植物乳桿菌和釀酒酵母發(fā)酵菠蘿汁的性能比較及產(chǎn)物分析

馬立娟，王 超，杜麗平*，韓曉霞，孫 文，李大雷，郭高杰

（天津科技大學(xué) 生物工程學(xué)院 工業(yè)發(fā)酵微生物教育部重點實驗室 天津市工業(yè)微生物重點實驗室，天津 300457）

隨著經(jīng)濟的發(fā)展和社會的進步，人們對日常飲食的營養(yǎng)價值與保健功能提出了更高的要求。益生菌不僅具有促進食物消化吸收等功能，而且對糖尿病等慢性病還具有一定的預(yù)防功能，因此，益生菌產(chǎn)品日益受到人們的關(guān)注[1]，與益生菌相關(guān)的食品和飲料產(chǎn)品在國際市場中種類越來越多，份額越來越大[2-3]。除占市場份額最大的益生菌發(fā)酵乳制品以外，目前以谷物、果蔬汁等不同原料作為發(fā)酵載體進行益生菌發(fā)酵的研究與相關(guān)產(chǎn)品日趨增多[4]。

果蔬具有低蛋白、低脂肪的特點，含有大量的礦物質(zhì)與豐富的維生素，具有天然的令人愉悅的口感風(fēng)味。將果蔬汁進行益生菌發(fā)酵是一種優(yōu)良的加工方式，相關(guān)研究也日趨增多。YOON K Y等[5]采用干酪乳桿菌（Lactobacillus casei）A4、植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）C3和德式乳酸桿菌（Lactobacillusdelbrueckii）D7發(fā)酵甘藍汁，獲得了含有大量活菌并且具有緩解乳糖不耐癥功能的發(fā)酵甘藍汁。FILANNINO P等[6]采用植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）發(fā)酵石榴汁，開發(fā)健康功效與口感風(fēng)味俱佳的益生菌產(chǎn)品。菠蘿又名鳳梨，是熱帶、亞熱帶特產(chǎn)水果之一，在我國水果市場占有重要地位。菠蘿含有豐富的糖、蛋白質(zhì)、維生素C（vitamin C，VC）、β-胡蘿卜素、膳食纖維以及鈣、鉀、鎂等礦物質(zhì)，具有利尿、解熱解暑、解酒、降血壓、預(yù)防便秘和抗癌等功效[7-8]。菠蘿香氣誘人、風(fēng)味獨特，菠蘿經(jīng)益生菌發(fā)酵會產(chǎn)生使人愉悅的酒香和果香[9]。潘詠梅[10]通過氣質(zhì)聯(lián)用色譜定性及氣相色譜定量方法對菠蘿鮮汁及菠蘿加熱汁、菠蘿發(fā)酵汁中揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)的變化進行了總體分析。朱龍寶等[11]研究發(fā)現(xiàn)，在菠蘿汁澄清處理過程中會引起菠蘿汁組成成分的變化，對發(fā)酵過程和菠蘿酒酯類等風(fēng)味物質(zhì)均產(chǎn)生較大的影響。目前以釀酒酵母發(fā)酵生產(chǎn)菠蘿汁飲料的研究報道較多，但采用植物乳桿菌單獨或其與釀酒酵母混菌發(fā)酵的還少見相關(guān)報道。

本研究采用新鮮的菠蘿汁為原料，利用本實驗室從水果發(fā)酵體系中篩選得到的植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）和釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）分別進行單菌與混菌發(fā)酵，對不同接菌方式發(fā)酵菠蘿汁的益生菌活菌數(shù)、酸度、糖、氨基酸態(tài)氮、有機酸以及風(fēng)味物質(zhì)進行比較分析，為高品質(zhì)菠蘿發(fā)酵飲品的研制提供技術(shù)參考和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 菌種

