黃河三角洲刺參苗種繁育技術(shù)

王沖 孫同秋 崔玥 柴曉貞 國儉文

摘 要：為摸清黃河三角洲地區(qū)刺參繁育特性，提高刺參育苗技術(shù)，在顯微鏡下觀察、測量了胚胎和幼體的大小及胚胎發(fā)育過程。結(jié)果表明，在水溫22±0.5 ℃，鹽度（30±0.5）‰、pH 7.8條件下，利用陰干、流水刺激法可成功進(jìn)行人工催產(chǎn)。受精卵經(jīng)42 h完成胚胎發(fā)育變態(tài)為初耳狀幼體，7 d左右發(fā)育為大耳狀幼體，體長為760.0～970.0 μm；10 d左右生長發(fā)育為樽形幼體，16 d變態(tài)為稚參。

關(guān)鍵詞：刺參；幼體；發(fā)育；人工繁育

刺參（Apostichopus japonicus）隸屬棘皮動(dòng)物門（Echinodermata），海參綱 （Holothuroidea），仿刺參屬（Apostichopus），是我國重要的海珍品養(yǎng)殖種類之一，具有很高的營養(yǎng)與藥用價(jià)值，富含黏多糖、皂苷和凝集素等多種生理活性物質(zhì)，具有提高機(jī)體免疫力、抗炎、抗腫瘤、延緩衰老等功效[1]，深受消費(fèi)者喜愛。目前，我國主要養(yǎng)殖區(qū)集中在山東、遼寧和福建沿海[2]。在山東，隨著“東參西養(yǎng)”的快速發(fā)展，形成了黃河三角洲地區(qū)以東營、濱州為主的刺參養(yǎng)殖新興產(chǎn)業(yè)帶，但苗種產(chǎn)量的不穩(wěn)定性制約產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。筆者以黃河三角洲地區(qū)池塘養(yǎng)殖刺參為親參，通過人工催產(chǎn)，開展了工廠化刺參苗種生態(tài)繁育技術(shù)研究，以期為刺參人工繁育和養(yǎng)殖提供基礎(chǔ)生物學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 親參的采捕與管理

北方地區(qū)每年的5月份親參基本成熟，一般選擇在4月底或5月初進(jìn)行親參的采捕與暫養(yǎng)。本次育苗所用親參為2017年4月下旬采捕于濱州市無棣縣池塘養(yǎng)殖個(gè)體，體長15～25 cm、體重250～350 g、參齡3～4年。親參采捕后暫養(yǎng)于室內(nèi)育苗池中，前期為自然水溫、鹽度；然后采用升溫促熟培育親參，在暗光條件下，日升溫0.5～1 ℃，至18～20 ℃后恒溫養(yǎng)殖，密度一般為20～30頭/m3。每天投喂適量的配合飼料1次，同時(shí)進(jìn)行例行管理，觀察刺參活動(dòng)情況。

1.2 產(chǎn)卵與受精

在育苗生產(chǎn)過程中一般采用陰干流水刺激法進(jìn)行人工誘導(dǎo)產(chǎn)卵。一般雄參先排，根據(jù)雄參排精量情況，及時(shí)將雄參挑出，以避免精子過多，待親參全部產(chǎn)完后，將其全部移出。視精子和卵子密度情況，判斷是否進(jìn)行洗卵。受精卵在育苗池中進(jìn)行培育，應(yīng)進(jìn)行充氣增氧和人工攪動(dòng)，使受精卵在水體中均勻分布，以防止受精卵下沉堆積，局部缺氧，造成受精卵死亡而影響孵化。

1.3 幼體培育

幼體培育密度為0.5～1個(gè)/mL，受精卵經(jīng)36～48 h發(fā)育后至初耳狀幼體，消化道形成，此時(shí)可投喂餌料，前期以海洋紅酵母和螺旋藻為主，每天7：30和17：30各投餌1次；后期添加鼠尾藻、配合飼料和海泥，每天投餌1次。在投餌前和投餌后對(duì)幼體進(jìn)行鏡檢，根據(jù)其攝食情況，適當(dāng)調(diào)整投餌量。當(dāng)30%幼體變態(tài)成樽形幼體時(shí)，投放波紋板附著基。每天換水1次，換水量為全量的1/2。每天取樣1次，觀察幼體發(fā)育情況，并在光學(xué)顯微鏡下用目微尺測量幼體大小20個(gè)。幼體培育期間的水溫、鹽度變化如圖1所示。

2 結(jié)果

2.1 催產(chǎn)與受精

親參在室內(nèi)培育15 d左右，在顯微鏡下檢查其性腺發(fā)育情況。經(jīng)檢查性腺發(fā)育成熟，雄性性腺為乳白色，鏡檢精子活力好；雌性性腺為橘紅色，鏡檢卵子色澤均勻，個(gè)體飽滿。于5月10日采用陰干流水刺激法進(jìn)行人工催產(chǎn)，陰干處理1.5～2 h，再流水刺激30 min，24：00時(shí)，刺參沿池壁上移至表層，活動(dòng)劇烈。雄參先排精，呈白色細(xì)線狀向上浮，約30 min后受刺激的雌參開始產(chǎn)卵，產(chǎn)卵量為1.5億粒，呈橙色絨線狀向下沉。隨后，于5月17、18日再次產(chǎn)卵，產(chǎn)卵量分別為3億粒、5億粒。經(jīng)鏡檢受精率達(dá)95%以上，同時(shí)，出現(xiàn)多精入卵現(xiàn)象。

