自擬耳復康口服液對小鼠耳廓微循環(huán)的影響＊

劉曉斌，郝少君，陳維亮，孫有樹，王紅宇，郭俊毅，管志江，張正臣

自擬耳復康口服液由人參、紅花、酸棗仁、骨碎補、路路通、石菖蒲、枸杞、麥冬等八味藥組成；人參：微苦性溫，主補五臟氣血，正氣足，外邪祛也。紅花：辛溫入肝腎，活血化瘀，瘀行則血活。人參、紅花補氣、活血化瘀為君；酸棗仁：甘平微酸，入肝脾心臟經(jīng)，均補五藏中氣則耳聰目明，為臣藥。骨碎補：味苦性溫，入肝腎二經(jīng)，肝開竅于目，腎寓竅于耳，肝腎足則耳聰目明，路路通：味苦性平，入肝腎，真性大能通行十二經(jīng)，石菖蒲：辛，微溫，出音聲，通九竅，九竅通靈故使耳聰目明，骨碎補、路路通、石菖蒲共為佐藥；枸杞：甘平微寒，滋補肝腎真陰，強筋骨而壯陽，有滋陰補陽之功，麥冬：微苦，寒，滋養(yǎng)胃陰，脾腎。枸杞、麥冬共為使藥。諸藥合用具有補氣，活血化瘀，通脈養(yǎng)心，通九竅使耳聰目明。用于耳鳴、耳聾等。

根據(jù)耳鳴和耳聾病“氣虛血瘀”病機，宗“標本兼治”的治則進行組方，該方用藥精當，配伍嚴謹，共奏補氣行血、活血化瘀、通脈搜絡養(yǎng)心，通九竅之功。與名方補陽還五湯比較，有同“功”異曲之妙。為驗證其作用、并探討其作用特點，筆者觀察了耳復康口服液對腎上腺素致急性血瘀癥小鼠微循環(huán)障礙模型細靜脈及細動脈的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 KM雌、雄性小鼠，SPF級，體質量18～22 g，由濟南朋悅實驗動物繁育有限公司提供，動物合格證號：37009200001779。

1.2 實驗藥品 耳復康口服液，生產(chǎn)廠家：中國人民解放軍第371中心醫(yī)院，生產(chǎn)批號：20150706。腦得生片，生產(chǎn)廠家：廣東國醫(yī)堂制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：151101。生理鹽水，河南雙鶴華利藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：c215123103-2。水合氯醛，天津市光復精細化工研究所，批號：20151014。鹽酸腎上腺素注射液，遂成藥業(yè)股份有限公司，批號：1507252。香柏油，中國上海懿洋儀器有限公司，批號：20150403。

1.3 實驗儀器 （1）JM 1000電子秤，余姚記銘稱重校驗設備有限公司；（2）AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；（3）BI-2000圖像分析系統(tǒng)，成都泰盟科學儀器有限公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 分組及給藥［1］取健康小鼠60只按體重大小隨機均勻分成5組，即空白組，腦得生片，大、中、小劑量耳復康口服液組，每組12只。空白組給予生理鹽水，腦得生片組給予腦得生片（1.35 g/kg，相當于臨床劑量的15倍），大劑量耳復康口服液組（30 ml/kg，相當于臨床劑量的30倍），中劑量耳復康口服液組（15 ml/kg，相當于臨床劑量的15倍）、小劑量耳復康口服液組（7.5 ml/kg，相當于臨床劑量的7.5倍），給藥1次/d，連續(xù)給藥7 d，于第7天早上給藥1 h（禁食不禁水12 h）后開始實驗。

1.4.2 對正常小鼠耳廓微循環(huán)的作用 用10%的水合氯醛按0.03 ml/10 g給小鼠腹腔注射麻醉，用小剪刀剪去小鼠耳廓上的細毛，將麻醉好的小鼠腹部向下固定在小鼠觀察臺上，調節(jié)耳托高度，使小鼠的耳廓平整地展開在耳托上，并滴加1～2滴香柏油在其耳廓上，然后將觀察臺置于顯微鏡的載物臺上，用全自動圖像分析儀觀察各組小鼠耳廓微動脈（A）、微靜脈（V）管徑［2］。調節(jié)視野范圍，使正常小鼠耳殼微循環(huán)情況相似。

1.4.3 對急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)的影響 各組小鼠測定給藥后小鼠耳廓微動脈、微靜脈管徑后，尾靜脈注射鹽酸腎上腺素注射液（10 mg/kg）前后，分別觀察各小鼠耳廓微動脈（A）、微靜脈（V）管徑［3］。

1.4.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)分析用SPSS 17.0醫(yī)用統(tǒng)計包進行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計學處理，計量資料用平均數(shù)±標準差（x±s）表示，以 P＜005 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 耳復康口服液對正常小鼠耳廓微循環(huán)的影響從表1可看出，與空白組相比，大、中劑量耳復康口服液組及腦得生組對正常小鼠耳廓微靜脈管徑有不同程度地擴張，而小劑量耳復康口服液組對正常小鼠耳廓微靜脈管徑及大中小劑量耳復康口服液組及腦得生組對正常小鼠耳廓微動脈管徑有不同程度的收縮，但均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。說明耳復康口服液對小鼠耳廓微循環(huán)無影響。

