血液病毒核酸集中化檢測(cè)的實(shí)踐和體會(huì)

石慶秋，羅必泰，謝家日，林丹英

(南寧中心血站檢驗(yàn)科，廣西 南寧 530003)

為提高血液安全水平，進(jìn)一步縮短“窗口期”，降低輸血傳播疾病風(fēng)險(xiǎn)。2013年，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委在 《全面推進(jìn)血站核酸檢測(cè)工作實(shí)施方案》中提出，“積極推進(jìn)血站核酸檢測(cè)工作，提高血站實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力。到2015年，血液篩查核酸檢測(cè)基本覆蓋全國(guó)?！庇捎趶V西部分血站尚未開(kāi)展核酸檢測(cè)，在廣西衛(wèi)計(jì)委的協(xié)調(diào)下，南寧中心血站自2015年12月底承擔(dān)了崇左市、北海市和防城港市中心血站血液標(biāo)本的核酸檢測(cè)工作，實(shí)現(xiàn)了核酸檢測(cè)全覆蓋。本文通過(guò)對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)的分析，了解廣西西南部地區(qū)感染性輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，以及核酸集中化檢測(cè)對(duì)提高實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和血液安全的意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 來(lái)自于2015年12月至2017年1月廣西崇左市、北海市、防城港市無(wú)償獻(xiàn)血者的核酸檢測(cè)標(biāo)本。獻(xiàn)血者均符合 《獻(xiàn)血者健康檢查要求》。使用EDTA-K2抗凝帶分離膠的真空采血管留取血樣5ml。標(biāo)本均為兩遍ELISA檢測(cè)后HBsAg、抗-HCV、HIV抗原-抗體無(wú)反應(yīng)性標(biāo)本。

1.2 標(biāo)本采集和運(yùn)送 核酸標(biāo)本采集后，在4h內(nèi)離心，標(biāo)本需要冰凍運(yùn)輸或保存的，離心后24h內(nèi)在-40℃～-18℃凍存。標(biāo)本放置于冷藏儲(chǔ)存箱內(nèi)運(yùn)送，冰凍標(biāo)本運(yùn)輸溫度在-40℃～10℃，如果運(yùn)輸時(shí)間不超過(guò)8h，采用2℃～10℃運(yùn)輸。標(biāo)本到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后72h內(nèi)完成檢測(cè)，不可再次凍融。

1.3 儀器與試劑 羅氏Cobas s201全自動(dòng)血液核酸篩查平臺(tái)：Hamilton Microlab Star全自動(dòng)混樣儀，Cobas s201 AmpliPrep核酸提取儀，Cobas s201 TaqMan Analyzer核酸擴(kuò)增檢測(cè)儀；科華核酸血液檢測(cè)系統(tǒng)：STAR核酸分離純化儀、ABI 7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀；核酸檢測(cè)試劑盒：Cobas TaqScreen MPX 2.0 test、科華核酸檢測(cè)試劑盒。

1.4 檢測(cè)方法和質(zhì)量控制 采用羅氏6人份混樣、科華8人份混樣模式，初混無(wú)反應(yīng)性的標(biāo)本，判為檢測(cè)陰性；系統(tǒng)檢出的反應(yīng)性混樣標(biāo)本繼續(xù)進(jìn)行拆分檢測(cè)，拆分試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)性判定為NAT陰性，拆分試驗(yàn)呈反應(yīng)性標(biāo)本判為陽(yáng)性。每批次標(biāo)本檢測(cè)均有陰陽(yáng)性對(duì)照品和室內(nèi)質(zhì)控品(HBV DNA、HCV RNA、HIV-1 RNA)來(lái)控制質(zhì)量和試驗(yàn)有效性。本實(shí)驗(yàn)室每年參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，總成績(jī)均合格。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)行x列表資料多個(gè)樣本率的比較，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2015年12月至2017年1月，共檢測(cè)南寧、崇左市、北海市和防城港市中心血站ELISA無(wú)反應(yīng)性核酸標(biāo)本174127例，263例標(biāo)本拆分結(jié)果為陽(yáng)性，且均為HBV DNA陽(yáng)性，陽(yáng)性率為1.51‰。各中心血站核酸標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率非常接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.35，P＞0.05），見(jiàn)表 1。

