輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者銅鋅血清含量的臨床研究

張子川 王鴻雁 陳光 吳仲寅 方會清

[摘要] 目的 比較輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍患者與健康人體內(nèi)銅離子（Cu2+）和鋅離子（Zn2+）的血清含量，探討其與復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍的關(guān)系。 方法 選取2015年3月～2016年12月在解放軍白求恩國際和平醫(yī)院（以下簡稱“我院”）口腔科確診的97名輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（MiRAU）患者和同期來我院體檢的102名無MiRAU的健康人為研究對象。分別抽取潰瘍發(fā)病期的患者（A組）和健康人（B組）5 mL空腹靜脈血，再采用色度法檢測受試者體內(nèi)Cu2+和Zn2+的血清濃度。 結(jié)果 A、B兩組受試者體內(nèi)Cu2+的血清濃度分別為（16.77±3.89）μmol/L和（17.62±3.05）μmol/L，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）；A組受試者血清中的Zn2+濃度[（14.39±1.86）μmol/L]顯著低于B組[（16.18±2.46）μmol/L]（P < 0.05）。 結(jié)論 鋅離子血清含量的降低可能與復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍存在著某種關(guān)聯(lián)性。

[關(guān)鍵詞] 復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍；銅；鋅；色度法

[中圖分類號] R181 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）02（c）-0114-04

A clinical study of the serum content of copper iron and zinc iron in patients with minor recurrent aphthous ulcer

ZHANG Zichuan1 WANG Hongyan2 CHEN Guang1 WU Zhongyin1 FANG Huiqing1

1.Department of Stomatology， Bethune International Peace Hospital， Hebei Province， Shijiazhuang 050082， China； 2. Hebei Medical Information Research Institute， Hebei Province， Shijiazhuang 050000， China

[Abstract] Objective To compare the serum content of iron and Copper Zinc in patients with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） and healthy individuals， and then to analyze that whether there is a possible relationship between them and recurrent aphthous ulcer. Methods Ninty-seven patients with minor recurrent aphthous ulcer （MiRAU） confirmed in Department of Stomatology of Bethune International Peace Hospital （hereinafter referred to as "our hospital"） from March 2015 to December 2016 and 102 healthy persons without MiRAU in our hospital were enrolled. The patients with MiRAU （group A） and healthy persons （group B） were extracted 5 mL fasting venous blood respectively， and then the chromaticity method was used to detect the serum concentration of Copper and Zinc irons in subjects. Results The serum content of Copper iron in those subjects of group A and group B were （16.77±3.89） μmol/L and （17.62±3.05） μmol/L， and there was no significant difference between the two groups （P > 0.05）. The serum content of Zinc iron in those subjects of group A [（14.39±1.86）μmol/L] was significantly lower than that of group B [（16.18±2.46） μmol/L]（P < 0.05）. Conclusion The decrease of serum content of Zinc iron may be associated with recurrent aphthous ulcer.

[Key words] Recurrent aphthous ulcer； Copper； Zinc； Colorimetric measurement method

