S100A2在多發(fā)性骨骼瘤病人中表達及臨床意義

[摘要]目的探討S100A2在多發(fā)性骨髓瘤（MM）病人骨髓單個核細胞中的表達及臨床意義。方法選取2013年3月-2016年12月在我院初診的MM病人62例，選取同期因單純性貧血治療的35例病人作為對照組。MM病人分別于入院后和4個大療程結(jié)束時，對照組于入院時，采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測骨髓單個核細胞中S100A2的表達。結(jié)果MM病人骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量為1.29±0.12，對照組為2.30±0.17，差異有統(tǒng)計學意義（t=34.127，P<0.01）。MM病人骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量與國際分期系統(tǒng)（ISS）分期、骨質(zhì)破壞和髓外浸潤有關(guān)（t=4.659～50.312，P<0.01）。緩解組MM病人治療前和治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均高于未緩解組，差異有統(tǒng)計學意義（t=5.289、8.559，P<0.01）；兩組病人治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均高于治療前，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.687、5.052，P<0.01）。結(jié)論S100A2在MM病人骨髓單個核細胞中呈低表達，且其表達與MM發(fā)生、進展、浸潤及治療效果有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]多發(fā)性骨髓瘤；S100蛋白質(zhì)類；骨髓

多發(fā)性骨髓瘤（MM）作為起源于骨髓內(nèi)漿細胞的常見血液系統(tǒng)惡性腫瘤，好發(fā)于中老年人群，以漿細胞大量克隆性增殖為主要特點，多數(shù)病人會出現(xiàn)破壞性溶骨病變和（或）骨質(zhì)疏松，嚴重威脅病人生存質(zhì)量甚至生命。目前，MM尚沒有特效的治療手段，隨著新型化療藥物的出現(xiàn)及聯(lián)合化療的應用，MM病人生存質(zhì)量得到很大改善，但多數(shù)病人最終會出現(xiàn)化療耐藥而影響預后。因此，深入探討MM發(fā)病機制并在基因水平尋找新的治療方向已成為臨床研究的重點。S100作為主要的鈣離子結(jié)合蛋白家族亞類，在調(diào)控細胞分化、細胞周期、細胞結(jié)構(gòu)、細胞外基質(zhì)分泌及鈣穩(wěn)態(tài)等過程中發(fā)揮重要作用。S100A2是S100家族重要成員，不僅參與調(diào)控多項生理病理過程，而且在腫瘤發(fā)生及進展中發(fā)揮重要作用。本研究擬檢測MM病人骨髓單個核細胞中S100A2的表達，分析其與MM臨床病理特征之間的關(guān)系，以期為MM發(fā)病機制研究提供參考資料。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年3月-2016年12月在我院初診的MM病人62例，男37例，女25例；年齡38～81歲，平均（60.6±8.7）歲。MM均符合《中國多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2013年修訂）》中的診斷標準。按照國際分期系統(tǒng)（ISS）標準分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期17例，Ⅲ期31例；免疫分型IgG型31例，IgA型17例，輕鏈型14例。選取同期因單純性貧血治療的35例病人作為對照組，均排除血液系統(tǒng)腫瘤，其中男21例，女14例；年齡36～79歲，平均（59.2±8.3）歲。兩組病人性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準，病人或家屬均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1治療方法所有MM病人均接受補充營養(yǎng)、糾正水電解質(zhì)紊亂等常規(guī)治療，并進行VAD方案化療：長春新堿0.4 mg+多柔比星9 mg/㎡，連續(xù)靜滴4 d，地塞米松40 mg/d口服，4 d作為1個小療程，28 d作為1個大療程。4個大療程后，采用國際骨髓瘤工作組（IMWG）制定的療效標準將病人分為緩解組（達到部分緩解及以上）和未緩解組（未達到部分緩解）。

1.2.2骨髓單個核細胞中S100A2表達的實時熒光定量PCR檢測

MM病人分別于入院后和4個大療程結(jié)束時，對照組于入院時，分別采集其骨髓2 mL，置于EDTA抗凝管中，加人PBS液1～2 mL稀釋，混合均勻，將等量淋巴細胞分離液（美國TBD公司）緩慢加人，靜置后收集單個核細胞，保存于一80℃冰箱備用。取單個核細胞，室溫下解凍，加入細胞裂解液，用Trizol總RNA提取試劑盒（美國Invitrogen公司）提取單個核細胞中總RNA，洗滌后電泳，應用紫外線分光光度計檢測總RNA純度，以A₂₀₀/A₂₈₀在1.80～2.30內(nèi)為合格。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（荷蘭Qiagen公司）說明書將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。在冰上配制反應體系，每個樣品設3個平行反應復孔。應用PCR試劑盒（荷蘭Qiagen公司）進行引物擴增。S100A2引物序列：上游為5'-GTGCTGAAG-TGTTGACTGAAGGG-3'，下游為5'-GGCAGGAGAATGGCGTGAA-3'；GAPDH引物序列：5'-CTCTCTGCTCCTCCTGTTCGAC-3'。PCR反應條件：94℃預變性5 min；94℃30 s，60℃30 s，76℃30 s，共循環(huán)36次。以GAPDH為內(nèi)參照，采用2方法計算兩組骨髓單個核細胞中S100A2的相對表達量。

