長鏈非編碼RNA MIAT在非小細胞肺癌中的表達及功能研究*

裴 振， 霍小蕾， 田向陽， 張毅強， 賈建桃， 韓玲娜△

(長治醫(yī)學(xué)院 1生理學(xué)教研室， 2組織胚胎學(xué)教研室， 3附屬和平醫(yī)院， 4生化教研室， 5病理生理學(xué)教研室， 山西 長治 046000)

非小細胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma，NSCLC)是全球范圍內(nèi)最常見的肺部惡性腫瘤，具有極高的發(fā)病率和死亡率，居所有的惡性腫瘤之首[1]。近來年，我國的NSCLC發(fā)病率和死亡率均呈上升趨勢，其治療也面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)[2]。目前，NSCLC的治療手段仍然是以手術(shù)治療為主。隨著治療技術(shù)日臻成熟，盡管治療方法大大改進，但是NSCLC的預(yù)后仍然不佳，患者5年生存率約為15%[3-4]。因此，NSCLC的治療亟需一種新的治療靶標(biāo)，以更好監(jiān)測其復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移等病程。長鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs，lncRNAs)是一類近年來被發(fā)現(xiàn)與多種疾病密切相關(guān)的RNA分子[5-6]，心肌梗死相關(guān)轉(zhuǎn)錄本(myocardial infarction-associated transcript，MIAT)是lncRNA家族分子的一員[7]，在調(diào)控神經(jīng)內(nèi)分泌前列腺癌[8]、胃癌[9]、腎透明細胞癌[10]、慢性淋巴細胞白血病和膠質(zhì)母細胞瘤[11]等惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，然而MIAT在NSCLC中的研究還鮮有報道。本研究通過研究MIAT在NSCLC中的表達、定位及分子調(diào)控方式，初步探究MIAT對非小細胞肺癌生物學(xué)行為的作用機制，為非小細胞肺癌的分子治療提供理論依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 材料

Lipofectamine 2000 購于Invitrogen；TRIzol試劑和逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(miScriptⅡRT Kit)購于QIAGEN；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Reverse Transcription System)購于Promega；小干擾RNA(small interfering RNA， siRNA)片段購于廣州瑞博生物有限公司；細胞周期與細胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)、CCK-8試劑購于碧云天生物科技公司；細胞漿/核RNA抽提試劑盒(PARISTMKit Protein and RNA Isolation System)購于Ambion；抗細胞周期蛋白D1(cyclin D1)、細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1A(cyclin-dependent kinase inhibitor 1A，CDKN1A)和GAPDH抗體購自上海優(yōu)寧維生物科技有限公司。

2 方法

2.1一般資料 收集25例長治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院腫瘤科自2014年12月～2016年1月行手術(shù)切除的非小細胞肺癌患者癌組織和癌旁組織(癌周3 cm以上)?；颊吣挲g35～75 歲，平均(55.23±3.45)歲?；颊咝g(shù)前均未進行放化療和生物治療，未合并其它腫瘤等，并且可收集患者完整檢查、治療和手術(shù)資料，以及聯(lián)系方式等。標(biāo)本首先置于液氮灌中10 min，然后取出置于-80 ℃保存用于抽提RNA，行qPCR法檢測MIAT的表達情況。

Gene Expression Omnibus (GEO)公共數(shù)據(jù)庫中GSE19804和GSE30219數(shù)據(jù)集在Pubmed GEO DataSets 主頁(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds/)下載獲得，這2個數(shù)據(jù)集的平臺來源為GPL570，其基因表達譜芯片分析均采用Affymetrix HumanGenome U133 Plus 2.0 Array，MIAT對應(yīng)的探針號為237322_at。GSE19804中包含60對人非小細胞肺癌患者癌組織及癌旁組織，GSE30219中包含289例非小細胞肺癌患者臨床預(yù)后資料。

2.2細胞系 人正常支氣管上皮細胞系HBE及人NSCLC細胞系A(chǔ)549、NCI-H266和NCI-NCI-H1299均購于中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細胞資源中心。HBE、A549、NCI-H266和NCI-H1299細胞所用培養(yǎng)液為含10%胎牛血清(fetal bovine serum，F(xiàn)BS)的RPMI-1640培養(yǎng)基，細胞保持在37 ℃、5% CO2的潮濕環(huán)境中。