植物乳桿菌（Lactobacillusplantarum）和釀酒酵母（Saccharomycescerevisiae）均由本實驗室篩選獲得。

1.1.2 實驗原料

新鮮菠蘿（食品級）：市售。

1.1.3 化學(xué)試劑

蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、瓊脂粉（均為生化試劑），葡萄糖、檸檬酸二胺、磷酸氫二鉀、乙酸鈉、MgSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、氯霉素、吐溫80（均為分析純）：天津市英博生化試劑有限公司；蔗糖、果糖、葡萄糖（純度＞98%）：南京化學(xué)試劑股份有限公司；甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸（純度＞98%）：上海麥克林生化科技有限公司。

1.3.4 培養(yǎng)基

酸化MRS培養(yǎng)基：葡萄糖20g，蛋白胨10g，牛肉膏10 g，酵母膏5 g，檸檬酸二胺2 g，磷酸氫二鉀2 g，乙酸鈉5 g，MgSO4·7H2O 0.58 g，MnSO4·4H2O 0.25 g，吐溫80 1 mL，溶解于1 000 mL蒸餾水中，攪拌均勻，分裝到三角瓶，121℃濕熱滅菌15 min（固體培養(yǎng)基添加2%瓊脂粉后滅菌）。

酵母浸出粉胨葡萄糖（yeast extract peptone dextrose，YEPD）培養(yǎng)基：葡萄糖20 g，蛋白胨20 g，酵母膏10 g，溶解于1 000 mL蒸餾水中，攪拌均勻，分裝到三角瓶，121℃濕熱滅菌15 min（固體培養(yǎng)基添加2%瓊脂粉后滅菌）。

酵母粉浸出粉葡萄糖氯霉素（yeast extract dextrose chloramphenicol，YEDC）培養(yǎng)基：酵母膏5.0g，葡萄糖20.0g，氯霉素0.1 g，溶解于1 000 mL蒸餾水中，攪拌均勻，分裝到三角瓶，121℃濕熱滅菌15 min（固體培養(yǎng)基添加2%瓊脂粉后滅菌）。

1.2 儀器與設(shè)備

ZHJH-C1115B型超凈工作臺、2XJD-A1270型電熱恒溫培養(yǎng)箱：鄭州南北儀器設(shè)備有限公司；IS-RDS3疊加式恒溫振蕩器：河南兄弟儀器設(shè)備有限公司；YXQ-LS-50SII立式壓力蒸汽滅菌器：上海博訊實業(yè)有限公司設(shè)備廠；HWS24電熱恒溫水浴鍋：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；pHS-3C精密pH計：梅特勒-托利多儀器有限公司；Centrifuge 5430R離心機：德國艾本德有限公司；HR2874/00榨汁機：荷蘭飛利浦電子有限公司；Agilent 1200高效液相色譜儀、Agilent 7890A-5975CGC/MS氣質(zhì)聯(lián)用色譜儀：美國安捷倫科技有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 菠蘿汁的制備

選新鮮的菠蘿，去掉果皮后用清水沖洗，切粒，按照菠蘿∶水=1∶1（g∶g）的比例，將菠蘿與水一同放入榨汁機打漿過濾得到菠蘿汁。將菠蘿汁放入75℃的水浴鍋中，待菠蘿汁升溫至75℃并維持15 min（巴氏消毒法），將菠蘿汁滅菌與滅酶。降溫至40℃左右，待用。

1.3.2 菌種的活化

乳酸菌活化：用接種環(huán)從保存菌種的斜面上挑取乳酸菌，接種到裝有10 mL MRS液體培養(yǎng)基的試管中，把試管置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)16 h，再將其倒入裝有200 mL MRS液體培養(yǎng)基的三角瓶中，把三角瓶置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，靜置培養(yǎng)20 h。

酵母菌活化：將0.1 g的凍干酵母粉倒入裝有10 mL YEPD液體培養(yǎng)基的試管中，把試管置于30℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)12 h，再將其倒入裝有200 mL YEPD液體培養(yǎng)基的三角瓶中，置于30℃、150 r/min振蕩培養(yǎng)24 h。

