c-met、VEGF-C及LMVD在食管鱗癌中的表達(dá)及意義

趙 楊，劉莎莎，徐樹(shù)雷，趙 醒，申興斌△

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬肛腸醫(yī)院）

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的兩個(gè)基本生物學(xué)特性，也是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和患者死亡的重要原因之一。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（c-met）是由原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物，是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）的受體，當(dāng)c-met過(guò)表達(dá)時(shí)，可通過(guò)與HGF結(jié)合后激活信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)腫瘤的發(fā)生，也可直接調(diào)控腫瘤的發(fā)生和浸潤(rùn)[1-2]。另外，在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，微淋巴管系統(tǒng)充當(dāng)著重要角色，腫瘤組織在有淋巴管長(zhǎng)入后，才能迅速生長(zhǎng)，并進(jìn)一步向周?chē)?rùn)和向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子C（VEGF-C）是一種能促進(jìn)淋巴管生成和成熟的因子，并能通過(guò)促進(jìn)腫瘤周?chē)馨凸艿脑錾龠M(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[3]。微淋巴管密度（LMVD）作為反映新生淋巴管水平的指標(biāo)，能提示腫瘤微淋巴管生成的活性或強(qiáng)度，其在腫瘤形成及轉(zhuǎn)移中的作用近年來(lái)備受關(guān)注。為進(jìn)一步探討食管癌發(fā)生和侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制，本研究對(duì)比分析了食管鱗癌及食管正常黏膜組織中c-met、VEGF-C、LMVD的表達(dá)情況及與食管鱗癌臨床病理特征之間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 我院胸外科手術(shù)后經(jīng)病理檢查證實(shí)的食管鱗癌組織標(biāo)本60例，全部患者術(shù)前均未接受放化療。60例患者年齡39～80歲，平均58歲；浸潤(rùn)未穿透肌層21例，浸潤(rùn)超過(guò)肌層39例；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期33例，Ⅲ+Ⅳ期27例。收集上述食管鱗癌術(shù)后標(biāo)本距癌組織＞5cm處的黏膜組織，并經(jīng)病理檢查證實(shí)為正常黏膜標(biāo)本25例，作為正常對(duì)照組。所取組織標(biāo)本常規(guī)石蠟包埋，用于免疫組化染色。

1.2 檢測(cè)c-met、VEGF-C及D2-40的表達(dá) 采用MaxVision免疫組化法檢測(cè)c-met、VEGF-C及D2-40的表達(dá)情況。c-met兔抗人多克隆抗體、VEGF-C兔抗人多克隆抗體、D2-40鼠抗人單克隆抗體，購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；MaxVision試劑盒，購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)公司。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 c-met、VEGF-C免疫組化染色結(jié)果判定：c-met、VEGF-C免疫陽(yáng)性產(chǎn)物主要表達(dá)在細(xì)胞漿，以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性反應(yīng)。在染色均勻的腫瘤區(qū)選取5個(gè)高倍鏡視野(×400)：①按陽(yáng)性細(xì)胞百分率評(píng)分，＜25%為1分、25%～50%為2分、＞50%為3分；②按染色強(qiáng)度評(píng)分，不著色為0分、淺棕黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。以①+②評(píng)分相加判定最終結(jié)果：陰性(-)，0分；弱陽(yáng)性(+)，1～2分；中度陽(yáng)性(++)，3～4分；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，5～6分。

1.3.2 LMVD的判定：用D2-40標(biāo)記微淋巴管，以陽(yáng)性著色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇為一個(gè)微淋巴管，不一定有完整的管腔結(jié)構(gòu)。在低倍鏡下（×40）選取陽(yáng)性染色微淋巴管最豐富的區(qū)域，即“熱點(diǎn)”，然后在高倍鏡下（×200）觀(guān)察每個(gè)熱點(diǎn)中的5個(gè)視野，計(jì)算視野中的微淋巴管數(shù)，最后計(jì)算2個(gè)熱點(diǎn)的平均淋巴管數(shù)目。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 通過(guò)SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件完成統(tǒng)計(jì)處理，LMVD的比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，c-met、VEGF-C表達(dá)的比較采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 c-met、VEGF-C的表達(dá)情況 食管鱗癌組織c-met、VEGF-C的表達(dá)均明顯高于正常食管黏膜，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1：

