秋水仙堿對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠動(dòng)脈血管炎癥反應(yīng)的影響研究

張 帆 趙春輝 陳 麗 黃明月

深圳市西麗人民醫(yī)院，廣東深圳 518000

近年來(lái)，動(dòng)脈粥樣硬化已成為嚴(yán)重威脅人類健康的重要疾病。動(dòng)脈粥樣硬化是受累動(dòng)脈從內(nèi)膜開(kāi)始病變的一種常見(jiàn)血管病，是引起心腦血管疾病的主要原因。醫(yī)學(xué)領(lǐng)域需要更有效的手段來(lái)抑制斑塊的不穩(wěn)定性和進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，復(fù)雜的免疫炎癥反應(yīng)導(dǎo)致了粥樣斑塊的發(fā)生、發(fā)展以及不穩(wěn)定性[1-3]。ox-LDL（氧化修飾低密度脂蛋白）、hsCRP（超敏C-反應(yīng)蛋白）、ICAM-1（細(xì)胞間粘附分子-1）、VCAM-1（血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1）、MCP-1（單核細(xì)胞趨化因子-1）、IL-1β（白介素-1β）、IL-6（白介素-6）、TNF-α（腫瘤壞死因子-α）為常見(jiàn)炎性標(biāo)志物。秋水仙堿具有抗炎、免疫抑制、抗纖維化作用，可用于急性心包炎的治療[4]，在心血管疾病領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。秋水仙素對(duì)上述炎癥因子的調(diào)節(jié)作用少見(jiàn)報(bào)道。本研究探討了小劑量的秋水仙堿[0.02mg/（kg·d）]對(duì)高脂喂養(yǎng)大鼠動(dòng)脈血管炎癥反應(yīng)的影響，希望為其應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)所用健康雄性SD大鼠為SPF級(jí)的8周齡大鼠，由廣東省某實(shí)驗(yàn)提供，共30只，體重（205±20）g。

表2 大鼠主動(dòng)脈炎性因子比較（± s，%）

表2 大鼠主動(dòng)脈炎性因子比較（± s，%）

組別 n ICAM-1 VCAM-1 MCP-1 IL-6 IL-1β TNF-α對(duì)照組 10 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00 1.00±0.00高脂組 10 13.38±1.14 10.18±1.18 14.41±2.21 30.88±1.84 13.05±2.59 10.83±1.49觀察組 10 4.91±0.29 4.47±1.32 4.69±1.91 11.21±0.81 5.29±0.89 4.16±0.91

1.2 分組與喂養(yǎng)

30只大鼠用隨機(jī)平均分為3組，每組10只。對(duì)照組采用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周；高脂組采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)+生理鹽水管飼喂養(yǎng)8周；觀察組采用按比例配方的高脂喂養(yǎng)并給予秋水仙堿[0.02mg/（kg·d）]管飼喂養(yǎng)8周。秋水仙堿生產(chǎn)廠家為廣東比迪藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20113208。

1.3 檢測(cè)方法

ELISA法檢測(cè)大鼠血清中hs-CRP、ox-LDL含量。取大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈采血3mL，置于促凝試管內(nèi)，經(jīng)4℃ 3000r/min離心5min，取上層血清放入EP管中，-20℃保存；另取血3mL置于抗凝管中，待測(cè)。用Rayto，RT-2100C 型酶標(biāo)儀測(cè)定。

免疫組化法檢測(cè)大鼠主動(dòng)脈標(biāo)本內(nèi)ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、IL-6、IL-1β、TNF-α 的表達(dá)。處死大鼠，留取降主動(dòng)脈標(biāo)本（長(zhǎng)約1cm），10%甲醛溶液內(nèi)固定＞24h，流水沖洗后石蠟包埋，5μm連續(xù)切片。用Leica ST5010XL染色機(jī)進(jìn)行免疫組化染色，通過(guò)計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)來(lái)評(píng)定因子的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清ox-LDL、hsCRP變化

對(duì)大鼠血清ox-LDL、hsCRP的變化進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示，高脂組大鼠血清中ox-LDL、hsCRP的水平高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=19.767，9.908， P ＜ 0.05）；觀察組大鼠血清中 ox-LDL、hsCRP的水平低于高脂組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=2.499， 19.348， P ＜ 0.05）。見(jiàn)表 1。

2.2 主動(dòng)脈炎性因子變化

對(duì) 大 鼠 主 動(dòng) 脈 ox-LDL、hsCRP、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、IL-6、IL-1β、TNF-α 等 6種炎性因子的變化進(jìn)行測(cè)定，高脂組6種炎性因子表達(dá)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=34.341， 24.601，19.188， 51.353， 14.713， 20.863， P ＜ 0.05）； 觀察組6種炎性因子表達(dá)低于高脂組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=22.770， 10.198， 10.523， 30.940， 8.960，12.081， P ＜ 0.05）。見(jiàn)表 2。

