Gab2在宮頸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張燕 成龍 段文麗 劉霄 周航

[摘要]目的 探討Gab2在宮頸癌組織中的表達(dá)情況與臨床病理特征的相關(guān)性。方法 隨機(jī)選取遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科保存的2012年1月～2013年12月經(jīng)病理確診的80例宮頸癌組織標(biāo)本及20例正常宮頸組織標(biāo)本，分別采用免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法檢測Gab2在宮頸癌組織及正常宮頸組織中的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 Gab2蛋白在80例宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為58.75%（47/80），而在20例正常宮頸組織中僅3例呈弱陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為0.00%，兩組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。在宮頸癌組織中，Gab2蛋白的表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），與年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級及FIGO分期無顯著相關(guān)性（P>0.05）。Gab2高表達(dá)患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率顯著高于Gab2低表達(dá)患者（P=0.001）。結(jié)論 Gab2可能在宮頸癌發(fā)生和進(jìn)展中起著重要作用，可能具有作為宮頸癌預(yù)后判斷標(biāo)志物的潛能。

[關(guān)鍵詞]宮頸癌；Gab2；免疫組織化學(xué)；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

[中圖分類號] R737.33 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）2（b）-0008-03

Expression and clinical significance of Gab2 in cervical cancer tissue

ZHANG Yan CHENG Long DUAN Wen-li LIU Xiao ZHOU Hang

Department of Abdominal Oncology，Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Guizhou Province，Zunyi 563000，China

[Abstract]Objective To investigate the correlation between the expression of Gab2 in cervical cancer tissue and the clinical pathological features.Methods 80 cervical cancer specimens definitely diagnosed by pathology from January 2012 to December 2013 and 20 normal cervical tissue specimens which were stored in our Department of Pathology were randomly selected in our hospital.The immunohistochemical method was used to detect the expression of Gab2 in cervical cancer tissues and normal cervical tissues，and was statistically analyzed together with the clinical and pathological data.Results The positive expression rate of Gab2 in 80 cervical cancer tissues was 58.75% （47/80），and in the 20 normal cervical tissues，only 3 cases were presented with weak positive expression.The rate of positive expression was 0%，which was displayed a statistical difference （P<0.05）.The expression level of Gab2 protein in cervical cancer tissues was positively correlated with lymph node metastasis （P<0.05），but didnt present with great correlation with age，size of tumor，histological grading or FIGO stage （P>0.05）.The recurrence and metastasis rate in patients with high Gab2 expression was significantly higher than that of low expression of Gab2 （P=0.001）.Conclusion Gab2 may play an important role in the occurrence and progression of cervical cancer，and may be considered as a potential for prognostic marker of cervical cancer.

[Key words]Cervical cancer；Gab2；Immunohistochemistry；Lymph node metastasis

宮頸癌（cervical cancer，CC）在我國女性生殖道惡性腫瘤中發(fā)病率位居第一[1]，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移發(fā)生率高、局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是治療失敗的主要原因，嚴(yán)重影響著女性的身心健康。Gab2（Grb2-associated binding protein 2，Gab2）屬于Gabs蛋白家族（Grb2-associated binder family proteins）的多位點(diǎn)銜接蛋白[2]，具有潛在的原癌基因特性，在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中有著重要作用，如在肺癌、乳腺癌及結(jié)直腸癌等腫瘤中顯著表達(dá)[3-5]。然而，有關(guān)Gab2蛋白在宮頸癌中的表達(dá)模式和臨床意義尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過免疫組織化學(xué)法檢測Gab2在宮頸癌及正常宮頸組織中的表達(dá)水平及其與臨床病理特征的關(guān)系，評估Gab2在宮頸癌預(yù)后判斷標(biāo)志物的潛在臨床價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1材料

選取遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科保存的2012年1月～2013年12月經(jīng)病理確診的80例宮頸癌組織標(biāo)本，取材前均無化療或放療病史，年齡33～74歲；病理類型：72例鱗癌，6例腺癌，2例其他類型癌（包括小細(xì)胞癌1例，腺鱗癌1例）；組織學(xué)分級：低中分化48例，高分化32例；臨床分期：按FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期40例，Ⅲ～Ⅳ期40例；其中42例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，38例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。選取同期的20例正常宮頸組織標(biāo)本作為對照組，年齡31～67歲。上述蠟塊經(jīng)4 μm厚度連續(xù)切片，分別進(jìn)行免疫組化染色。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

應(yīng)用免疫組化PV-9000二步法檢測Gab2的表達(dá)情況。HRP標(biāo)記的山羊抗兔多克隆抗體、免疫組化試劑盒PV-9000和DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，Gab2兔抗人單克隆抗體購自O(shè)rigene公司。實(shí)驗(yàn)步驟依照PV-9000免疫組化試劑盒說明書嚴(yán)格操作，采用PBS液替代一抗做陰性對照。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

