樁蛋白和踝蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌組織表達

[摘要]

目的探討樁蛋白和踝蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌組織表達及臨床意義。方法

采用免疫組化法檢測兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌中樁蛋白和踝蛋白的表達。結(jié)果樁蛋白和踝蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌組織中均呈高表達，但兒童及青少年病人樁蛋白的表達明顯高于成年病人（X²=3.894，P<0.05）。樁蛋白和踝蛋白在甲狀腺癌中的表達與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤程度顯著相關(guān)（X²=4.181～7.479，P<0.05），而與病人性別和腫瘤組織類型無關(guān)（P>0.05）。兒童及青少年甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率顯著高于成人甲狀腺癌（X²=16.272，P<0.05）。結(jié)論樁蛋白和踝蛋白在甲狀腺癌組織中呈高表達，兩種蛋白在甲狀腺癌組織中的表達與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤程度密切相關(guān)，但兒童及青少年甲狀腺癌更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，這可為兒童及青少年甲狀腺癌病人的診療和管理提供參考。

[關(guān)鍵詞]甲狀腺腫瘤；兒童；青少年；樁蛋白；踝蛋白；腫瘤轉(zhuǎn)移

兒童及青少年甲狀腺癌具有高淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率、高復(fù)發(fā)率和低死亡率的特點，易發(fā)生局部侵襲和區(qū)域性淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與成人甲狀腺癌相比表現(xiàn)出不同的生物學特點。行甲狀腺全切或近全切除術(shù)、淋巴結(jié)清掃術(shù)以及術(shù)后進行I輔助治療能夠明顯降低病人的遠期病死率。兒童及青少年甲狀腺癌死亡風險低，但復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移風險較高，有效的甲狀腺癌腫瘤標志物檢測可以規(guī)范兒童及青少年甲狀腺癌的治療、為其臨床評估提供參考。最新研究表明，樁蛋白和踝蛋白兩種細胞骨架蛋白在成人甲狀腺癌癌細胞黏附和遷移中可能發(fā)揮重要作用。但國內(nèi)外相關(guān)研究中未見兒童及青少年甲狀腺癌病人樁蛋白和踝蛋白表達的報道。因此，本研究觀察了樁蛋白和踝蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌中的表達，并分析其與兒童及青少年甲狀腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期為兒童及青少年甲狀腺癌病人的診療和管理提供一定參考。

1材料和方法

1.1標本來源

收集2002-2016年青島大學附屬醫(yī)院病理科存檔的甲狀腺癌手術(shù)石蠟標本90例，其中兒童及青少年甲狀腺癌30例，成人甲狀腺癌60例。兒童及青少年甲狀腺癌中，乳頭狀癌25例，濾泡狀癌5例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例；病人平均年齡14.31歲（6～18歲）。成人甲狀腺癌60例均為乳頭狀癌；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移23例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例；病人平均年齡54.82歲（45～60歲）。石蠟標本以4 tim厚連續(xù)切片，4℃冰箱保存。研究獲得醫(yī)院倫理道德委員會的批準。

1.2實驗方法

采用免疫組化SP法測定切片標本中樁蛋白和踝蛋白的表達水平。兔抗人樁蛋白和踝蛋白多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，通用型SP免疫組化超敏試劑盒和DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。按照試劑盒說明書進行操作，以PBS代替一抗作為陰性對照。

由兩位技術(shù)人員采用雙盲法在高倍顯微鏡下觀察切片，每張切片隨機選取3個視野計算陽性細胞數(shù)，根據(jù)細胞漿染色程度和染色細胞所占百分比進行評分，采用半定量積分法綜合判斷結(jié)果。

1.3統(tǒng)計學處理

采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料組間比較采用X²檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1樁蛋白和踝蛋白在不同年齡病人甲狀腺癌組織中的表達

樁蛋白和踝蛋白均陽性表達于甲狀腺癌細胞的細胞膜和（或）細胞質(zhì)，呈黃色、棕黃色或黃褐色。兩種蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌組織中均呈強陽性表達，但兒童及青少年病人甲狀腺癌組織中樁蛋白表達明顯高于成年病人，差異具有統(tǒng)計學意義（X²=3.894，P<0.05）。見表1。

2.2樁蛋白和踝蛋白表達與甲狀腺癌生物學特征的關(guān)系

兩種蛋白在甲狀腺癌組織中的表達均與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤的浸潤程度顯著相關(guān)（X²=4.181～7.479，P<0.05），而與病人性別和腫瘤組織類型無關(guān)（P>0.05）。見表1。

2.3兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌生物學特征的比較

兒童及青少年甲狀腺癌病人的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為83.33%，顯著高于成人甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率（38.33%），差異具有統(tǒng)計學意義（X²=16.272，P<0.05）。兒童及青少年甲狀腺癌的包膜外浸潤率為30.00%，成人甲狀腺癌為40.00%，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

