卵巢癌組織中IL—6與SOCS1陽(yáng)性表達(dá)及其意義

[摘要]目的探討白細(xì)胞介素6（IL-6）和細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1（SOCS1）在卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)及臨床意義。方法采用免疫組化二步法檢測(cè)不同卵巢組織中IL-6和SOCS1的陽(yáng)性表達(dá)，分析兩者的表達(dá)及其與卵巢癌臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。結(jié)果卵巢癌組織中IL-6和SOCS1的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織（X²=6.094～28.983，P<0.05）。卵巢癌組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、腹水有關(guān)（X²=8.451～14.872，P<0.05），與病理類(lèi)型、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。SOCS1陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（X²=6.137，P<0.05），與病理類(lèi)型、FIGO分期、腹水、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。卵巢癌組織中IL-6與SOCSl的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.297，P<0.05）。結(jié)論IL-6和SOCS1在卵巢癌中高表達(dá)，與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]卵巢腫瘤；白細(xì)胞介素6；細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白抑制因子；免疫組織化學(xué)

卵巢癌是婦科最致命的惡性腫瘤，全球每年大約有20萬(wàn)人被診斷為卵巢癌，其5年病死率大于60%，嚴(yán)重威脅女性的生命健康。炎性細(xì)胞因子在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，已經(jīng)明確腫瘤細(xì)胞以及炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、IL-6、腫瘤壞死因子-a（TNF-a）和趨化因子等可直接促進(jìn)惡性腫瘤的進(jìn)展。卵巢癌組織中過(guò)表達(dá)的IL-6作用于其受體后，可激活相關(guān)傳導(dǎo)通路如JAK/STAT、Ras/ERK/MAPK和P13K/AKT等，從而產(chǎn)生促進(jìn)細(xì)胞增殖、抗凋亡、誘導(dǎo)血管增生、細(xì)胞浸潤(rùn)和耐藥等作用。已有研究表明，IL-6可作為卵巢癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子1（SOCS1）是阻斷多種細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程的負(fù)性調(diào)控因子，其可直接抑制或通過(guò)抑制JAK/STAT、酪氨酸激酶受體（RTK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來(lái)阻斷相關(guān)因子所介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，SOCS1的異常表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究應(yīng)用免疫組化二步法檢測(cè)IL-6和SOCSl在不同卵巢組織中的表達(dá)，探討兩者在卵巢癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1材料和方法

1.1材料來(lái)源

收集2011年12月-2015年12月在我院初次就診的105例卵巢癌和40例良性卵巢腫瘤病人的石蠟包埋組織標(biāo)本，所有標(biāo)本均經(jīng)病理檢查證實(shí)。105例卵巢癌標(biāo)本按病理類(lèi)型分為漿液性78例、黏液性20例、子宮內(nèi)膜樣腺癌5例和透明細(xì)胞癌2例。卵巢良性腫瘤標(biāo)本按病理類(lèi)型分為漿液性28例和黏液性12例。并以30例同期因子宮肌瘤行附件切除的正常卵巢組織標(biāo)本作為對(duì)照組。所有卵巢癌病人均行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)或分期手術(shù)，術(shù)前均未接受化療、放療及免疫治療。

1.2主要試劑

兔抗人IL-6多克隆抗體（ab6672，稀釋度1：200）及兔抗人SOCSl多克隆抗體（ab83493，稀釋度1：200）購(gòu)自美國(guó)Abcam公司，免疫組化PV-6001試劑盒、DAB顯色劑購(gòu)自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果判定

1.3.1實(shí)驗(yàn)方法石蠟包埋組織切片，烤片，并逐級(jí)脫蠟、水化。將切片依次放人二甲苯溶液3次，各5min；無(wú)水乙醇2次，各5 min，體積分?jǐn)?shù)為0.95的乙醇5min，體積分?jǐn)?shù)為0.70的乙醇5 min，體積分?jǐn)?shù)為0.50的乙醇5 min；自來(lái)水沖洗3 min，PBS浸泡3次，各2 min；置于煮沸的含有抗原修復(fù)液的高壓鍋中修復(fù)2 min，自然冷卻后放入PBS浸泡3次，各5 min，以體積分?jǐn)?shù)為0.03的過(guò)氧化氫溶液作用10min，阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；放人PBS浸泡3次，各5min后，加人一抗37℃溫箱孵育1 h；取出后置于PBS浸泡3次，各3 rain，加入IgG生物素連接的二抗37℃溫箱孵育30 min；置于PBS浸泡3次，每次5 min，DAB染色1 min，自來(lái)水沖洗2 min，蘇木精染色5 min，自來(lái)水沖洗5 min；隨后按濃度梯度依次放于乙醇溶液脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，觀(guān)察。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知的人乳癌IL-6和SOCS1陽(yáng)性表達(dá)組織作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.2結(jié)果判定采用二級(jí)計(jì)分法，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（400倍），細(xì)胞漿、細(xì)胞核或間質(zhì)中有明顯棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)，以陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比和細(xì)胞著色程度分別評(píng)估。陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。細(xì)胞著色程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)著色或者整個(gè)背景淡棕色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。以陽(yáng)性細(xì)胞百分比評(píng)分+細(xì)胞著色程度評(píng)分進(jìn)行綜合評(píng)定：結(jié)果≥3分為陽(yáng)性，<3分為陰性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，兩組或多組計(jì)數(shù)資料間的比較采用X²檢驗(yàn)；IL-6和SOCS1表達(dá)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。

