Runx3、p27、cyclinD1在食管癌細胞及組織中的表達與意義

季偉 汪曉鶯

食管癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在全球所有惡性腫瘤中分別占第八位和第六位，而在我國其發(fā)病率和死亡率均位居第四位。我國以鱗癌為主（歐美以腺癌為主），死亡率高，預(yù)后較差，因此研究與食管癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記物，并探索其潛在的機制，對食管癌的早期診斷和預(yù)后判斷將有重要意義[1-3]。

1 臨床資料與方法

1.1 臨床資料

選取2015年1月—2016年12月我院診治的100例食管癌患者作為研究對象，所有患者均未采用放療、化療、免疫治療。其中男性患者61例，女性患者39例，年齡32～68歲，平均年齡（59.2±6.3）歲；同時選擇20例同期食管癌旁正常食管上皮細胞組織（距離腫瘤組織≥5 cm，經(jīng)病理檢查無腫瘤細胞浸潤）作為對照。在體實驗分為兩組：正常癌旁組和食管癌組，分別檢測相應(yīng)指標(biāo)。離體實驗分為三組：對照組、空轉(zhuǎn)組和Runx3高表達組，分別檢測相應(yīng)指標(biāo)。

1.2 方法

采用免疫組化和western blot檢測Runx3、p27、cyclinD1在食管癌組織中的表達水平，分析Runx3、p27、cyclinD1三種基因在食管癌組織中表達的相關(guān)性[4]。采用人食管癌細胞系Ec-9706構(gòu)建Runx3高表達穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞，檢測Runx3高表達對p27及cyclinD1表達的影響，同時觀察Runx3高表達對Ec-9706細胞增殖和凋亡的影響。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用GraphPad Prism 5.0分析各組計量資料，計量資料以（x-±s）表示。ANOVA方法進行組間變異度分析，兩兩比較采用t檢驗；相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，P＜0.05，為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Runx3，p27及cyclinD1在食管癌及癌旁組織中的表達

收集100例食管癌患者腫瘤組織及相應(yīng)癌旁組織，采用免疫組化檢測Runx3，p27及cyclinD1的表達情況。實驗結(jié)果顯示，Runx3，p27在食管癌組織中表達水平低于癌旁組織（t=4.172，P=0.014 0），cyclinD1在食管癌組織中表達水平高于癌旁組織（P＜0.05）。見圖1。

2.2 Runx3高表達Ec-9076細胞的增殖和凋亡分析

采用MTT檢測三組細胞的活力，實驗結(jié)果顯示，當(dāng)Runx3高表達時，Ec-9706細胞活力下降（t=4.035，P=0.006 8）。當(dāng)Runx3高表達時，Ec-9706細胞凋亡增加。因此Runx3高表達能抑制食管癌細胞的增殖，促進細胞凋亡。見圖2。

圖1 免疫組化檢測Runx3，p27及cyclinD1在食管癌及癌旁組織中的表達水平

圖2 Runx3高表達對Ec-9706細胞增殖和凋亡的影響

3 討論

近些年來，食管癌逐漸成為臨床常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率也在逐年升高[1-5]。腫瘤的發(fā)生發(fā)展離不開腫瘤相關(guān)基因的表達，主要包括促癌基因和抑癌基因，這兩種基因表達水平的改變均能夠影響腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。Runx3參與了食管癌的發(fā)生發(fā)展，與食管癌切除部分的邊緣組織上的或發(fā)生良性病變的組織上的普通鱗狀細胞相比，食管癌鱗狀細胞中的Runx3的表達出現(xiàn)下降，并且Runx3 mRNA表達的減少與其啟動子的異常甲基化相關(guān)（P＜0.001），而在食管腺癌腺體中也發(fā)現(xiàn)了相似的結(jié)果[6-9]。更為重要的是，在易發(fā)展為食管腺癌的Barrett食管炎患者中也發(fā)現(xiàn)了Runx3啟動子的異常甲基化，并且Runx3的這種失活形式在組織未出現(xiàn)癌性病變時就已出現(xiàn)[10]。

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