表1 大鼠血清ox-LDL、hsCRP比較（± s）

表1 大鼠血清ox-LDL、hsCRP比較（± s）

組別 n ox-LDL[ρ/（μg·L）] hsCRP[ρ/（mg·L）]對(duì)照組 10 2.11±0.44 1.24±0.12高脂組 10 5.37±0.28 1.71±0.09觀察組 10 2.54±0.32 1.39±0.07

3 討論

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的斑塊可能發(fā)生破裂，由此產(chǎn)生繼發(fā)血栓，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定，進(jìn)而引起急性冠脈綜合征。急性冠狀動(dòng)脈事件和斑塊內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)有著緊密的聯(lián)系，患者的硬化血管里面，中性粒細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量顯著增高[5]。據(jù)報(bào)道[6]，CRP較高的穩(wěn)定性冠心病患者中，內(nèi)服秋水仙堿能夠降低hsCRP，這就提示我們，小劑量秋水仙堿能夠降低穩(wěn)定性冠心病患者血漿hsCRP的濃度。房顫的發(fā)生常常加重心梗后心衰的發(fā)生。有學(xué)者[7]將161例行肺靜脈隔離手術(shù)的陣發(fā)房顫患者，隨機(jī)分為兩組，分別是秋水仙堿（1mg/d）組（A組）及安慰劑對(duì)照組（B組），對(duì)受試者進(jìn)行三個(gè)月的研究，結(jié)果顯示，A組的復(fù)發(fā)率明顯低于B組。另有研究表明，秋水仙堿可縮短患者的住院時(shí)間[8]。

滲漏是房屋建筑施工中比較常見(jiàn)的問(wèn)題，而發(fā)生滲漏的位置有很多，如外墻、屋面、門(mén)窗、廚衛(wèi)等，滲漏不僅會(huì)對(duì)房屋建筑的外觀帶來(lái)極大影響，同時(shí)還會(huì)影響到房屋建筑的穩(wěn)定性，降低了房屋建筑的使用壽命，所以在房屋建筑施工中合理的應(yīng)用防滲漏技術(shù)是十分重要的。

當(dāng)血管的炎性相關(guān)微環(huán)境發(fā)生改變的時(shí)候，機(jī)體會(huì)上調(diào)其炎性標(biāo)志物，炎癥因子和AS的發(fā)生、發(fā)展存在著明顯的關(guān)聯(lián)[9]。ICAM-1、VCAM-1、MCP-1能夠增加血液白細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附力，導(dǎo)致白細(xì)胞向內(nèi)皮趨化聚集，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷，致使內(nèi)皮的功能受到損害。IL-1β、IL-68、TNF-α能夠?qū)ρ仔赃M(jìn)行調(diào)節(jié)。據(jù)報(bào)道[10]，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行造模，然后對(duì)IL-1β進(jìn)行滅活處理，能夠緩解AS的發(fā)生。IL-6能夠?qū)⒀仔约?jí)聯(lián)反應(yīng)效果進(jìn)行放大。上調(diào)IL-6能夠增加心血管事件的發(fā)生率[11]。對(duì)TNF-α進(jìn)行抑制，對(duì)心臟功能存在一定的益處。ICAM-1、VCAM-1在正常血管中少量表達(dá)，標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化方案不能在正常血管表面，當(dāng)體內(nèi)出現(xiàn)病理?xiàng)l件下時(shí)，用標(biāo)準(zhǔn)的免疫組化法可以檢測(cè)出二者的含量。

本研究結(jié)果顯示：高脂喂養(yǎng)可上調(diào)ox-LDL、hsCRP、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、IL-6、IL-1β、TNF-α表達(dá)，秋水仙堿可抑制ox-LDL、hsCRP、ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、IL-6、IL-1β、TNF-α的過(guò)表達(dá)。

秋水仙堿對(duì)心血管方面的顯著療效和價(jià)格低廉的優(yōu)勢(shì)，促使我們進(jìn)一步評(píng)估其在冠心病預(yù)防中的重要作用。一項(xiàng)關(guān)于低劑量秋水仙堿用于冠心病二級(jí)預(yù)防的大型的隨機(jī)雙盲研究[12-13]中，探索不同劑量的秋水仙素用于冠心病二級(jí)預(yù)防的有效性和安全性，結(jié)果顯示用量超過(guò)0.5mg/d可能顯著獲益，但腸道副作用顯著增加。小劑量秋水仙堿（不超過(guò)0.5mg/d）治療既能顯著獲益，又能避免腸道副反應(yīng)以及減少有害的藥物相互作用[14]。小劑量秋水仙堿對(duì)防治心血管病變的效用較明顯，其副作用較少，可用于心血管疾病領(lǐng)域的治療和預(yù)防[15-18]。但由于秋水仙堿的機(jī)理多樣，未完全闡明，尚需后繼基礎(chǔ)研究和多中心臨床試驗(yàn)的進(jìn)一步證實(shí)。

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