2012—2016年郴州市無償獻(xiàn)血人群HIV抗體不確定結(jié)果的分析

曾永會(huì)，黎俊宏

近年來，艾滋病的檢測(cè)技術(shù)和檢測(cè)策略不斷改進(jìn)和更新，尤其是血站及血漿站已廣泛采用了第四代檢測(cè)試劑，同時(shí)檢測(cè)HIV抗體和p24抗原，其檢測(cè)敏感性大大提高，隨之而來的是HIV篩查假陽性率不斷上升。對(duì)于HIV抗體篩查（包括初篩和復(fù)檢）陽性的標(biāo)本，須進(jìn)行HIV確證實(shí)驗(yàn)方能進(jìn)行最后的艾滋病確診。本文旨在通過對(duì)不確定結(jié)果的帶型特點(diǎn)分析，并結(jié)合隨訪結(jié)果，探討獻(xiàn)血人群中HIV抗體不確定的血清學(xué)特點(diǎn)及不確定結(jié)果的診斷策略，便于及時(shí)準(zhǔn)確篩查出HIV陽性獻(xiàn)血者，確保用血安全。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 樣本為2012年1月1日—2016年12月31日間斷收到的郴州市中心血站HIV抗體篩查（包括初篩和復(fù)檢）陽性的233例標(biāo)本，接收后標(biāo)本在-20 ℃條件下保存，5個(gè)工作日內(nèi)完成確證檢測(cè)。

1.2 儀器與試劑 篩查實(shí)驗(yàn)主要儀器為酶標(biāo)儀伯樂680（美國(guó)BIO-RAD）；確證實(shí)驗(yàn)主要儀器為AutoBlot System20全自動(dòng)蛋白印跡儀（新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司）。篩查實(shí)驗(yàn)共用到3種試劑，分別為英科新創(chuàng)（廈門）科技有限公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法），北京萬泰生物藥業(yè)有限公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）和BIO-RAD公司的人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）。確證試劑為新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司的人類免疫缺陷病毒（HIV1+2型）抗體檢測(cè)試劑盒[免疫印跡法（western blotting,WB）]?！度珖?guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）》[1]要求篩查和確證試劑必須經(jīng)食品藥品監(jiān)督總局注冊(cè)、批準(zhǔn)，在有效期內(nèi)使用，本研究涉及到的試劑均符合此要求。

1.3 結(jié)果判定 篩查實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：英科新創(chuàng)試劑，臨界值（cut off,CO）=陰性對(duì)照平均值+0.10，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性；北京萬泰試劑，CO=陰性對(duì)照平均值+0.12，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性；BIO-RAD試劑檢驗(yàn)結(jié)果判定，CO=陰性對(duì)照平均值+0.20，樣本值＜CO為HIV抗體和HIV p24抗原陰性，樣本值≥CO為HIV抗體或HIV p24抗原陽性。確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定：檢測(cè)出2條 ENV（gp160/gp41和 gp120） 及 GAG（p17、p24、p55）或 POL（p31、p51、p66）結(jié)果判定為陽性。例如①gp160+gp120+任意一條GAG或POL；②gp41+gp120+任意一條GAG或POL，出現(xiàn)①或者②中的任意一種情況，結(jié)果即可判定為陽性。若所有的檢測(cè)結(jié)果只出現(xiàn)任何1條特異性條帶，為HIV不確定標(biāo)本。

1.4 隨訪 按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（2015年修訂版）》[1]的要求，對(duì)不確定結(jié)果的標(biāo)本結(jié)合流行病學(xué)資料，在4周后對(duì)該人員隨訪，再次進(jìn)行初篩、復(fù)檢和確證實(shí)驗(yàn)，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如帶型有進(jìn)展且達(dá)到陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，則報(bào)告陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用描述性統(tǒng)計(jì)方法描述相關(guān)的頻數(shù)和率。

2 結(jié) 果

2.1 確證結(jié)果 分析233例不同年份的初篩、復(fù)檢雙陽性并經(jīng)WB檢測(cè)確證的獻(xiàn)血者標(biāo)本（表1）。結(jié)果顯示，233例初篩、復(fù)檢雙陽性標(biāo)本并經(jīng)WB確證實(shí)驗(yàn)后共檢出HIV抗體陽性標(biāo)本43例（18.45%），陰性標(biāo)本107例（45.92%），不確定標(biāo)本83例（35.62%）。不確定標(biāo)本共出現(xiàn)9種帶型，排前3位的帶型分別為：p24 53例（63.86%）；p17 11例（13.25%）；p24和p17 10例（12.05%），見表2、圖1。對(duì)其中11例完成了隨訪，結(jié)果2例p24，1例p24和gp160以及1例p24和p66發(fā)生了陽轉(zhuǎn)，其余7例條帶無進(jìn)展。

表1 2012—2016年獻(xiàn)血者篩查陽性標(biāo)本經(jīng)WB確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果[例（%）]Table 1 The confirmed results of screening positive specimens in voluntary blood donors by WB confirmatory from 2012 to 2016 test [cases(%)]

表2 WB確證實(shí)驗(yàn)不確定標(biāo)本W(wǎng)B帶型[例（%）]Table 2 WB belt types of indeterminate specimens by WB confirmatory test [cases(%)]