2.2 耳復康口服液對急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)的影響 從表2可知，與腎上腺素前相比，空白組小鼠耳廓微靜脈管徑、微動脈管徑的減少，抑制血液流速的減慢，說明急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)造模成功。與模型組相比，大劑量耳復康口服液組可顯著對抗腎上腺素所致小鼠耳殼細靜脈管徑的收縮（P＜0.01），中劑量耳復康口服液組和腦得生組可明顯對抗腎上腺素所致小鼠耳殼細靜脈管徑的收縮（P＜0.05）；大、中、小劑量耳復康口服液組和腦得生組均可顯著對抗腎上腺素所致小鼠耳廓細動脈管徑的收縮（P＜0.01）。

表1 耳復康口服液對正常小鼠微循環(huán)障礙模型細靜脈的影響

3 討論

血瘀癥現(xiàn)代臨床病理學表現(xiàn)主要為體循環(huán)和微循環(huán)障礙，該文主要觀察微循環(huán)。研究微循環(huán)的意義在于可從微觀角度更加深入地了解生命活動，可進一步地認識到發(fā)病的機制，開展疾病防、診、治的研究具有重要意義，同時可全面分析病情、預后估計、提高臨床療效等。而微循環(huán)是維持組織正常功能及組織代謝的保證也在機體局部血液供應中起重要的作用［4］。評價微循環(huán)可通過觀察微循環(huán)的3個指標，即微血管管徑、毛細管網(wǎng)交點計數(shù)、微血管流速［5］的變化。實驗觀察了微血管管徑，即微靜脈和微動脈管徑。

腎上腺素兼有α受體和β受體激動作用，皮膚、黏膜及腹腔內(nèi)臟血管尤其是微動脈和微靜脈分布著大量的 α 受體［6，7］。 注射腎上腺素后，可與其結合后，激活了與磷脂酶相連的鳥苷酸調節(jié)蛋白，形成α-鳥苷三磷酸，激活磷脂酶C，水解膜磷脂中的磷脂酰肌醇二磷酸，生成肌醇三磷酸和二酰甘油。促使細胞內(nèi)貯存鈣釋放為游離鈣，胞質鈣濃度增加，激活鈣依賴性蛋白激酶，使得底物磷酸化，進而產(chǎn)生縮血管的作用，即微循環(huán)障礙模型［8，9］。 該實驗中小鼠尾靜脈注射腎上腺素后，局部微血管舒縮功能紊亂導致微循環(huán)障礙。實驗結果表明，耳復康口服液對正常正常小鼠微靜脈、微動脈管徑無明顯作用，說明耳復康口服液對小鼠耳廓微循環(huán)實驗無影響。耳復康能抑制急性血瘀癥小鼠耳廓微靜脈、微動脈管徑的縮小，抑制血液流速的減慢，能有效緩解腎上腺素導致的急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)障礙。

耳復康口服液臨床主要用于耳鳴、耳聾及氣虛血瘀性中風等癥，療效較好，耳鳴和耳聾是耳鼻咽喉—頭頸外科常見疾病和癥狀，耳鳴和耳聾的病因主要和病毒感染，微循環(huán)障礙，神經(jīng)本身發(fā)生疾病等有關［10］。治宜活血化瘀、祛風除濕、溫經(jīng)通絡之法。耳復康口服液能改善急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)障礙，提示了耳復康口服液具有活血化淤，改善微循環(huán)障礙的作用，是耳復康口服液治療耳鳴、耳聾的機制之一，從而為其臨床治療耳鳴、耳聾進一步提供了實驗依據(jù)。

（志謝 本實驗在河南中醫(yī)藥大學苗明三教授指導下完成，特此致謝！）

［1］王希東，郝少君，李文俊.抗眩顆粒對小鼠腦膜微循環(huán)的影響［J］. 實用藥物與臨床，2015，18（6）：653-655.

［2］郭文，陳東輝，周黎琴，等.痹痛貼對小鼠耳廓微循環(huán)作用的實驗研究［J］. 四川中醫(yī)，2012，30（8）：44-46.

［3］易偉國，趙京生，劉宏.心得寧口服液對小鼠耳殼微循環(huán)的影響［J］. 中醫(yī)學報，2013，28（11）：1671-1672.

［4］包曉瑋，閻曉菲，常永志，等.刺山柑提取物對正常小鼠耳廓微循環(huán)的作用［J］. 中國農(nóng)學通報，2015，31（2）：62-66.

［5］盧美嬌，李欽，任娟，等.銀杏葉提取物促進微循環(huán)作用研究［J］.藥物研究，2006，15（11）：29-30.

［6］賀海波，石孟瓊，盧訓叢，等.珠子參水提物對小鼠耳廓微循環(huán)的影響［J］. 中國臨床藥理學與治療學，2010，15（1）：1216-1222.

［7］郭玉東，王志斌，左澤平，等.舒血寧注射液對小鼠耳廓微循環(huán)的影響［J］. 中國藥學雜志，2012，47（22）：1803-1806.

［8］張榕文，李耿，劉丹丹，等.中藥育發(fā)液對腎上腺素致小鼠耳廓微循環(huán)障礙的影響研究［J］. 中國當代醫(yī)藥，2011，18（30）：7-8.

［9］宋立中，華劍，許善初，等.刺五加注射液對急性血瘀癥小鼠耳廓微循環(huán)的影響［J］. 中華全科醫(yī)學，2009，7（5）：443-444.

［10］柳瑞熙，李彥華，盛國強，等.唇香草聰耳片對突發(fā)性耳聾微循環(huán)障礙的影響［J］. 上海中醫(yī)藥大學學報，2009，23（5）：31-33.

［2017－11－30 收稿，2017－12－27 修回］