1.2.3統(tǒng)計學處理應用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料數(shù)據(jù)以x±s表示，兩組間比較采用t檢驗，同組病人治療前后比較采用配對t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1MM組和對照組骨髓單個核細胞中S100A2表達比較

MM病人骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量為1.29±0.12，對照組為2.30±0.17，差異有統(tǒng)計學意義（t=34.127，P<0.01）。

2.2 MM病人骨髓單個核細胞中S100A2表達與臨床病理特征的關(guān)系

MM骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量與病人年齡、性別、免疫分型、免疫表型無關(guān)（P>0.05），而與ISS分期、骨質(zhì)破壞和髓外浸潤有關(guān)（t=4.659～50.312，Pd0.01）。見表1。

2.3不同療效MM病人治療前后骨髓單個核細胞中S100A2表達變化

緩解組MM病人治療前和治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均高于未緩解組，差異有顯著性（t=5.289、8.559，P<0.01）；兩組病人治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均高于治療前，差異有統(tǒng)計學意義（t=9.687、5.052，P%0.01）。見表2。

3討論

MM為最常見的發(fā)生于骨的淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，其發(fā)病機制尚未完全清楚。研究表明，MM病人中超過90%發(fā)生溶骨性骨疾病，常伴有高鈣血癥及骨相關(guān)事件。S100蛋白家族是重要的鈣結(jié)合蛋白，與鈣離子有高度的親和力，可通過與鈣離子結(jié)合，在細胞生長、代謝、遷移等多種生物學功能中發(fā)揮重要作用，同時，與多種惡性腫瘤的發(fā)生及進展關(guān)系密切。有研究表明，S100A6在MM病人骨髓組織中呈高表達，與MM發(fā)生、進展及髓外轉(zhuǎn)移有關(guān)。S100A2也是S100蛋白家族重要成員，由兩個EF-手型結(jié)構(gòu)組成，可與鈣離子結(jié)合而參與一系列生理病理過程，在多種惡性腫瘤組織中表達異常，且與腫瘤增殖、分化、浸潤、轉(zhuǎn)移及預后密切相關(guān)。S100A2在調(diào)控腫瘤發(fā)生時具有兩面性，在肝癌、胃癌等惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌因子功能，而在胰腺癌、肺癌等惡性腫瘤中起促癌因子作用。本研究結(jié)果顯示，MM病人骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量顯著低于對照組，說明S100A2在MM中呈低表達，提示S100A2可能發(fā)揮抑癌因子功能而參與MM發(fā)病過程。

本文研究結(jié)果顯示，MM病人骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量與ISS分期有關(guān)，隨著ISS分期增加S100A2表達逐漸降低，而ISS分期是反映MM病人病情進展的主要指標，這進一步說明S100A可能作為抑癌基因參與了MM進展過程。本文結(jié)果顯示，發(fā)生骨質(zhì)破壞的MM病人骨髓單個核細胞中S100A2表達量較無骨質(zhì)破壞病人降低，說明S100A2與MM發(fā)生骨質(zhì)破壞有關(guān)。MM作為一種骨髓中漿細胞增生異常所致疾病，一般情況下病變僅局限在骨髓，但少數(shù)情況下會累及軟組織，發(fā)生髓外病變。有研究表明，S100A2在腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。本研究結(jié)果顯示，髓外浸潤病人骨髓單個核細胞中S100A2表達量較無髓外浸潤病人降低，說明S100A2與MM病人髓外浸潤密切相關(guān)，可能參與了髓外病變的發(fā)生。本研究結(jié)果還顯示，緩解組MM病人治療前和治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均顯著高于未緩解組，兩組病人治療后骨髓單個核細胞中S100A2 mRNA相對表達量均顯著高于治療前，說明骨髓單個核細胞中S100A2表達與病人治療效果密切相關(guān)，有望成為指導治療的生物學指標。

綜上所述，S100A2在MM病人骨髓單個核細胞中呈低表達，且其表達與MM發(fā)生、進展、浸潤及治療效果有關(guān)，S100A2有望成為評估MM病人病情及治療效果新的生物學指標。