1.3.3 菠蘿汁發(fā)酵

單菌發(fā)酵：對活化好的植物乳桿菌和釀酒酵母，分別測定其活菌數(shù)，然后以6%的接種量分別接種到滅菌后的菠蘿汁中（3個平行）。37℃密封靜置發(fā)酵72 h，發(fā)酵結(jié)束取樣測定發(fā)酵液中活菌數(shù)、pH、酸度、氨基氮、葡萄糖、果糖、蔗糖、有機酸、乙醇以及揮發(fā)性成分。

混菌發(fā)酵：對活化好的且已測定活菌數(shù)的植物乳桿菌和釀酒酵母培養(yǎng)液，按照植物乳桿菌接種量為4%，釀酒酵母接種量為2%時接種到滅菌后的菠蘿汁中（3個平行）。37℃密封靜置發(fā)酵7 h，發(fā)酵結(jié)束取樣測定發(fā)酵液中活菌數(shù)、pH、酸度、氨基氮、葡萄糖、果糖、蔗糖、有機酸、乙醇以及揮發(fā)性成分。

1.3.4 分析方法

活菌數(shù)測定：取0.1 mL樣液于0.9 mL滅菌水中稀釋，然后用同樣的方法進行梯度稀釋，選3個稀釋度，吸取0.1 mL的液體，進行平板涂布。單菌發(fā)酵計數(shù)時，植物乳桿菌用MRS培養(yǎng)基平板進行涂布計數(shù)，釀酒酵母用YEPD培養(yǎng)基平板進行涂布計數(shù)?；炀l(fā)酵計數(shù)時，酵母菌用YEDC培養(yǎng)基平板進行計數(shù)，乳酸菌用添加了放線菌酮的MRS培養(yǎng)基平板進行計數(shù)。用于乳酸菌計數(shù)的平板置于37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d后計數(shù)，用于酵母菌計數(shù)的平板置于30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d后計數(shù)，每個梯度涂布3個平行。菌落計數(shù)單位為CFU/mL。全程要求無菌操作。

pH測定：pH計測定各樣液pH。

氨基酸態(tài)氮含量的測定：參照文獻[12]進行測定。

糖類含量測定：采用高效液相色譜法測定蔗糖、果糖、葡萄糖含量。高效液相色譜檢測條件：Prevail Carbohydrate ES 5u色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相乙腈∶水=75∶25（V/V）；流速為0.6 mL/min；柱溫30 ℃；檢測器為蒸發(fā)光散射檢測器（evaporativelight scatteringdetector，ELSD）；載氣（氮氣）流量2.2 mL/min；增益1；進樣量10.0μL。

有機酸含量測定：采用高效液相色譜法測定各有機酸（甲酸、乙酸、丙酸、乳酸、蘋果酸、琥珀酸）含量。高效液相色譜檢測條件：Aminex HPX-87H色譜柱（300 mm×7.8 mm）；流動相5 mmol/L H2SO4；流速0.6 mL/min；柱溫60 ℃；檢測器為可變波長檢測器（variablewavelength detector，VWD）；波長210 nm；進樣量20μL。

香氣物質(zhì)測定：用氣質(zhì)聯(lián)用（gaschromatography-mass spectrometer，GC-MS）方法測定揮發(fā)性香氣物質(zhì)。氣相色譜檢測條件：HP-5色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）；進樣溫度250℃；分流進樣，分流比20∶1；程序升溫：初始45℃（保留2 min），3.5℃/min升至220℃（保留2 min）；載氣流量1.0 mL/min。質(zhì)譜檢測條件：離子源：電子電離（electronic ionization，EI）源；離子源溫度：230 ℃；電子能量：70 eV；發(fā)射電流：34.6μA；接口溫度：280℃；掃描質(zhì)量范圍：30～550 amu。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同接菌方式對活菌數(shù)的影響