2.3細胞轉(zhuǎn)染 首先，將生長狀態(tài)良好的A549細胞接種于6孔板中(按每孔1.5×105個細胞)，然后用陰性對照siRNA(negative control siRNA，si-NC)和si-MIAT(5 μmol/L)進行細胞轉(zhuǎn)染，具體步驟參照LipofectamineTM2000試劑盒說明書。轉(zhuǎn)染48 h后，收集細胞及上清進行相應(yīng)檢測。si-MIAT片段的序列為5’-GGUGUUAAGACUUGGUUUCTT-3’； si-NC片段的產(chǎn)品編號為siN05815122147。

2.4qPCR實驗 采用TRIzol法提取各組細胞的總RNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA，進行qPCR檢測。MIAT的正向引物為5’-GCTCACACCTCCTATTCCT-3’，反向引物為5’-CTTCACCAACTCTCCCACT-3’； cyclin D1的正向引物為5’-TCGTTGCCCTCTGTGCCACA-3’，反向引物為5’-GCAGTCCGGGTCACACTTGA-3’； CDKN1A的正向引物為5’-TGTCCGTCAGAACCCATGC-3’，反向引物為5’-AAAGTCGAAGTTCCATCGCTC-3’； U6(細胞核的參照物)的正向引物為5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向引物為5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’；18S (細胞質(zhì)的參照物)的正向引物為5’-GTGGGCCGAAGATATGCTCA-3’，反向引物為5’-TTGGCTAGGACCTGGCTGTA-3’；GAPDH (細胞質(zhì)的參照物)的正向引物為5’-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3’，反向引物為5’-GGCATGGACTGTGGTCATGAG-3’。引物根據(jù)GenBank序列，用軟件Primer Premier 5.0 和 Oligo 6.22 設(shè)計，由華大基因生物科技有限公司合成。PCR反應(yīng)條件為：95 ℃ 5 min； 95 ℃ 30 s、60 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s，重復(fù)40個循環(huán)。

2.5CCK-8實驗檢測細胞活力 各組細胞設(shè)置5個復(fù)孔，進行相應(yīng)的處理后。各孔加入100 μL混合培養(yǎng)液(90 μL聯(lián)合培養(yǎng)基+10 μL CCK-8溶液)，在37 ℃孵育長達2 h，并使用SpectraMax 190光吸收酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光度(A)。

2.6集落形成實驗 各組細胞按每孔1×103個分別接種于6孔板中，培養(yǎng)約15 d后，肉眼可見克隆時即終止培養(yǎng)。PBS清洗數(shù)次，4%多聚甲醛固定30 min，再用1%結(jié)晶紫染液染色10 min，晾干，拍照。每組設(shè)置3個復(fù)孔。

2.7細胞周期分布的分析 收集細胞并用70%的冷乙醇固定，4℃過夜。用碘化丙啶(0.05 g/L)和RNA酶(2 g/L)常溫下進行染色30 min，用流式細胞術(shù)分析細胞周期，使用Cell Lab Quanta SC軟件對處于G0/G1、S和G2/M期細胞在細胞周期的百分比進行評估。

2.8細胞核/質(zhì)RNA的分離及檢測 收集約1×106個A549細胞，用預(yù)冷的PBS清洗數(shù)次，離心，重懸，再將細胞分成2份(一份抽提總RNA，一份抽提核/質(zhì)RNA)?？俁NA的抽提利用TRIzol法，細胞漿/核RNA的抽提步驟參考胞漿/核RNA抽提試劑盒說明書。將qPCR法測得的細胞核RNA樣本中MIAT、U6、GAPDH和18S的表達量減去各自在總RNA樣本中的表達量，得到ΔCt，然后計算2-ΔCt，最后進行l(wèi)og10(2-ΔCt)轉(zhuǎn)換即得到最終的表達值[12]。當(dāng)MIAT表達量大于0 時, 即表示該分子主要分布在細胞核中；反之，當(dāng)MIAT表達量小于0時，在橫坐標(biāo)下方，即表示該分子主要分布在細胞質(zhì)中。

2.9Western blot分析 處理細胞后，用 RIPA 裂解液(強)冰上裂解細胞 30 min，20 W超聲振蕩2 min，在4 ℃條件下，12 000×g離心10 min，收集上清，測蛋白濃度。50 μg待測蛋白進行10% SDS-PAGE分離，電泳條件為積層膠 80 V 40 min、分離膠120 V 90 min，然后在100 V的條件下濕轉(zhuǎn)膜 90 min，室溫封閉1 h，I 抗4 ℃孵育過夜(抗cyclin D1和CDKN1A 抗體的稀釋比例為1∶500，抗GAPDH 抗體的稀釋比例為1∶1 000)，洗膜，II 抗37 ℃孵育1 h，洗膜，顯影。用Scion Image軟件進行條帶的灰度分析。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示；使用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩組間比較采用Studentt-test。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 GEO 公共數(shù)據(jù)庫分析MIAT在NSCLC組織和正常肺組織中的表達差異