圖1 不確定標(biāo)本W(wǎng)B帶型由上之下條帶依次為：p17；p24；p17和p24；p66；p24和gp160；gp160；p24和gp120；p24和gp41；p24和p66Figure 1 WB belt types of indeterminate specimens

2.2 性別分布 83例HIV抗體不確定標(biāo)本中，男54例，占65.06%；女29例，占34.94%。見表3。

2.3 年齡分布 將83例HIV抗體不確定標(biāo)本的年齡分為＜20、20～39、40～59歲組，其中20～39歲組出現(xiàn)HIV抗體不確定結(jié)果最多，40～59歲組次之，＜20歲組最少；20～39歲組和40～59歲組均以p24帶型最為常見，見表4。

表3 不確定標(biāo)本性別分布（例）Table 3 Gender distributions of indetermination specimens(cases)

表 4 WB帶型在不同年齡患者中的分布[例（%）]Table 4 The distributions of WB belt types in patients of different age groups[cases(%)]

3 討 論

我國(guó)實(shí)施無償獻(xiàn)血政策已近20年，隨著臨床用血需求越來越大，血液制品安全問題也成為大家關(guān)心的熱點(diǎn)話題。如何保證臨床用血需求，同時(shí)也保證用血安全，是整個(gè)社會(huì)急需解決的問題。隨著無償獻(xiàn)血政策的深入宣傳，獻(xiàn)血人群也在不斷的變化，出現(xiàn)了有人把無償獻(xiàn)血當(dāng)成了免費(fèi)體檢的情況，甚至有不少獻(xiàn)血者在有了高危性行為之后就去獻(xiàn)血，這給臨床安全用血留下了巨大的隱患[2-3]。目前，國(guó)內(nèi)血站大部分是采用第四代檢測(cè)試劑同時(shí)檢測(cè)抗原、抗體，大大提高了實(shí)驗(yàn)的敏感性。

本文分析了2012—2016年郴州市血站不同年份的獻(xiàn)血者篩查陽性并經(jīng)WB確證實(shí)驗(yàn)后結(jié)果不確定標(biāo)本，標(biāo)本均在收樣后5個(gè)工作日內(nèi)完成WB確證實(shí)驗(yàn)，排除了因凍存標(biāo)本隨著時(shí)間的增加抗體蛋白會(huì)降解的問題。確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，篩查陽性標(biāo)本確證陽性率較低，大多數(shù)為陰性，這與湖南省內(nèi)的情況相符[4]；而不確定數(shù)較高，有83例，不確定率達(dá)35.62%，高于國(guó)內(nèi)其他地區(qū)[5-6]，該結(jié)果可能與本市處于我國(guó)毒品交易的危險(xiǎn)三角區(qū)，為保證用血安全將本市血站HIV抗體篩查檢測(cè)敏感性的提高有關(guān)；HIV抗體不確定標(biāo)本以20～39歲年齡組為主，40～59歲年齡組次之，可能與該年齡組性活躍特征有關(guān)[7]。83例不確定標(biāo)本共出現(xiàn)了9種帶型，排前3位的帶型分別是：p24共53例，占63.86%；p17共11例，占13.25%；p17和p24共10例，占12.05%。對(duì)其中11例在4周后完成了隨訪（因隨訪無法強(qiáng)制進(jìn)行檢測(cè)，告之后有的獻(xiàn)血者不參加檢測(cè)，有的獻(xiàn)血者聯(lián)系方式不準(zhǔn)確，無法告之，造成隨訪率低），7例p24有2例隨訪陽性；1例p24和p66隨訪陽性；1例p24和gp160隨訪陽性；1例p17和1例p66隨訪陰性。隨訪結(jié)果顯示，p24帶型是HIV陽轉(zhuǎn)的危險(xiǎn)因素：p24出現(xiàn)組合帶型隨訪陽轉(zhuǎn)率較高，p24單一帶型則有陽轉(zhuǎn)的可能。

本市獻(xiàn)血人群HIV抗體不確定的原因可能為：血站未嚴(yán)格按照初篩檢測(cè)試劑說明書判斷結(jié)果，人為設(shè)計(jì)了實(shí)驗(yàn)灰區(qū)，導(dǎo)致初篩應(yīng)判為陰性的標(biāo)本判作陽性；血站為了用血安全，初篩多采用高敏感試劑，而高敏感試劑會(huì)增加假陽性結(jié)果的概率；獻(xiàn)血人群復(fù)雜，存在高危行為獻(xiàn)血者把獻(xiàn)血當(dāng)成免費(fèi)體檢的情況，如其處于艾滋病感染窗口期，實(shí)驗(yàn)室結(jié)果有可能為不確定。綜上所述，為及時(shí)準(zhǔn)確的檢測(cè)出HIV陽性獻(xiàn)血者，建議采取以下措施：嚴(yán)格按照初篩檢測(cè)試劑說明書判斷結(jié)果，確保初篩結(jié)果準(zhǔn)確可靠；有條件的血站開展核酸檢測(cè)，以核酸檢測(cè)結(jié)果為最終初篩結(jié)果；對(duì)獻(xiàn)血者做好宣傳，告之艾滋病感染者獻(xiàn)血對(duì)臨床用血的危害；對(duì)于HIV抗體不確定結(jié)果的獻(xiàn)血者，血站有義務(wù)在2～4周后對(duì)其進(jìn)行隨訪，盡早確診。

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