Gab2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，故細(xì)胞質(zhì)染色呈黃色或棕褐色為Gab2蛋白陽性表達(dá)。每張免疫組化切片隨機(jī)選擇3個(gè)不同的視野（×200）觀察，并判讀陽性表達(dá)強(qiáng)度和陽性率。染色結(jié)果采用半定量分析方法，以染色強(qiáng)度結(jié)合陽性細(xì)胞數(shù)百分比進(jìn)行評分。染色強(qiáng)度以多數(shù)細(xì)胞呈現(xiàn)的染色強(qiáng)度并減去背景著色計(jì)分，無明顯著色為0分，輕微為1分，中度為2分，重度為3分。陽性細(xì)胞百分比：0～5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～50%為2分，>50%～75%為3分，>75%為4分。對每個(gè)視野均進(jìn)行染色強(qiáng)度計(jì)分與陽性細(xì)胞百分比評分，最終評分以陽性細(xì)胞百分比與染色強(qiáng)度的加和：0分為陰性（-），>0～<4分為弱陽性（+），4～6分為中度陽性（++），>6～7分為強(qiáng)陽性（+++），-、+視為低表達(dá)，++、+++視為高表達(dá)。陽性率=陽性病例數(shù)/總病例數(shù)×100%。

1.4隨訪

80例宮頸癌患者通過規(guī)范治療后，均按宮頸癌規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)隨訪時(shí)間進(jìn)行定期隨訪，通過門診或電話隨訪，了解其復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移情況，隨訪內(nèi)容包括臨床癥狀、婦科檢查、CT或MRI等，隨訪截止時(shí)間為2017年5月。其中失訪5例，隨訪率為93.75%。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1免疫組織化學(xué)檢測Gab2蛋白在宮頸癌組織及正常宮頸組織中的表達(dá)情況

Gab2蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞核中未見明顯表達(dá)。檢測的20例正常宮頸組織中，僅3例呈弱表達(dá)，其余均為陰性。80例宮頸癌組織中，陽性47例，陰性33例，陽性率為58.75%，其中鱗癌、腺癌、其他類型癌Gab2的陽性表達(dá)率分別為58.33%、66.67%、50.00%，均顯著高于正常對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但三組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1、圖1）。

2.2 Gab2在宮頸癌組織中的表達(dá)情況與其臨床病理特征的相關(guān)性

Gab2蛋白在宮頸癌中的表達(dá)水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），而與年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級、FIGO分期無明顯相關(guān)性（P>0.05）（表2）。

2.3 Gab2蛋白表達(dá)水平與宮頸癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

所有患者隨訪時(shí)間均>3年。47例Gab2高表達(dá)的宮頸癌患者中，除2例失訪外，24例發(fā)生局部盆腔復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率51.06%；而33例Gab2低表達(dá)患者中，3例失訪，5例出現(xiàn)了局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率15.16%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。

3討論

目前研究提示，Gab2是一個(gè)重要的癌癥相關(guān)基因[6]，其定位于11q13.4～q13.5，蛋白分子量為97～100 kD，包含多個(gè)特殊結(jié)構(gòu)，如N端的PH結(jié)構(gòu)域、中間富含脯氨酸的PRD結(jié)構(gòu)域及C-端的多個(gè)酪氨酸殘基序列[7]。其中PH結(jié)構(gòu)域能識別如磷酸肌醇類物質(zhì)的膜成分，參與Gab2的膜定位；富含脯氨酸的PRD和酪氨酸殘基序列可與SH-3和SH-2結(jié)構(gòu)域結(jié)合，在生物活性分子刺激下，Gab2被酪氨酸磷酸化激活，通過與SHP-2、PI3K等信號分子的相互作用而激活各種信號通路，如經(jīng)典的PI3K/AKT、SHP2/RAS/ERK通路[8-10]。近年來的研究提示，Gab2蛋白在多種惡性腫瘤中存在過表達(dá)[11]，包括乳腺癌[4]、急性骨髓性白血病[12]、肺癌[3]、卵巢癌[13]、胃癌[14]、結(jié)腸直腸癌[5]、黑色素瘤[15]和膠質(zhì)瘤[16]等。上述研究顯示，Gab2過表達(dá)與腫瘤的惡性程度有關(guān)，如Gab2蛋白能促進(jìn)HER-2誘導(dǎo)的乳腺癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移[4，17]；Gab2通過上調(diào)E-ca的表達(dá)，激活PI3K/Zeb1通路從而增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞的遷移及侵襲能力[13]；而在結(jié)直腸癌中，Gab2可通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）促進(jìn)結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)移[5]等。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，80例宮頸癌組織中，Gab2表達(dá)的陽性率為58.75%，而正常宮頸組織中僅3例呈弱陽性表達(dá)，兩組結(jié)果比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示Gab2在宮頸癌中存在過表達(dá)，但在鱗癌、腺癌、其他類型癌三組中比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。因本實(shí)驗(yàn)腺癌及其他類型癌樣本量較少，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果尚需進(jìn)一步大樣本證實(shí)。另外，在宮頸癌組織中，Gab2的表達(dá)水平與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（P<0.05），而與年齡、腫瘤大小、組織學(xué)分級、FIGO分期無顯著相關(guān)性（P>0.05）。隨訪結(jié)果顯示，Gab2高表達(dá)患者的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率顯著高于Gab2低表達(dá)的患者（P=0.001），提示Gab2過表達(dá)可能預(yù)示著腫瘤惡性程度高、易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移、預(yù)后差等，可能具有作為宮頸癌預(yù)后判斷標(biāo)志物的潛能。

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（收稿日期：2017-09-20 本文編輯：祁海文）