表1 菠蘿汁發(fā)酵前后總活菌數(shù)的比較Table 1 Comparison of total viable count before and after pineapple juice fermentation

取已滅菌的菠蘿汁，分別接入植物乳桿菌、釀酒酵母、植物乳桿菌∶釀酒酵母（2∶1）（活菌數(shù)約為6×106CFU/mL），37℃靜置發(fā)酵72 h后，發(fā)酵結(jié)束分別對發(fā)酵液中的活菌進行計數(shù)，結(jié)果如表1所示。

由表1可知，相同接種量的條件下，植物乳桿菌單獨發(fā)酵菠蘿汁72 h后活菌數(shù)最多，可達2×108CFU/mL，是釀酒酵母單獨發(fā)酵的3倍多，約為二者混合發(fā)酵總活菌數(shù)的10倍，二者單獨發(fā)酵最終總活菌數(shù)均高于混合發(fā)酵的總活菌數(shù)。賈磊等[13]研究表明，通常情況下，酵母菌與乳酸菌之間不會表現(xiàn)出特別明顯的促進或抑制關(guān)系，但某些特定的乳酸菌與某些特定的酵母菌之間會有一定程度上的促進或抑制關(guān)系。BROOMEM C等[14]研究表明，酵母菌生長過程中會代謝產(chǎn)生脂肪酸等一些抑制乳酸菌生長代謝的物質(zhì)，同時，乳酸菌在生長過程中會產(chǎn)生苯乳酸等一些抑制酵母菌生長代謝的物質(zhì)[15]，這可能是本研究中植物乳桿菌與釀酒酵母混合發(fā)酵總活菌數(shù)降低的原因。

2.2 不同接菌方式對發(fā)酵液pH和滴定酸度的影響

不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后的pH值和滴定酸度檢測結(jié)果見表2。

表2 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后pH值和滴定酸度檢測結(jié)果Table 2 Determination results of pH value and titratable acidity of pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h

由表2可知，未接菌的菠蘿汁初始pH值最高，為3.81，滴定酸度最低，為70°T，無論是單菌還是混菌發(fā)酵，pH值均有所降低，滴定酸度均明顯升高。單獨接入釀酒酵母發(fā)酵72 h后，菠蘿汁pH值（3.78）和滴定酸度（74°T）變化不明顯；而單獨接入植物乳桿菌發(fā)酵72h后的菠蘿汁，pH值最低（3.21），滴定酸度最高（168°T）；混菌發(fā)酵72 h后的菠蘿汁pH值（3.57）變化不大，滴定酸度有所提高（98°T）。這是由于乳酸菌通常在密封缺氧條件下利用葡萄糖等碳水化合物產(chǎn)生乳酸等有機酸物質(zhì)，從而引起pH降低；而酵母菌在無氧環(huán)境下利用葡萄糖等碳水化合物主要生成CO2與乙醇等，對pH值沒有明顯影響。

2.3 不同接菌方式發(fā)酵體系中底物的消耗的比較

2.3.1 氨基酸態(tài)氮的消耗

不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后發(fā)酵液中氨基酸態(tài)氮含量檢測結(jié)果見圖1。

由圖1可知，菠蘿汁的氨基酸態(tài)氮含量為7.56×10-4mg/L，與之相比，接入植物乳桿菌單獨發(fā)酵72 h后菠蘿汁中氨基酸態(tài)氮的含量為7.84×10-4mg/L，含量沒有明顯變化，而接入釀酒酵母發(fā)酵72 h后菠蘿汁中氨基酸態(tài)氮的含量為3.15×10-4mg/L，含量明顯降低，其中，植物乳桿菌與釀酒酵母混菌發(fā)酵的氨基酸態(tài)氮含量最低（2.92×10-4mg/L）。林樸[16]實驗表明，酵母菌發(fā)酵第1～2天內(nèi)可迅速并大量利用氨基酸態(tài)氮，本實驗所得結(jié)果與其基本一致。此外，植物乳桿菌∶釀酒酵母（2∶1）混合發(fā)酵（2.66×10-4mg/L）時菠蘿汁中的氨基酸態(tài)氮含量比釀酒酵母單獨發(fā)酵（3.15×10-4mg/L）時略低，可見植物乳桿菌與酵母菌混菌發(fā)酵在氨基酸態(tài)氮利用方面有微弱的促進作用。