2結(jié)果

2.1 IL-6和SOCS1表達(dá)

IL-6在卵巢癌組織中表達(dá)顯著升高，主要表現(xiàn)為卵巢癌細(xì)胞漿及間質(zhì)中出現(xiàn)棕黃或棕褐色顆粒；SOCS1在卵巢癌組織中表達(dá)升高，主要表現(xiàn)為卵巢癌細(xì)胞漿及胞核中出現(xiàn)棕黃或棕褐色顆粒。在卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率分別為71.43%（75/105）、22.50%（9/40）與16.70%（5/30），其中卵巢癌組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常卵巢和良性卵巢腫瘤組織（X²=28.983、28.453，P<0.01），而良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率差異無(wú)顯著性（X²=0.365，P>0.05）。卵巢癌、良性卵巢腫瘤及正常卵巢組織中SOCSl的陽(yáng)性率分別為37.14%（39/105）、15.00%（6/40）與13.30%（4/30），卵巢癌組織中SOCSl的陽(yáng)性表達(dá)率高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織（X²=6.635、6.094，P>0.05），良性卵巢腫瘤組織和正常卵巢組織中SOCS1的陽(yáng)性率差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

2.2卵巢癌中IL-6和SOCS1表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

卵巢癌組織中IL-6陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、腹水有關(guān)（X²=8.451～14.872，P<0.05）；而與腫瘤病理類(lèi)型、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。卵巢癌組織中SOCSl陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)（X²=6.137，P<0.05）；而與病理類(lèi)型、FIGO分期、腹水、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P>0.05）。見(jiàn)表1。

2.3卵巢癌組織中IL-6和SOCS1表達(dá)率相關(guān)性

本文105例卵巢癌組織中，IL-6與SOCS1共陽(yáng)性35例，共陰性26例。Spearman相關(guān)分析表明，IL-6與SOCSl陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)，差異具有顯著性（r=0.297，P<0.05）。

3討論

3.1不同卵巢組織中IL-6和SOCS1表達(dá)的意義

IL-6是迄今為止發(fā)現(xiàn)的功能最為廣泛的細(xì)胞因子之一。近年來(lái)研究顯示，IL-6在多種惡性腫瘤如多發(fā)性骨髓瘤、消化道惡性腫瘤、乳癌、卵巢癌等病人的血清中均有不同程度升高，并已證實(shí)IL-6與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在密切關(guān)系。SCAMBIA等早期便發(fā)現(xiàn)卵巢癌組織中高水平的IL-6與腫瘤進(jìn)程及其體積變化有關(guān)，同時(shí)還降低了卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，縮短了病人的生存時(shí)間。已有研究證明，卵巢癌病人血清中IL-6的水平與疾病分期和預(yù)后呈正相關(guān)，是卵巢癌的獨(dú)立預(yù)后因素。本研究結(jié)果與上述報(bào)道相符。本文結(jié)果表明，卵巢良性腫瘤及正常卵巢組織中IL-6的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于卵巢癌組織，且卵巢癌組織中IL-6陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、FIGO分期、腹水呈正相關(guān)，說(shuō)明卵巢癌惡性程度愈高、分期愈晚、腹水越多，IL-6陽(yáng)性表達(dá)愈強(qiáng)，提示IL-6在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

SOCS家族是體內(nèi)重要的抑制因子家族，它們具有相似的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：中間的SH2結(jié)構(gòu)域，C末端的\"SOCS盒”，N末端為一段可變序列。SOCS蛋白可被IL-6、IL-10、白血病抑制因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、Y-干擾素、生長(zhǎng)激素等多種細(xì)胞因子快速誘導(dǎo)表達(dá)。SOCS1是家族中最早被發(fā)現(xiàn)的因子，研究發(fā)現(xiàn)，SOCS1基因的啟動(dòng)子含有STAT1、STAT3和STAT6的結(jié)合位點(diǎn)，將STAT3基因表達(dá)封閉后，IL-6無(wú)法誘導(dǎo)SOCS1陽(yáng)性表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，卵巢癌組織中SOCS1的表達(dá)高于良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織，且與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)，說(shuō)明SOCS1也是卵巢癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的重要因子，卵巢癌分化越低，SOCS1的表達(dá)越高，發(fā)揮的抑制作用越強(qiáng)。

3.2卵巢癌中IL-6和SOCS1表達(dá)的相關(guān)性

JAK/STAT信號(hào)通路是IL-6下游的重要通路，現(xiàn)已經(jīng)明確，JAK/STAT信號(hào)通路的持續(xù)激活與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展存在密切相關(guān)性。因此，SOCS1的激活和表達(dá)具有潛在的抑瘤作用。YANG等通過(guò)對(duì)51例肝細(xì)胞癌病人的研究發(fā)現(xiàn)，SOCS1基因的啟動(dòng)子處于甲基化狀態(tài)。也有研究顯示，多種惡性腫瘤尤其是血液系統(tǒng)疾病存在SOCS1的啟動(dòng)子甲基化和表達(dá)降低，而SOCS1的過(guò)表達(dá)則可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。SUTHER-LAND等報(bào)道，原發(fā)性卵巢癌病人SOCS1和SOCS2啟動(dòng)子CpG島的甲基化率分別為23%和14%，SOCS3的啟動(dòng)子未發(fā)現(xiàn)被甲基化，實(shí)時(shí)PCR也證實(shí)SOCS1和SOCS2的表達(dá)均低于SOCS3。本文結(jié)果表明，卵巢癌組織中SOCS1與IL-6陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)。然而，SOCS1的陽(yáng)性表達(dá)率低于IL-6，這可能與SOCS1啟動(dòng)子的甲基化有關(guān)，使其表達(dá)降低，而不足以抑制卵巢癌組織中顯著增高的IL-6的作用，從而導(dǎo)致卵巢癌的進(jìn)展、惡化。但此機(jī)制尚待進(jìn)一步驗(yàn)證，這可能為尋找卵巢癌的治療方法提供了新靶點(diǎn)、開(kāi)辟了新思路。