表1 c-met、VEGF-C在食管鱗癌和正常食管黏膜中的表達(dá)情況

2.2 c-met、VEGF-C表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系食管鱗癌c-met、VEGF-C表達(dá)與年齡和浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)（P＜0.05）：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌組織c-met、VEGF-C的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期食管鱗癌組織c-met、VEGF-C的表達(dá)明顯高于Ⅰ+Ⅱ期。見(jiàn)表2：

表2 c-met、VEGF-C表達(dá)與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系

2.3 食管鱗癌、正常食管黏膜的LMVD值及LMVD值與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 食管鱗癌組織的LMVD值為（9.37±2.08），明顯高于正常食管黏膜的LMVD值（5.52±1.76，P＜0.05）。食管鱗癌的LMVD值與年齡無(wú)關(guān)（P＞0.05）；與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)（P＜0.05）：浸潤(rùn)深度超過(guò)肌層的食管鱗癌組織LMVD值明顯高于未超過(guò)肌層，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌組織LMVD值明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的食管鱗癌組織LMVD值明顯高于Ⅰ+Ⅱ期。見(jiàn)表3：

表3 LMVD值與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系（± s ）

表3 LMVD值與食管鱗癌臨床病理特征的關(guān)系（± s ）

項(xiàng)目 例數(shù) LMVD值 P年齡（歲） ≤56 33 9.43±2.17 ＞0.05＞ 56 27 9.18±1.88浸潤(rùn)深度 未超過(guò)肌層 21 7.55±2.09 ＜0.05超過(guò)肌層 39 9.76±1.92淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú) 27 7.67±1.98 ＜0.05有33 10.89±2.11 TNM分期 Ⅰ+Ⅱ 33 7.82±1.73 ＜0.05Ⅲ+Ⅳ 27 10.75±2.19

3 討論

c-met是原癌基因編碼的蛋白產(chǎn)物，與HGF結(jié)合后可激活一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和侵襲。研究發(fā)現(xiàn)[4]，HGF/c-met通路能刺激上皮細(xì)胞的分化、增殖，最終導(dǎo)致腫瘤的的形成、侵襲和轉(zhuǎn)移；并且c-met在多種惡性腫瘤的發(fā)生和侵襲中起重要作用[5-7]。本研究顯示，c-met在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于正常食管黏膜，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，提示c-met在食管鱗癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移中可能具有重要作用。

VEGF-C是VEGF家族的成員，與受體結(jié)合后能促使血管及淋巴管上皮細(xì)胞的增生和遷移，并能改變淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，使之對(duì)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生趨化性，腫瘤細(xì)胞更容易從淋巴管侵入和播散[8]。因此，VEGF-C的表達(dá)升高可能會(huì)促進(jìn)腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移。本研究亦發(fā)現(xiàn)，VEGF-C在食管鱗癌組織中的表達(dá)明顯高于正常食管黏膜，且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，TNM分期Ⅲ+Ⅳ期明顯高于Ⅰ+Ⅱ期，提示VEGF-C可能在食管鱗癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。

腫瘤組織含有較豐富的淋巴管，主要分布在腫瘤的周邊區(qū)，腫瘤周邊區(qū)微淋巴管數(shù)量不斷增多，且淋巴管管壁缺乏緊密連接，缺少阻礙腫瘤細(xì)胞進(jìn)入新生淋巴管的有效屏障，因此給腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移創(chuàng)造了有利條件。本研究發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織的LMVD值明顯高于正常食管黏膜，且與食管鱗癌浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期有關(guān)，提示LMVD值的增高可能與食管鱗癌的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

綜上所述，c-met、VEGF-C和微淋巴管形成可能在食管鱗癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用，通過(guò)對(duì)三者的深入研究，可能對(duì)食管鱗癌的治療和預(yù)防轉(zhuǎn)移提供新的方向。

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