GSE19804數(shù)據(jù)集分析結(jié)果顯示，MIAT在NSCLC組織中的表達高于正常肺組織(P<0.05)，見圖1。GSE30219數(shù)據(jù)集分析顯示，MIAT 高表達患者生存期顯著短于低表達患者(P<0.01)，見圖2。

Figure 1. The expression level of MIAT in NSCLC tissues and normal lung tissues analyzed by GEO database. Mean±SD.n=60.

圖1GEO公共數(shù)據(jù)庫分析MIAT在NSCLC組織和正常肺組織中的表達

Figure 2. The correlation between the expression level of MIAT and the survival time of NSCLC patients analyzed by GEO database.

圖2GEO公共數(shù)據(jù)庫分析MIAT表達水平與NSCLC患者生存期的關(guān)系

2 MIAT在NSCLC組織和NSCLC細胞系中的表達及定位

qPCR檢測25對人NSCLC組織及其相應(yīng)的癌旁正常組織，結(jié)果顯示相對于癌旁正常組織，MIAT在NSCLC組織中呈現(xiàn)高表達(P<0.05)，見圖3；qPCR檢測肺正常支氣管上皮細胞系HBE和NSCLC細胞系A(chǔ)549、NCI-H266和NCI-H1299中MIAT的表達情況，結(jié)果顯示MIAT在NSCLC細胞的表達顯著高于正常支氣管上皮細胞系HBE(P<0.05)，其中，NSCLC細胞系A(chǔ)549中MIAT的表達最高(P<0.01)，見圖4。此外，用試劑盒抽提分離A549細胞的細胞核RNA和細胞質(zhì)RNA后，行qPCR檢測相應(yīng)細胞核/質(zhì)指標(biāo)，結(jié)果顯示MIAT主要定位于細胞質(zhì)中，見圖5，提示MIAT可能在細胞質(zhì)發(fā)揮調(diào)控某些基因轉(zhuǎn)錄后水平或翻譯水平的功能。

Figure 3. The expression of MIAT in NSCLC cancer tissues and normal lung tissues detected by qPCR. Mean±SD.n=25.*P<0.05vsadjacent.

圖3qPCR檢測MIAT在NSCLC腫瘤組織及癌旁組織中的表達

Figure 4. The expression of MIAT in NSCLC cells detected by qPCR. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vsHBE.

圖4qPCR檢測MIAT在NSCLC細胞系中的表達

Figure 5. The location of MIAT in NSCLC A549 cells detected by qPCR. Mean±SD.n=3.

圖5qPCR檢測MIAT在NSCLC細胞系A(chǔ)549中的定位情況

3 驗證si-MIAT在A549細胞中的抑制效率

si-MIAT瞬時轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌A549細胞48 h后，qPCR檢測結(jié)果顯示，與空白對照(blank control)和轉(zhuǎn)染si-NC的細胞相比，轉(zhuǎn)染si-MIAT的細胞MIAT的表達水平受到抑制(P<0.01)，見圖6。

Figure 6. The inhibition efficiency of si-MIAT in NSCLC A549 cells. Mean±SD.n=3.**P<0.01vsblank control group.

圖6qPCR檢測si-MIAT在NSCLC細胞系A(chǔ)549中的抑制效率

4 沉默MIAT表達對A549細胞活力的影響

si-MIAT瞬時轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌A549細胞48 h后，流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-MIAT組處于G0/G1期的細胞比例明顯增多(P<0.05)，處于S期的細胞比例明顯減少(P<0.01)，見圖7。轉(zhuǎn)染細胞后培養(yǎng)15 d，si-MIAT組細胞相對于si-NC組的集落形成明顯受到了抑制，且集落數(shù)量明顯減少, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖8。此外，CCK-8實驗結(jié)果也顯示，轉(zhuǎn)染96 h后，si-MIAT組細胞相對于si-NC組的細胞活力明顯受到抑制, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖9。以上結(jié)果顯示，沉默MIAT表達可抑制非小細胞肺癌A549細胞的生長。

Figure 7. The effect of si-MIAT on cell-cycle distribution of A549 cells detected by flow cytometry. Mean±SD.n=3.*P<0.05，**P<0.01vssi-NC group.