3討論

兒童及青少年甲狀腺癌是臨床上少見的頭頸部惡性腫瘤，與成人甲狀腺癌相比，具有更高的侵襲性，更易發(fā)生包膜外侵和局部組織的浸潤。目前，兒童及青少年甲狀腺癌的治療多參考成人甲狀腺癌，但由于其生物學特點與成人具有顯著差異，故臨床上會存在過度治療或者治療不足等問題。隨著腫瘤研究在分子水平和蛋白水平的拓展，降鈣素、降鈣素基因相關(guān)肽、甲狀腺球蛋白、促甲狀腺激素受體等諸多腫瘤標志物的應(yīng)用已經(jīng)被證明在成人甲狀腺癌的臨床診治中發(fā)揮重要作用。然而，目前國內(nèi)外研究中卻少見針對兒童及青少年甲狀腺癌的腫瘤標志物，且所涉及腫瘤標志物的特異性、敏感性和準確性缺乏明確的實驗證據(jù)支持。最近的生物醫(yī)學研究表明，樁蛋白和踝蛋白兩種細胞骨架蛋白在成人甲狀腺癌癌細胞黏附和遷移中可能發(fā)揮重要作用，然而在兒童及青少年甲狀腺癌中卻未有相關(guān)的研究報道。

樁蛋白主要位于細胞骨架上的黏著斑，是一種相對分子質(zhì)量為6.5萬～7.0萬的磷酸蛋白。由于樁蛋白可以與v-Src蛋白、v-Crk蛋白和BC/ABL癌性融合蛋白等多種致瘤性蛋白結(jié)合，擾亂甚至誤導正常黏附和控制細胞增殖所需的生長因子信號級聯(lián)，使得腫瘤細胞和非腫瘤細胞之間的相互黏附力增強，從而使腫瘤細胞更易發(fā)生遷徙和轉(zhuǎn)移。研究表明，樁蛋白在成人甲狀腺癌、乳癌、肺癌等惡性腫瘤基因轉(zhuǎn)化過程中均表達異常，骨架蛋白上的黏著斑與癌蛋白發(fā)生激酶磷酸化，進而參與了腫瘤細胞活動。因此，樁蛋白的表達異常很有可能是腫瘤惡性轉(zhuǎn)化的早期標志。本文研究結(jié)果顯示，樁蛋白在兒童及青少年甲狀腺癌和成人甲狀腺癌組織中均呈強陽性表達，與有關(guān)文獻的報道相一致。并且兒童及青少年病人樁蛋白的表達明顯高于成年病人，提示樁蛋白參與了兒童及青少年甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過程。另外，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和包膜外侵的甲狀腺癌組織的樁蛋白表達陽性率顯著高于未有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和包膜外侵組，提示樁蛋白可能促進了甲狀腺癌細胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和侵襲活動。

踝蛋白是首個被發(fā)現(xiàn)的與整合素結(jié)合的細胞骨架蛋白，其相對分子質(zhì)量為27.0萬（包含2451個氨基酸）。研究表明，踝蛋白是成纖維細胞活化蛋白最主要的成分，連接整合素與肌動蛋白，同時連接多種黏附因子，在整合素介導的細胞黏附、遷移、增殖和整合素活化等過程中起著關(guān)鍵作用。相關(guān)研究表明，踝蛋白參與了成人甲狀腺癌、原發(fā)性肝癌、結(jié)直腸癌、食管癌等惡性腫瘤的局部侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移活動。本文研究結(jié)果顯示，踝蛋白在成人甲狀腺癌和兒童及青少年甲狀腺癌組織中均呈高表達，這與有關(guān)文獻報道的成人甲狀腺癌踝蛋白的高表達較為一致，提示踝蛋白參與了甲狀腺癌的發(fā)生和發(fā)展。另外，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和包膜外侵的甲狀腺癌組織的踝蛋白表達陽性率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和包膜外侵組。上述結(jié)果提示，踝蛋白可能通過整合素、成纖維細胞活化蛋白以及其他骨架蛋白的信息傳導，調(diào)節(jié)了甲狀腺癌的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移活動。

兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌相比，具有更高的侵襲性，更易發(fā)生包膜外侵和鄰近組織的浸潤，晚期甚至累及氣管、喉返神經(jīng)、上段食管及咽喉部組織。有研究結(jié)果顯示，兒童及青少年甲狀腺癌更容易發(fā)生頸部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移甚至遠處肺轉(zhuǎn)移。本文研究結(jié)果也表明，兒童及青少年甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于成人甲狀腺癌。然而，兒童及青少年甲狀腺癌與成人甲狀腺癌的包膜外侵率相近，兩組比較差異無統(tǒng)計學意義。分析其原因，可能與體檢發(fā)現(xiàn)惡性結(jié)節(jié)較早、及時行手術(shù)治療而使兒童及青少年甲狀腺癌沒有進展為晚期甲狀腺癌有關(guān)。

綜上所述，兒童及青少年甲狀腺癌病人樁蛋白和踝蛋白的表達與腫瘤浸潤程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且兒童及青少年病人樁蛋白的表達明顯高于成年病人，這可為兒童及青少年甲狀腺癌的診斷、治療以及預(yù)后管理等提供指導。