAH組比較，BQ-123組mTOR mRNA表達降低，而Beclin-1 mRNA、LC3 mRNA表達增高，3者變化均與BQ-123劑量密切相關，說明BQ-123通過抑制mTOR活性，進而提高SAH后自噬程度，發(fā)揮神經保護作用。目前關于BQ-123調節(jié)mTOR信號活性的原因尚未明確。但研究顯示BQ-123可增加組織中內源性一氧化氮含量，減輕鈣離子超載、維持微環(huán)境穩(wěn)定，具有對抗氧化應激及抗炎等作用[18]，該因素的變化可使mTOR上游的PI3K/Akt途徑活化，可能是BQ-123提高mTOR信號活性的原因之一。

綜上所述，BQ-123可減輕SAH后腦組織神經細胞的丟失，促進神經功能的恢復；同時BQ-123可部分抑制SAH后mTOR活性，提高神經細胞自噬程度。這為臨床救治SAH提供了新思路，亦為BQ-123在臨床的應用提供理論基礎，具有重要的指導意義。

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