圖7流式細胞術(shù)檢測MIAT對細胞周期分布的影響

Figure 8. The effect of si-MIAT on colony formation of A549 cells detected by colony formation experiment. Mean±SD.n=3.*P<0.05vssi-NC group.

圖8細胞集落形成實驗檢測si-MIAT對細胞集落形成的影響

Figure 9. The effect of si-MIAT on the viability of A549 cells detected by CCK-8 assay. Mean±SD.n=5.*P<0.05vssi-NC group.

圖9CCK-8實驗檢測si-MIAT對細胞活力的影響

5 沉默MIAT表達對A549細胞的細胞周期分子表達的影響

si-MIAT瞬時轉(zhuǎn)染非小細胞肺癌A549細胞48 h后收集相應(yīng)的RNA和蛋白質(zhì)，qPCR檢測結(jié)果顯示，與si-NC組相比，si-MIAT組細胞中MIAT和cyclin D1的mRNA表達水平均受到了抑制，而CDKN1A的mRNA表達水平升高, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖10。Western blot法檢測結(jié)果也同樣表明，si-MIAT組相對于si-NC組cyclin D1的蛋白表達量減少，而CDKN1A的蛋白表達量增加，灰度分析顯示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見圖11。

Figure 10. The effect of si-MIAT on cyclin D1 and CDKN1A expression detected by qPCR. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vssi-NC group.

圖10qPCR檢測si-MIAT對細胞周期分子的影響

討 論

肺癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，全世界每年約有180萬新發(fā)病例[13]。肺癌根據(jù)病理學(xué)形態(tài)和臨床特征又可分為小細胞肺癌(small-cell lung cancer，SCLC)和NSCLC，其中NSCLC患者約占85%[14]。NSCLC的發(fā)病過程涉及多基因、多步驟、多階段，參與其中的基因及環(huán)境影響因素廣泛而復(fù)雜，因此NSCLC的確切發(fā)生機制尚不完全清楚。隨著分子生物學(xué)技術(shù)在疾病的應(yīng)用逐漸深入，尋找合適、有效的分子標(biāo)志物和治療靶點是當(dāng)前NSCLC治療的新策略。

Figure 11. The effect of si-MIAT on cyclin D1 and CDKN1A protein expression detected by Western blot. Mean±SD.n=3.*P<0.05,**P<0.01vssi-NC group.

圖11Westernblot法檢測si-MIAT對細胞周期分子蛋白水平的影響

長鏈非編碼RNAs是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類轉(zhuǎn)錄本長度在200～100 000 nt、缺少完整功能性的開放閱讀框、僅編碼少量功能性短肽的RNA分子[15-17]。lncRNAs可定位于細胞核、細胞質(zhì)或者特定亞細胞器上，其定位與其行使的功能密切相關(guān)[18]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，lncRNAs的異常表達或功能缺失也與多種疾病有關(guān)，如銀屑病、冠心病、糖尿病和腫瘤等[19]。MIAT位于人類染色體22q12.1的位置，有4個轉(zhuǎn)錄本，其在多個物種間具有保守性[20-21]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，MIAT在多種腫瘤中處于紊亂表達狀態(tài)，Sattari等[22]報道MIAT在慢性淋巴細胞白血病患者中表達水平升高且與患者染色體突變有關(guān)，可成為潛在的預(yù)后指標(biāo)；鄭灶松等[10]通過癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas，TCGA)公共數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)MIAT在腎透明細胞癌組織中的表達明顯高于癌旁正常組織，并且MIAT高表達的患者的總生存時間明顯低于MIAT低表達的患者。高通量基因表達數(shù)據(jù)庫是基于大量累積的基因表達譜的數(shù)據(jù)而形成的高通量基因表達數(shù)據(jù)庫，為疾病相關(guān)基因的分析提供了快捷、高效的途徑[23-24]。我們通過提取GEO公共數(shù)據(jù)庫GSE19804和GSE30219數(shù)據(jù)集的生物信息學(xué)資料和臨床預(yù)后資料，分析MIAT在NSCLC組織和正常肺組織中的表達差異以及MIAT表達水平與NSCLC患者生存期的關(guān)系。本研究分析結(jié)果顯示，GEO公共數(shù)據(jù)庫GSE19804數(shù)據(jù)集中MIAT在NSCLC組織中的表達高于正常肺組織，GEO公共數(shù)據(jù)庫GSE30219數(shù)據(jù)集中MIAT高表達患者生存期顯著短于低表達患者。此外，NSCLC細胞系A(chǔ)549、NCI-H266和NCI-H1299中MIAT的表達也高于支氣管正常上皮細胞系HBE，這些結(jié)果表明NSCLC患者的MIAT表達升高，可能是判斷NSCLC發(fā)生的潛在標(biāo)志物。