圖1 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后的氨基酸態(tài)氮含量檢測結(jié)果Fig.1 Determination results of amino nitrogen contents in pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h

2.3.2 糖類物質(zhì)的消耗

不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后發(fā)酵液中糖類物質(zhì)含量的檢測結(jié)果見表3。

表3 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后糖類物質(zhì)含量檢測結(jié)果Table 3 Determination results of carbohydrates contents in pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h g/L

由表3可知，未接菌的菠蘿汁與菠蘿汁發(fā)酵液中均未檢測到木糖與乳糖。菠蘿汁中蔗糖、果糖和葡萄糖的含量分別為180.81 g/L、93.42 g/L和11.22 g/L。發(fā)酵72 h后，菠蘿汁中的蔗糖、果糖與葡萄糖的含量均有不同程度的減少，其中，接入釀酒酵母發(fā)酵后的菠蘿汁中的這三種糖已基本被消耗完，而單獨接入植物乳桿菌發(fā)酵72 h后的菠蘿汁中蔗糖、果糖和葡萄糖的殘余量分別為87.91 g/L、6.47 g/L和46.51 g/L。由此可見，釀酒酵母對這三種糖的利用能力非常強，幾乎可以完全把菠蘿汁中的糖消耗殆盡；而植物乳桿菌對這三種糖有一定的消耗能力，但比釀酒酵母小很多。

2.4 不同接菌方式發(fā)酵體系中產(chǎn)物分析

2.4.1 有機酸

食品中有機酸的作用是非常重要的，首先有機酸具有一定的抑制致病菌的能力[17]。并且有機酸對人維持自身身體健康也有很大作用。本實驗對不同接菌方式的菠蘿汁發(fā)酵72 h后進行各種有機酸進行定量分析[18]，測定結(jié)果見圖2。

圖2 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后有機酸含量檢測結(jié)果Fig.2 Determination results of organic acids contents in pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h

由圖2可知，菠蘿汁與菠蘿汁發(fā)酵液中，沒有檢測到酒石酸與丁酸。菠蘿汁中含有一定量蘋果酸（1892.77mg/L）、甲酸（486.78mg/L）、乳酸（200.27mg/L）、琥珀酸（1147.96mg/L）、乙酸（1 070.48 mg/L）、丙酸（1 836.93 mg/L）。發(fā)酵后，菠蘿汁中除酒石酸與丁酸，其余各種有機酸的含量相較于發(fā)酵前都有一定程度的變化。

發(fā)酵后菠蘿汁與未發(fā)酵菠蘿汁的有機酸組成出現(xiàn)了差異，這將構(gòu)成發(fā)酵后菠蘿汁與未發(fā)酵菠蘿汁之間的口感差異，同時，各種發(fā)酵菠蘿汁之間的有機酸組成也存在著明顯的差異，這也是各發(fā)酵菠蘿汁形成自己獨特的口感的原因。植物乳桿菌單獨發(fā)酵的乳酸產(chǎn)量很高，酵母的加入可以降低乳酸的含量；釀酒酵母會產(chǎn)生甲酸，而植物乳桿菌的加入會抑制甲酸的產(chǎn)生；兩種菌的加入都會降低琥珀酸和蘋果酸的含量。這些有機酸也是良好的抑菌劑、防腐劑，有機酸的增加或減少關(guān)系著發(fā)酵菠蘿汁的貨架期。