復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（recurrent aphthous ulcer，RAU）是一種常見的病因不明的口腔黏膜炎癥性疾病，以周期性發(fā)作和燒灼性疼痛為其典型的臨床特點，發(fā)病率高達20%[1-3]。最近有研究報道[4-7]，RAU患者血清超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的含量顯著低于無RAU的健康人。SOD是一種能夠有效清除超氧陰離子自由基的抗氧化酶，常作為機體抗氧化損傷能力的代表，人體內(nèi)主要含有銅鋅超氧化物歧化酶（CuZnSOD）和錳超氧化物歧化酶（MnSOD）[8]。已有研究證明，癌癥、糖尿病、帕金森等疾病不僅與機體的氧化應(yīng)激狀態(tài)有關(guān)，也與銅、鋅等微量元素的血清含量相關(guān)[9-12]。因此，本研究通過比較健康人群和RAU患者血清銅離子和鋅離子濃度，探討其與RAU的發(fā)病機制是否存在著相關(guān)性，為預(yù)防和治療RAU提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2015年3月～2016年12月在解放軍白求恩國際和平醫(yī)院（以下簡稱“我院”）口腔科確診為輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（minor recurrent aphthous ulcer，MiRAU）的患者97例，平均患病時間（5.62±2.29）年，平均發(fā)病頻率（6.74±2.62）次/年，所有患者均由同一名口腔黏膜病專業(yè)的主任醫(yī)師確診，以同期在我院體檢的健康人102名為對照組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有受試者的血常規(guī)、血凝、血沉、血糖、血脂、肝腎功能、促甲狀腺激素、電解質(zhì)、C反應(yīng)蛋白、球蛋白、白蛋白、葉酸、維生素以及鈉、鉀、鈣、鐵、磷等檢測結(jié)果均在正常范圍內(nèi)；②MiRAU患者無明顯原因的口腔潰瘍年發(fā)病次數(shù)為3～12次；③無糖尿病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、冠心病、白塞病、周期性中性粒細胞減少癥、消化系統(tǒng)疾病、免疫系統(tǒng)疾病、心血管系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病等；④女性受試者均未在月經(jīng)期、孕期和哺乳期；⑤無吸毒、吸煙、酗酒等不良嗜好；⑥無白斑、紅斑、單純皰疹病毒感染、皰疹性咽峽炎、扁平苔癬、紅斑狼瘡、天皰瘡等口腔黏膜疾病；⑦牙齒無銳角銳邊，無活動性牙齦炎、牙周炎；⑧3個月內(nèi)未服用維生素類、甾類化合物、免疫調(diào)節(jié)類等藥物。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會通過，患者知情同意并簽署知情同意書。

1.2 實驗方法

所有受試者禁食10～12 h后，抽取清晨空腹靜脈血5 mL，置于無任何抗凝血劑的真空管中，在4℃環(huán)境下以3000 r/min離心5 min，離心半徑為15 cm，取上層血清液置于-80℃冰箱中保存。以MiRAU患者發(fā)病期時的空腹靜脈血為A組，健康人群的空腹靜脈血為B組。采用分光光度計（Alpha-1106，上海譜元儀器有限公司），銅離子檢測試劑盒（Copper assay kit，絡(luò)合比色法，南京建成生物工程研究所），鋅離子檢測試劑盒（Zinc assay kit，絡(luò)合比色法，南京建成生物工程研究所）分別測定受試者血清中的Cu、Zn離子濃度。試劑盒的檢測范圍分別為[Cu2+（0～78.7）μmol/L]和[Zn2+（0～61.2）μmol/L]；準(zhǔn)確度相對偏差≤15.0%；精密度批內(nèi)變異系數(shù)≤4.0%，批間相對極差≤6.0%。

Cu2+檢驗原理：在pH = 5.0的緩沖液中，從銅藍蛋白中解離出的Cu2+可與絡(luò)合劑2-[（3，5-二溴-2-吡啶）-偶氮]-5-氨基酚（3，5-二溴-PAESA）發(fā)生反應(yīng)，形成紫紅色絡(luò)合物。該絡(luò)合物在一定范圍內(nèi)的吸光率與Cu2+濃度成正比[13]。

Zn2+檢驗原理：室溫環(huán)境下，Zn2+可與試劑中的2-（5-溴-2-吡啶偶氮）-5-[N-正丙基-N-（3-磺酸丙基）氨基]苯酚（5-Br-PAPS）形成有色復(fù)合物，其在一定范圍內(nèi)吸光率與Zn2+濃度成正比[14]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 19.0對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料以百分率表示，采用χ2檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

本研究中所有受試者的一般臨床資料見表1。統(tǒng)計分析結(jié)果顯示，兩組受試者的性別及年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。

2.2 兩組Ca2+濃度比較

A組受試者血清中的Cu2+濃度為（16.77±3.89）μmol/L，與B組受試者血清Cu2+濃度（17.62±3.05）μmol/L相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。A組受試者血清中的Zn2+濃度為（14.39±1.86）μmol/L，顯著低于B組受試者的血清Zn2+濃度[（16.18±2.46）μmol/L]（P < 0.05）。A、B兩組受試者的血清Cu/Zn比值分別為（1.15±0.15）和（1.09±0.04），組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）。