腫瘤是一類漸進性增殖異常的疾病，其發(fā)生發(fā)展常常伴隨著細胞的惡性增殖[25]。非小細胞肺癌中MIAT的高表達可能與其侵襲、轉(zhuǎn)移和血管生成等密切相關(guān)。Zhang等[26]研究顯示MIAT可呈“海綿樣”吸附miR-150發(fā)揮競爭性內(nèi)源 RNA(competitive endogenous RNA, ceRNA)的作用促進上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)分子鋅指E盒結(jié)合同源框1的表達，從而抑制NSCLC細胞的侵襲轉(zhuǎn)移。本研究主要從NSCLC細胞惡性增殖的角度出發(fā)，通過流式細胞術(shù)、CCK-8實驗和細胞集落形成實驗，檢測在NSCLC細胞系A(chǔ)549中通過siRNA沉默MIAT表達后細胞的增殖情況，與對照組si-NC細胞相比，si-MIAT組處于G1期的細胞比例明顯增多，處于S期的細胞比例明顯減少； si-MIAT組的細胞集落形成明顯受到了抑制，且集落數(shù)量明顯減少；si-MIAT組的細胞活力明顯受到抑制。這些結(jié)果表明，在非小細胞肺癌細胞中沉默MIAT的表達可明顯抑制其惡性增殖的生物學(xué)表型。

細胞周期蛋白包括G1期、S期和M期蛋白3種，G1/S期特異性周期蛋白cyclin D1可與細胞周期蛋白依賴性激酶6(cyclin-dependent kinase 6，CDK6)特異性結(jié)合，形成cyclin D1-CDK6復(fù)合體，推進G1期向S期的進程，而CDKN1A可抑制G1期向S期的轉(zhuǎn)換[27-28]。目前，MIAT如何影響非小細胞肺癌的細胞增殖的分子機制還未見文獻報道，鑒于我們在lncRNAs核質(zhì)定位實驗中發(fā)現(xiàn)MIAT主要定位在細胞質(zhì)中以及流式細胞技術(shù)檢測中發(fā)現(xiàn)si-MIAT可使細胞周期G1到S期的進展受到阻滯，因此我們推測MIAT可能通過在細胞質(zhì)中發(fā)揮調(diào)控細胞周期分子cyclin D1和CDKN1A的作用從而影響NSCLC的增殖。本研究通過qPCR和Western blot實驗檢測，結(jié)果顯示與對照組si-NC細胞相比，si-MIAT組細胞中cyclin D1的表達水平受到抑制，而G1/S期轉(zhuǎn)換的抑制蛋白CDKN1A的表達水平升高，提示MIAT可能在細胞質(zhì)中通過調(diào)控周期相關(guān)蛋白的表達影響周期進程，進而促進了NSCLC的增殖。

[參考文獻]

[1] Ferlay J, Soerjomataram I, Dikshit R, et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J]. Int J Cancer, 2015, 136(5):E359-E386.

[2] Chen W, Zheng R, Baade PD, et al. Cancer statistics in China[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(2):115-132.

[3] Raungrut P, Wongkotsila A, Lirdprapamongkol K, et al. Prognostic significance of 14-3-3gamma overexpression in advanced non-small cell lung cancer[J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2014, 15(8):3513-3518.

[4] Miller KD, Siegel RL, Lin CC, et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2016[J]. CA Cancer J Clin, 2016, 66(4):271-289.

[5] 何笑云， 歐春麟， 周素嫻. 長鏈非編碼RNAs在糖尿病中的研究進展[J]. 中華糖尿病雜志, 2016, 8(3):187-189.

[6] Beermann J, Piccoli MT, Viereck J, et al. Non-coding RNAs in development and disease: background, mechanisms, and therapeutic approaches[J]. Physiol Rev, 2016, 96(4):1297-1325.