2.2 幼體發(fā)育

受精卵一般經(jīng)40～48 h發(fā)育形成初耳狀幼體，此時(shí)幼體體長為410.0～530.0 μm，消化道已基本形成，胃呈橢圓形，口前環(huán)和口后環(huán)清晰可辨。幼體依靠口前環(huán)的纖毛擺動(dòng)攝食，可投喂開口餌料。發(fā)育到4 d時(shí)，幼體進(jìn)入中耳狀幼體期，體長達(dá)550.0～750.0 μm。幼體形態(tài)和內(nèi)部器官發(fā)生較大變化，胃部增大，攝食能力增加，胃部食物清晰可見。其體側(cè)脊上的纖毛帶發(fā)生彎曲和突出，前、后背臂逐漸形成。此時(shí)6對(duì)臂已清晰可辨，其中后側(cè)臂和間背臂最為發(fā)達(dá)。同時(shí)，水體腔位于胃和食道連接處的左側(cè)且逐漸增大。

經(jīng)7 d左右發(fā)育為大耳狀幼體，體長進(jìn)一步增長，達(dá)到760.0～970.0 μm。此時(shí)幼體胃部兩側(cè)分別出現(xiàn)呈長條狀的左、右兩個(gè)體腔，水體腔開始向外形成初級(jí)口觸手原基，最為發(fā)達(dá)的后側(cè)臂和間背臂顏色加深，并最早出現(xiàn)球狀體。9日齡時(shí)，幼體各臂尖端均出現(xiàn)球狀體，口和胃部發(fā)育到幼體期的最大值，胃部呈卵圓形，顏色加深，食物在胃內(nèi)不斷轉(zhuǎn)動(dòng)。此時(shí)在水體腔上，向外長出5個(gè)小囊，似手指狀分枝。

10日齡幼體進(jìn)入樽形幼體初期，幼體開始收縮，幼體臂全部縮小，纖毛脫落，輪廓變得模糊。隨著身體的不斷收縮，纖毛帶呈橫向生長，形成橫環(huán)纖毛帶。胃部、消化道大幅收縮，與輻水管和初級(jí)口觸手團(tuán)縮于體腔內(nèi)，且初級(jí)口觸手顯著變大。11日齡時(shí)，體長縮至420.4 μm，顏色變深，不易觀察體內(nèi)發(fā)育情況。隨后，發(fā)育為五觸手幼體，身體背部現(xiàn)刺狀突起，開始形成“X”型骨片，遍布全身。幼體下沉到附著基上，依靠第一管足和觸手進(jìn)行爬行。刺參幼體的生長情況如圖2所示。

2.3 稚參培育

當(dāng)大耳狀幼體有20%左右變態(tài)為樽形幼體時(shí)，投放附著基。附著基為40 cm×40 cm的聚乙烯波紋板，將波紋板放入專用的塑料框架上，每個(gè)框架放置20片，投放前需經(jīng)浸泡、消毒處理。此時(shí)，稚參的附著密度一般為0.2～0.5頭/cm2，投放附著基前應(yīng)控制好幼體密度。每天換水1次，方式為對(duì)流，一邊進(jìn)水，一邊排水，換水量為1/2～1個(gè)全量，隨著水溫的升高和稚參的生產(chǎn)換水量逐漸增加。在投放附著基15 d左右（幼體全部附板7～10 d）倒池1次，此后，根據(jù)水質(zhì)、水溫、密度等情況，5～7 d倒池1次。

3 討論

許多研究表明，精子和卵子的比例對(duì)其后續(xù)的胚胎和幼體發(fā)育具有直接影響，精子過少會(huì)使部分卵子不能受精，精子過多則會(huì)出現(xiàn)多精入卵現(xiàn)象，引起胚胎停止發(fā)育或出現(xiàn)非整倍體而導(dǎo)致胚胎的早期死亡[3-4]。因此，在刺參人工育苗過程中，需進(jìn)行洗卵，大多數(shù)采用分池稀釋法或沉底濃縮法，及時(shí)降低精子密度，一般精卵數(shù)量比控制在3～5∶1，以保證卵子能正常受精。

在刺參幼體發(fā)育過程中，胃部的飽滿程度決定了幼體對(duì)餌料攝食和營養(yǎng)物質(zhì)吸收，是幼體正常發(fā)育的重要因素；在大耳狀幼體階段，其水管的發(fā)育程度是決定耳狀幼體變態(tài)發(fā)育為樽形幼體的重要指標(biāo)。因此，在刺參人工育苗過程中，幼體胃部的飽滿程度和水管的發(fā)育程度是育苗成敗的關(guān)鍵指標(biāo)。有研究表明，球狀體的出現(xiàn)與否與幼體變態(tài)和附著密切相關(guān)[5]，投喂適量、適宜的餌料和改善育苗管理有助于提高幼體球狀體的出現(xiàn)率。在育苗過程中，通常采用微生態(tài)制劑進(jìn)行底質(zhì)、水質(zhì)的改善，同時(shí)合理控制培育密度；在產(chǎn)卵后、布附著基、倒池等階段，及時(shí)投入抗菌藥，以預(yù)防爛邊病、爛胃病、滑板病等病害的發(fā)生。

參考文獻(xiàn)：

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