3 討論

RAU是一種常見的炎癥性口腔黏膜疾病，又名復(fù)發(fā)性阿弗他口炎（recurrent aphthous stomatitis，RAS），好發(fā)于唇、頰、舌、口底、軟腭等部位[15-16]。臨床上依據(jù)潰瘍的大小、深淺及數(shù)目不同分為輕型、重型和皰疹樣潰瘍，其中又以輕型復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍（Minor recurrent aphthous ulcer，MiRAU）最為常見，約占此病的80%[17]。本研究中的97例患者均由我院口腔科具有多年臨床經(jīng)驗的口腔黏膜病專家依據(jù)其臨床表現(xiàn)及既往病史，最終確診為MiRAU。

以往的研究認為局部創(chuàng)傷、吸煙、營養(yǎng)缺乏、心理應(yīng)激、細菌或病毒感染、過敏因素、精神因素、遺傳因素、免疫因素等均可誘發(fā)RAU，但是至今尚無明確結(jié)論[18]。近些年的研究發(fā)現(xiàn)，RAU患者機體的氧化應(yīng)激狀態(tài)與無RAU的健康人之間存在差異，因此他們認為氧化應(yīng)激可能與RAU的發(fā)病機制間存在某種關(guān)聯(lián)性[18-20]。氧化應(yīng)激（oxidative stress，OS）是指當(dāng)機體受到多種因素刺激后，體內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）的含量增多，超過正常的生理范圍，從而破壞了氧化劑與抗氧化劑間正常的動態(tài)平衡，導(dǎo)致細胞和細胞外生物大分子蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、核酸等的結(jié)構(gòu)被修改，繼而其功能受損，最終致使機體進入一種嚴(yán)重的、易受損的應(yīng)激狀態(tài)[20]。為了預(yù)防過量自由基導(dǎo)致的氧化損傷，機體存在兩類抗氧化防御系統(tǒng)，一類是酶類抗氧化系統(tǒng)，包括超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSHPx）等；另一類是非酶類抗氧化系統(tǒng)，包括谷胱甘肽、褪黑激素、尿酸及維生素A、B12、C、E等[6-7]。

近些年人們對RAU患者體內(nèi)的抗氧化物酶含量進行了相關(guān)研究，但是結(jié)論卻不盡相同。Cimen等[21]研究發(fā)現(xiàn)RAU患者紅細胞中CAT和GSHPx含量顯著低于健康人，但兩組的SOD含量無統(tǒng)計學(xué)差異，這與Momen-Beitollahi[5]的研究恰恰相反。Karincaoglu等[4]認為RAU患者血漿中的SOD和CAT含量顯著降低，而GSHPx血漿含量卻顯著增高。Gupta等[6]的研究結(jié)果顯示RAU患者SOD和GSHPx的血清含量顯著低于對照組，而血清中CAT的含量卻顯著增高。本研究結(jié)果顯示，RAU患者體內(nèi)SOD、CAT和GSHPx的血清含量均顯著低于對照組[7]。SOD是人體內(nèi)重要的抗氧化物酶，常作為機體抗氧化損傷能力的代表，能夠有效清除體內(nèi)超氧陰離子自由基（O2-）。由于SOD屬于金屬蛋白酶，人們根據(jù)其結(jié)構(gòu)中所含的金屬輔基不同又將其分為三種，分別是銅鋅超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、錳超氧化物歧化酶（Mn-SOD）和鐵超氧化物歧化酶（Fe-SOD），其中存在于人體內(nèi)的只有CuZn-SOD和Mn-SOD。銅和鋅作為CuZn-SOD的輔助因子參與機體的抗氧化過程，成為機體的抗氧化微量元素。其中，銅構(gòu)成SOD的活性中心，而鋅對SOD空間構(gòu)象的維持具有重要作用[8]。目前，關(guān)于銅、鋅、硒、錳等抗氧化微量元素與RAU發(fā)病機制間相關(guān)性的研究報道較少。因此，本研究通過比較健康人群和RAU患者血清Cu2+和Zn2+濃度，探討其與RAU的發(fā)病機制間是否存在著關(guān)聯(lián)性。