[7] Ishii N, Ozaki K, Sato H, et al. Identification of a novel non-coding RNA, MIAT, that confers risk of myocardial infarction[J]. J Hum Genet, 2006, 51(12):1087-1099.

[8] Crea F, Venalainen E, Ci X, et al. The role of epigene-tics and long noncoding RNA MIAT in neuroendocrine prostate cancer[J]. Epigenomics, 2016, 8(5):721-731.

[9] Li Y, Wang K, Wei Y, et al. lncRNA-MIAT regulates cell biological behaviors in gastric cancer through a mechanism involving the miR-29a-3p/HDAC4 axis[J]. Oncol Rep, 2017, 38(6)：3465-3472.

[10] 鄭灶松， 陳海城， 謝文練. 長鏈非編碼RNA MIAT在腎透明細胞癌中的表達情況和預(yù)后意義[J]. 嶺南現(xiàn)代臨床外科, 2017, 17(4):391-394.

[11] Galardi S, Savino M, Scagnoli F, et al. Resetting cancer stem cell regulatory nodes upon MYC inhibition[J]. EMBO Rep, 2016, 17(12):1872-1889.

[12] Huarte M, Guttman M, Feldser D, et al. A large intergenic noncoding RNA induced by p53 mediates global gene repression in the p53 response[J]. Cell, 2010, 142(3):409-419.

[13] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2015, 65(1):5-29.

[14] Seve P, Reiman T, Dumontet C. The role of βIII tubulin in predicting chemoresistance in non-small cell lung cancer[J]. Lung Cancer, 2010, 67(2):136-143.

[15] 姜興明， 王志東， 李景林， 等. ?；撬嵘险{(diào)基因1對腫瘤發(fā)生發(fā)展的調(diào)控作用[J]. 中國病理生理雜志, 2017，33(7):1332-1337.

[16] 何笑云， 歐春麟， 肖艷華， 等. 沙格列汀對高糖誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞中LncRNA-MALAT1表達的影響[J]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報, 2016，29(6):902-905.

[17] 覃偉峰， 仉紅剛. lncRNA在心血管疾病中作用的研究進展[J]. 中國病理生理雜志, 2016，32(8):1471-1477.

[18] Chen LL. Linking Long Noncoding RNA Localization and Function[J]. Trends Biochem Sci, 2016, 41(9):761-772.

[19] 張明嬌， 吳 勇， 李珉珉. 長鏈非編碼RNAs的生物功能及其與器官發(fā)育和惡性腫瘤的關(guān)系[J]. 中國病理生理雜志, 2015，31(11):2107-2112.

[20] Liao J, He Q, Li M, et al. LncRNA MIAT: myocardial infarction associated and more[J]. Gene, 2016, 578(2):158-161.

[21] Zhou X, Zhang W, Jin M, et al. lncRNA MIAT functions as a competing endogenous RNA to upregulate DAPK2 by sponging miR-22-3p in diabetic cardiomyopathy[J]. Cell Death Dis, 2017, 8(7):e2929.

[22] Sattari A, Siddiqui H, Moshiri F, et al. Upregulation of long noncoding RNA MIAT in aggressive form of chronic lymphocytic leukemias[J]. Oncotarget, 2016, 7(34):54174-54182.

[23] Davis S, Meltzer PS. GEOquery: a bridge between the Gene Expression Omnibus (GEO) and BioConductor[J]. Bioinformatics, 2007, 23(14):1846-1847.

[24] Barrett T, Troup DB, Wilhite SE, et al. NCBI GEO: mining tens of millions of expression profiles--database and tools update[J]. Nucleic Acids Res, 2007, 35(Database issue):D760-D765.

[25] Balkwill F, Mantovani A. Cancer and inflammation: implications for pharmacology and therapeutics[J]. Clin Pharmacol Ther, 2010, 87(4):401-406.

[26] Zhang HY, Zheng FS, Yang W, et al. The long non-co-ding RNA MIAT regulates zinc finger E-box binding homeobox 1 expression by sponging miR-150 and promoteing cell invasion in non-small-cell lung cancer[J]. Gene, 2017, 633:61-65.

[27] Semczuk A, Jakowicki JA. Alterations of pRb1-cyclin D1-cdk4/6-p16INK4Apathway in endometrial carcinogenesis[J]. Cancer Lett, 2004, 203(1):1-12.

[28] Schwartz GK, Shah MA. Targeting the cell cycle: a new approach to cancer therapy[J]. J Clin Oncol, 2005, 23(36):9408-9421.