表1 血液標(biāo)本核酸集中化檢測(cè)結(jié)果

3 討論

本次血液集中化檢測(cè)工作共檢測(cè)了核酸標(biāo)本174127例，其中3家委托血站送檢標(biāo)本為38444例，占比22.08%。從表1的數(shù)據(jù)可以看出，各中心血站核酸標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率非常接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），總陽(yáng)性率為1.51‰，高于上海（0.63‰）[1]、鄭州（0.57‰）[2]和新疆地區(qū)（1.10‰）[3]，低于南昌（2.44‰）[4]、新余(1.60‰）[5]和杭州地區(qū)（2.00‰）[6]。4家血站篩查出的陽(yáng)性標(biāo)本均為HBV DNA陽(yáng)性（1.51‰），高于國(guó)內(nèi)外一些地區(qū)報(bào)道[7-10]，未檢出HCV RNA和HIV RNA陽(yáng)性，提示廣西西南部地區(qū)是HBV感染相對(duì)的高流行區(qū)?！按翱谄凇?、病毒亞型及變異、隱匿性HBV感染等原因是影響血液安全的主要因素[11]，經(jīng)酶免4項(xiàng)和ALT篩查陰性的血液仍然存在一定的輸血感染殘余風(fēng)險(xiǎn)。核酸檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于血液篩查，特異性好、靈敏度高，可將HBV、HCV、HIV病毒檢測(cè)的 “窗口期”分別縮短約 50%、80%、50%[12]，還能檢出病毒抗體或抗原檢測(cè)陰性的慢性或隱匿攜帶者，以及變異株病毒感染者[13]。實(shí)施集中化檢測(cè)后，全面開(kāi)展血液核酸檢測(cè)，最大限度的保障了集中化檢測(cè)區(qū)域內(nèi)所有血站的血液質(zhì)量安全。

集中化檢測(cè)有利于整合資源，降低行政管理和血液檢測(cè)成本，同時(shí)提高血液檢測(cè)水平[14]。廣西西南地區(qū)部分血站全年檢測(cè)標(biāo)本量少，配備的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員數(shù)量也少，由于核酸檢測(cè)設(shè)備較昂貴，核酸試劑成本高，對(duì)檢測(cè)技術(shù)要求高，若自行檢測(cè)費(fèi)時(shí)費(fèi)力。而通過(guò)集中化檢測(cè)，由南寧中心血站承擔(dān)周邊血站的核酸檢測(cè)工作，充分發(fā)揮核酸實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)資源優(yōu)勢(shì)，可以減少更多的設(shè)備、檢測(cè)試劑和人力資源投入，同時(shí)，可以提高血液檢測(cè)規(guī)范化、系統(tǒng)化和科學(xué)化水平，更好的保證檢測(cè)質(zhì)量。