2.4.2 乙醇

乙醇是含醇飲料中極為常見的組成成分。乙醇的含量關(guān)系著飲料的口感，對于發(fā)酵飲料來說，適量的乙醇將有助于延長發(fā)酵飲料的貨架期。實驗中分別對不同接菌方式的菠蘿汁發(fā)酵72h后進行乙醇含量的檢測，檢測結(jié)果如圖3所示。

圖3 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后乙醇含量檢測結(jié)果Fig.3 Determination results of ethanol contents in pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h

由圖3可知，菠蘿汁中與單獨接入植物乳桿菌發(fā)酵72 h的菠蘿汁中乙醇的含量幾乎為零，由于植物乳桿菌主要進行乳酸發(fā)酵，僅當(dāng)進行異型乳酸發(fā)酵時可能生成少量的乙醇。而接入釀酒酵母及混菌發(fā)酵72 h，菠蘿汁中乙醇的含量分別為17.03 g/L和15.28 g/L，含量明顯增加這是因為釀酒酵母主要進行的是乙醇發(fā)酵。

2.4.3 香氣物質(zhì)

不同接菌方式的菠蘿汁發(fā)酵72 h后的香氣物質(zhì)成分檢測結(jié)果見表4。

表4 不同接菌方式菠蘿汁發(fā)酵72 h后香氣物質(zhì)檢測結(jié)果Table 4 Determination results of aroma compounds contents in pineapple juice fermented by different inoculation ways for 72 h

續(xù)表

由表3可知，菠蘿汁原料中可檢測到的香氣物質(zhì)有11種（己酸甲酯、2-甲基丁酸甲酯、辛酸甲酯、癸酸甲酯、庚酸甲酯、3-甲硫基丙酸甲酯、（Z）-辛烯酸甲酯、己酸乙酯、4-癸烯酸甲酯、丁酸甲酯、α-蒎烯）。其中，己酸甲酯、3-甲硫基丙酸甲酯、己酸乙酯、丁酸甲酯具有菠蘿味香氣，2-甲基丁酸甲酯和辛酸甲酯具有獨特的果香，α-蒎烯具有獨特香氣，庚酸甲酯常用于香料的合成。因此，在發(fā)酵過程中盡可能保留這幾種香氣成分，有助于保存菠蘿的獨特風(fēng)味。經(jīng)過對比，用植物乳桿菌單菌發(fā)酵的菠蘿汁香氣成分有9種，菠蘿的主要香氣物質(zhì)基本得以保留，也有原料中不存在的物質(zhì)生產(chǎn)如萜品烯；而用釀酒酵母進行發(fā)酵時菠蘿的主要香氣物質(zhì)共7種，只有己酸甲酯是菠蘿汁中的成分，其余6種揮發(fā)性物質(zhì)都是新生成的；而植物乳桿菌與釀酒酵母混菌發(fā)酵的菠蘿汁香氣成分有16種，菠蘿汁的大部分香氣物質(zhì)得以保留，新增的香氣物質(zhì)還起到調(diào)節(jié)發(fā)酵菠蘿汁風(fēng)味的作用，有助于形成較為獨特的風(fēng)味。由此可見，采用植物乳桿菌和釀酒酵母進行混合發(fā)酵，既可保有菠蘿本身的營養(yǎng)物質(zhì)和特有香氣，又賦予其一定的發(fā)酵風(fēng)味，獲得口感良好的菠蘿發(fā)酵飲品。