鋅是人體必需的微量元素，參與體內(nèi)多種生理活動。不僅在細胞的DNA復(fù)制、RNA轉(zhuǎn)錄、增殖、分化等活動中起重要作用，還能夠調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)和核酸的代謝；對于機體免疫功能也具有一定的調(diào)節(jié)作用；作為多種酶和蛋白質(zhì)的輔助因子，鋅還具有抗氧化、抗炎的作用。鋅含量減少會導(dǎo)致體內(nèi)SOD和GSHPx活性降低，脂質(zhì)過氧化加強，進而誘發(fā)機體產(chǎn)生氧化應(yīng)激，激活單核巨噬細胞，活化NF-κB炎癥因子，引起炎癥因子如IL-1β、IL-6和TNF-α生成增加[22-23]。本研究中，MiRAU患者血清Zn2+濃度顯著低于對照組，可能是由于Zn2+參與中和MiRAU患者體內(nèi)過量的氧自由基而減少，這與以往的研究結(jié)論一致。

銅在人體內(nèi)參與多種金屬蛋白質(zhì)和酶的構(gòu)成，如銅藍蛋白、細胞色素氧化酶、酪氨酸酶、賴氨酸氧化酶、多巴胺-β-羥化酶、單胺氧化酶、超氧化物歧化酶等[24]。正常范圍內(nèi)的血銅濃度對機體無害，但過量的Cu2+會誘發(fā)氧化應(yīng)激，繼而導(dǎo)致慢性炎癥。而人體組織在遭受炎性破壞過程中，又會有大量的Cu2+釋放入血，從而加重了機體的氧化應(yīng)激反應(yīng)，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化，MDA血清含量增加[25]。已有研究表明，血銅升高可能與糖尿病、心血管疾病、血液病、惡性腫瘤、阻塞性黃疸、肝硬化、哮喘、肺炎、肺氣腫、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、子宮肌瘤等有關(guān)[24]。本研究中兩組受試者血清Cu2+濃度無顯著差異，分析其原因如下：Cu、ZnSOD因需清除體內(nèi)過量的氧自由基而消耗，Cu2+被釋放入血，血銅濃度升高。同時，銅、鋅的血清濃度保持動態(tài)平衡，血清Cu/Zn比值正常范圍為0.9～1.2。由于機體本身具有自我調(diào)節(jié)機制，為了保持恒定的血清Cu/Zn比值，當(dāng)血清Zn2+濃度降低時，組織對Zn2+的利用率也會隨之降低，反而促進了組織對Cu2+的利用，降低血銅濃度。

本研究采用絡(luò)合比色法對發(fā)病期的MiRAU患者和健康人空腹靜脈血中的Cu2+和Zn2+含量進行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MiRAU患者血清Zn2+濃度顯著低于健康人群，而兩組受試者的血清Cu2+濃度無統(tǒng)計學(xué)差異。由于采用的是橫斷面研究，故而無法證明Cu、Zn離子血清含量的變化是否與RAU發(fā)病機制間存在著因果關(guān)系。但本研究結(jié)果提示適當(dāng)補充富含微量元素的食物可能會減少氧化應(yīng)激損傷的范圍及可能出現(xiàn)的并發(fā)癥。

[參考文獻]

[1] Cui RZ，Bruce AJ，Rogers RS 3rd. Recurrent aphthous stom？鄄atitis [J]. Clin Dermatol，2016，34（4）：475-481.

[2] Edgar NR，Saleh D，Miller RA. Recurrent Aphthous Stomatitis：A Review [J]. J Clin Aesthet Dermatol，2017，10（3）：26-36.

[3] Akintoye SO，Greenberg MS. Recurrent aphthous stomatitis [J]. Dent Clin North Am，2014，58（2）：281-297.

[4] Karincaoglu Y，Batcioglu K，Erdem T，et al. The levels of plasma and salivary antioxidants in the patient with recurrent aphthous stomatitis [J]. J Oral Pathol Med，2005，34（1）：7-12.

[5] Momen-Beitollahi J，Mansourian A，Momen-Heravi F，et al. Assessment of salivary and serum antioxidant status in patients with recurrent aphthous stomatitis [J]. Med Oral Patol Oral Cir Bucal，2010，15（4）：e557-e561.