血液集中化檢測(cè)工作中標(biāo)本采集、運(yùn)輸、接收、報(bào)告發(fā)放等每個(gè)工作環(huán)節(jié)的疏漏都可能影響血液檢測(cè)質(zhì)量。經(jīng)過(guò)1年多的實(shí)踐和探索，針對(duì)各環(huán)節(jié)出現(xiàn)的問(wèn)題采取了必要措施，使集中化檢測(cè)工作模式逐步成熟：⑴標(biāo)本采集、保存和運(yùn)輸不當(dāng)導(dǎo)致標(biāo)本留樣不足、抗凝不良、溶血甚至試管破裂的情況時(shí)有發(fā)生。血液標(biāo)本質(zhì)量、留取和標(biāo)識(shí)的正確性是保證血液質(zhì)量和血液安全的關(guān)鍵，直接影響血液的檢測(cè)結(jié)果和血液的可追溯性[15]。要解決這些問(wèn)題，首先各血站要完善質(zhì)量管理體系文件，統(tǒng)一規(guī)范的操作程序，并對(duì)采集人員和標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行系統(tǒng)全面的培訓(xùn)。采集人員采血前要仔細(xì)檢查采血試管有無(wú)裂痕和滲漏，采血過(guò)程認(rèn)真核對(duì)血袋、標(biāo)本管和獻(xiàn)血者信息，保證標(biāo)本同源性；標(biāo)本采集后將標(biāo)本管內(nèi)抗凝劑與血液充分混勻，在4h內(nèi)離心，臨時(shí)保存溫度為2～8℃。標(biāo)本運(yùn)送人員采用專用儲(chǔ)存箱運(yùn)輸標(biāo)本，運(yùn)輸過(guò)程保持標(biāo)本管口向上，避免劇烈震蕩；廣西夏季室外高溫，對(duì)標(biāo)本的冷鏈運(yùn)輸要求很高，應(yīng)對(duì)冷鏈效果進(jìn)行確認(rèn)和定期監(jiān)測(cè)；標(biāo)本送達(dá)后，運(yùn)送人員與實(shí)驗(yàn)室工作人員當(dāng)面交接，質(zhì)量不符合要求的標(biāo)本退回并要求委托血站重新留樣。⑵標(biāo)本標(biāo)簽粘貼不規(guī)范，條形碼不統(tǒng)一，導(dǎo)致標(biāo)本無(wú)法正常掃描接收，在核酸檢測(cè)設(shè)備上無(wú)法識(shí)別。通過(guò)統(tǒng)一使用唐山血液信息管理系統(tǒng)，采用統(tǒng)一的編碼規(guī)則，充分保證了數(shù)據(jù)傳輸、接收的相容性和準(zhǔn)確性。⑶檢驗(yàn)報(bào)告發(fā)布和接收問(wèn)題：對(duì)雙方血液信息管理系統(tǒng)進(jìn)行升級(jí)對(duì)接，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室發(fā)布血液檢測(cè)結(jié)果信息，同時(shí)打印結(jié)果紙質(zhì)報(bào)告兩份，一份由檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室歸檔保存，一份交由委托血站歸檔保存。委托血站可通過(guò)信息管理軟件接收檢測(cè)結(jié)果，并依據(jù)檢測(cè)結(jié)果實(shí)施血液隔離和限行。⑷緊急情況下的血液供應(yīng)問(wèn)題：制定計(jì)算機(jī)信息系統(tǒng)應(yīng)急預(yù)案，每天進(jìn)行服務(wù)器數(shù)據(jù)備份，定期維護(hù)計(jì)算機(jī)信息系統(tǒng)的軟件和硬件，保證故障發(fā)生時(shí)能快速排除和恢復(fù)；制定應(yīng)急采供血預(yù)案，各血站根據(jù)臨床用血需求，制定不同種類血液產(chǎn)品的最低、最高和合適庫(kù)存水平，儲(chǔ)存一定數(shù)量稀有血型血液和緊缺的血液產(chǎn)品，保證突發(fā)事件的血液供給，此外，可充分利用合作血站間血液資源，合理調(diào)配血液，血液標(biāo)本無(wú)需重復(fù)檢驗(yàn)。

綜上所述，集中化檢測(cè)后，廣西西南部地區(qū)全面實(shí)施血液核酸檢測(cè)，通過(guò)統(tǒng)一血液網(wǎng)絡(luò)化管理，統(tǒng)一核酸檢測(cè)資源，統(tǒng)一血液采集、運(yùn)輸、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，有效降低了輸血風(fēng)險(xiǎn)，保障了區(qū)域內(nèi)臨床用血的安全、有效。

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