3 結(jié)論

本研究以菠蘿作為發(fā)酵原料，對比了采用植物乳桿菌和釀酒酵母分別進行單菌與混菌發(fā)酵時的發(fā)酵性能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，無論單菌還是混菌，均能夠在菠蘿汁生長繁殖并發(fā)酵；發(fā)酵的菠蘿汁pH均會下降，滴定酸度均升高；混菌發(fā)酵時植物乳桿菌和釀酒酵母的生長狀態(tài)均不如單菌發(fā)酵時，但綜合考慮乳酸、乙醇以及香氣物質(zhì)的生成情況，采用植物乳桿菌和釀酒酵母進行混合發(fā)酵，既可保有菠蘿本身的營養(yǎng)物質(zhì)和特有香氣，又可賦予其一定的發(fā)酵風(fēng)味，獲得口感良好的菠蘿發(fā)酵飲品。

參考文獻：

[1]秦曉東.美華生物公司益生菌市場營銷策略研究[D].長春：吉林大學(xué)，2010.

[2]杜 磊，杜 楊.發(fā)酵乳制品的現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢[J].河南畜牧獸醫(yī)：市場版，2014，35（12）：13-15.

[3]肖 平，呂嘉櫪，沈 文.益生菌的保健功能及其在食品中的應(yīng)用概述[J].食品科技，2009，34（10）：23-26.

[4]胡學(xué)智.益生菌、益生元機器保健功能和安全性[J].上海醫(yī)藥，2001，22（8）：256-358.

[5]YOON K Y,WOODAMS E E,HANG Y D.Production of probiotics cabbage juice by lactic acid bacteria[J].Bioresource Technol,2006,97(12)：1427-1430.

[6]FILANNINO P,AZZIL,CAVOSKII,et al.Exploitation of the healthpromotingand sensory propertiesof organic pomegranate(Punicagranatum L.)juicethroughlactic acid fermentation[J].Int J Food Microbiol,2013,16(23)：184-192.

[7]張秀梅，杜麗清，孫光明，等.3個菠蘿品種果實香氣成分分析[J].食品科學(xué)，2009，30（22）：275-279.

[8]張慶慶，鄭天柱，湯文晶，等.紅曲菠蘿酒發(fā)酵及香氣成分的分析[J].食品工業(yè)科技，2015，36（19）：299-303，317.

[9]吳惠嬋，王秀杏，寧正祥，等.發(fā)酵菠蘿酒的風(fēng)味及其穩(wěn)定性研究[J].現(xiàn)代食品科技，2012，28（2）：191-194.

[10]潘詠梅.菠蘿汁及加工、發(fā)酵過程中風(fēng)味變化的研究[D].北京：北京化工大學(xué)，2007.

[11]朱龍寶，楊幼慧，周冠華.菠蘿汁的澄清處理對菠蘿酒發(fā)酵的影響[J].中國食品學(xué)報，2006，6（1）：120-123.

[12]朱益波，張建華.高溫瞬時α化大米中可酶促水解α氨基氮含量的測定[J].氨基酸和生物資源，2007，29（2）：59-62.

[13]賈 磊.酵母與乳酸菌發(fā)酵特性研究及混合乳開菲爾的研究[D].天津：天津科技大學(xué)，2010.

[14]BROOME M C,THOMAS M P,HILLIER A J,et al.The effect of linoleic acid on the growth and metabolismsof Streptococcus lactis[J].Aust J Dairy Technol,1979,34(4)：163-168.

[15]NIELSEN M S,FRISVAD J C,NIELSEN P V.Protection by fungal starters against growth and secondary metabolite production of fungal spoilersof cheese[J].Int J Food Microbiol,1998,42(1-2)：91-99.

[16]林 樸.貴人香葡萄中的氨基氮含量及其對酵母發(fā)酵的影響[J].中外葡萄與葡萄酒，2013（5）：17-21.

[17]RUBIN H E,NERAD T,VAUGHAN F.Lactate acid inhibition of Salmonellatyphimurium in yogurt[J].J Dairy Sci,1982,65(2)：197.

[18]莫海濤，杜玉蘭，黎慶濤，等.反相高效液相色譜法測定發(fā)酵飲料中有機酸和維生素C的含量[J].食品工業(yè)科技，2007（2）：230-232.