[6] Gupta I，Shetti A，Keluskar V，et al. Assessment of serum enzymatic antioxidant levels in patients with recurrent aphthous stomatitis：a case control study [J]. Enzyme Res，2014，2014：340819.

[7] Zhang Z，Li S，F(xiàn)ang H. Enzymatic antioxidants status in patients with recurrent aphthous stomatitis [J]. J Oral Pathol Med，2017，46（9）：817-820.

[8] Gunduz K，Ozturk G，Sozmen EY. Erythrocyte superoxide dismutase，catalase activities and plasma nitrite and nitrate levels in patients with Beh？et disease and recurrent aphthous stomatitis [J]. Clin Exp Dermatol，2004，29（2）：176-179.

[9] 楊利軍，王明臣，姚麗，等.胃癌癌變過程血清SOD活力和銅及鋅含量變化的實驗研究[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，9（18）：1753-1754.

[10] 侯煥喜，王訓(xùn).帕金森病與微量元素及氧化應(yīng)激的關(guān)系[J].中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2014，21（2）：123-125.

[11] 孫燕，朱本章.微量元素與糖尿病氧化應(yīng)激[J].國外醫(yī)學(xué)（醫(yī)學(xué)地理分冊），2004，25（4）：159-161.

[12] Katakwar P，Metgud R，Naik S，et al. Oxidative stress marker in oral cancer：A review [J]. J Cancer Res Ther，2016， 12（2）：438-446.

[13] Evenson MA. Measurement of copper in biological samples by flame or electrothermal atomic absorption spectrometry [J]. Methods Enzymol， 1988，158：351-357.

[14] Smith JC，Butrimovitz GP，Purdy WC. Direct measurement of zinc in plasma by atomic absorption spectroscopy [J]. Clin Chem，1979，25（8）：1487-1491.

[15] Scully C，Gorsky M，Lozada-Nur F. The diagnosis and management of recurrent aphthous stomatitis： a consensus approach [J]. J Am Dent Assoc，2003，134（2）：200-207.

[16] Preeti L，Magesh K，Rajkumar K，et al. Recurrent aphthous stomatitis [J]. J Oral Maxillofac Pathol，2011，15（3）：252-256.

[17] Chavan M，Jain H，Diwan N，et al. Recurrent aphthous sto？鄄matitis：a review [J]. J Oral Pathol Med，2012，41（8）：577-583.

[18] Khademi H，Khozeimeh F，Tavangar A，et al. The serum and salivary level of malondialdehyde，vitamins A，E，and C in patient with recurrent aphthous stomatitis [J]. Adv Biomed Res，2014，3：246.

[19] Arikan S，Durusoy C，Akalin N，et al. Oxidant/antioxidant status in recurrent aphthous stomatitis [J]. Oral Dis.，2009， 15（7）：512-515.

[20] Xiao-Yan Li，Zi-Chuan Zhang. Assessment of serum malondialdehyde，uric acid，and vitamins C and E levels in patients with recurrent aphthous stomatitis [J]. J Dent Sci，2016，11（4）：401-404.

[21] Cimen MY，Kaya TI，Eskandari G，et al. Oxidant/antioxidant status in patients with recurrent aphthous stomatitis [J]. Clin Exp Dermatol，2003，28（6）：647-650.

[22] Jomova K，Valko M. Advances in metal-induced oxidative stress and human disease [J]. Toxicology，2011，283（2-3）：65-87.

[23] 陳璇，周方圓，魏小飛，等.鋅對2型糖尿病大鼠糖脂代謝的影響[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，35（10）：1377-1382.

[24] 侯振江，孟晨陽.銅代謝及其臨床意義[J].微量元素與健康研究，2002，19（3）：68-70.

[25] Ozturk P，Belge Kurutas E，Ataseven A. Copper/zinc and copper/selenium ratios，and oxidative stress as biochemical markers in recurrent aphthous stomatitis [J]. J Trace Elem Med Biol，2013，27（4）：312-316.

（收稿日期：2017-11-19 本文編輯：劉學(xué)梅）