HPLC在藥物檢測中的應(yīng)用價值研究

楊斌 湯春燕 殷春錦 李麗麗

摘 要： HPLC在藥物檢測中的應(yīng)用，可以滿足藥物組分鑒別、藥物組分分析以及藥物組分含量測定等要求，并且因為自身具有的強分離性、高效性等特點，已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。為保證藥物檢測結(jié)果的可靠性與準(zhǔn)確性，需要基于技術(shù)特點，確定應(yīng)用管理要點，采取有效措施對整個檢測過程進行控制，避免各項因素對結(jié)果產(chǎn)生的不良影響。

關(guān)鍵詞： HPLC；藥物檢測；應(yīng)用技術(shù)

HPLC即高效液相色譜法，與其他色譜法相比，將其應(yīng)用到藥物檢測中可以取得可靠性更高的效果。為充分發(fā)揮HPLC在藥物檢測中應(yīng)用具有的優(yōu)勢，需要對其檢測原理以及應(yīng)用要點進行分析，然后基于實際需求，來完成各項檢測工作，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

一、HPLC藥物檢測應(yīng)用方向

1.中藥檢測

應(yīng)用HPLC來進行中藥有效組分分析，能夠準(zhǔn)確確定中藥飲品以及制劑質(zhì)量和療效是否達到相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。例如對干姜有效組分進行含量測定，經(jīng)過對各有效組分的超臨界CO2萃取處理，得到干姜油，整個測量過程更為簡單和靈敏，并且具有良好的重現(xiàn)性，能夠?qū)y定結(jié)果作為干姜與制劑質(zhì)量控制的依據(jù)。就HPLC實際應(yīng)用效果來看，還可以測定分析中藥內(nèi)所含有效成分，經(jīng)過對中藥制劑的對比檢測，可確定有效組分含量，具有很強的靈敏性，對控制重要制劑質(zhì)量有著重要指導(dǎo)作用[1]。

2.化學(xué)藥物

以化學(xué)藥物作為對象，應(yīng)用HPLC來對其進行檢測，主要是針對雜質(zhì)檢測，對藥物合成過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物進行測定，避免藥物內(nèi)含有有毒有害產(chǎn)物，經(jīng)過測定后確認(rèn)雜質(zhì)含量是否在規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。同時，也可以利用HPLC來對化學(xué)藥物的主要成分含量進行測定，例如對燒燙靈軟膏內(nèi)的磺胺醋酰鈉以及磺胺含量進行測定時，可以在3min內(nèi)得到結(jié)果，不僅快速簡便，并且可以保證結(jié)果的可靠性[2]。

二、HPLC藥物檢測應(yīng)用要求

1.HPLC條件選擇

HPLC近年來已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用到藥物檢測領(lǐng)域中，對提高藥物質(zhì)量控制效率具有重要意義，其中涉及到的內(nèi)容包括組分分析、組分鑒別、含量測定以及相關(guān)物質(zhì)測定等。為提高HPLC藥物檢測應(yīng)用效果，必須要做好條件選擇控制，提高分析結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性，可以作為藥物質(zhì)量控制的依據(jù)?；贖PLC分析方法特點與要求，提高對整個應(yīng)用過程的重視，總結(jié)以往經(jīng)驗來對測定分析過程進行控制，保證對各細節(jié)的高效控制，提高實際應(yīng)用效率。

2.有效性評價

HPLC作為一種定性、定量分析方法，被有效應(yīng)用到藥物分析中，務(wù)必保證測量結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性，可以對藥物樣品信息進行有效說明，為藥物質(zhì)量控制提供依據(jù)。這樣就需要確定有效性評價體系，通過有效性評價參數(shù)、專屬性手段措施以及有效性評價參數(shù)接受標(biāo)準(zhǔn)等控制，基于測定結(jié)果來對藥物進行有效評價。其中，有效性評價參數(shù)的選擇靈活性很高，且能夠根據(jù)實際需求來確定接受標(biāo)準(zhǔn)。有效性評價過程即在特定條件下，對分析效果過程進行觀察，根據(jù)觀察所確定的分析效果是否符合期望值，來確定此評價方法是否有效。

三、HPLC藥物檢測應(yīng)用分析

1.藥物與儀器

1.1降壓藥對照品

氫氯噻嗪片、酒石酸美托洛爾片、曲克蘆丁片、鹽酸特拉唑嗪片、富馬酸比索洛爾片、鹽酸普萘洛爾片、吲達帕胺片、氯沙坦鉀片、硝苯地平片、替米沙坦片、鹽酸地爾硫片、尼莫地平片、非洛地平緩釋片等共15種對照藥品，且全部由市場購買所得，按照含量標(biāo)示經(jīng)過100%折算后使用[3]。

1.2檢測儀器

選擇應(yīng)用Agilent 1200高效液相色譜儀，并且配套有自動控溫自動進樣器、液相四元泵和紫外可調(diào)波長監(jiān)測器；臺式高速離心機、電子天平以及超聲波發(fā)生器等。

1.3檢測試劑

檢測試驗選擇醋酸銨作為分析純試劑，甲醇與乙腈為色譜純，全部用水為純化水。

1.4藥物樣品

檢測分析所用樣品藥物為珍菊降壓片，其規(guī)格為每片重0.25g，含有0.03mg鹽酸可樂定、5mg氫氯噻嗪以及20mg的蘆丁，且試驗樣品由市場直接購買。

2.檢測過程

2.1色譜條件

檢測應(yīng)用4.6mm×250mm，5μmAgilent Extend-C18色譜柱，流動相為0.02mol·L-1醋酸銨溶液，流動相B為2：1的甲醇-乙腈。采用梯度洗脫，檢測波長為230nm，控制流速1.0ml·min-1，柱溫為30℃，進樣量為2μL。

2.2制備樣品與對照溶液

（1）樣品溶液

選擇一片珍菊降葉片將其研磨成分，進行精密稱量后放入到錐形瓶內(nèi)，向其中添加20mL甲醇，超聲處理15min，然后取出靜置一段時間后繼續(xù)高速離心處理，待離心結(jié)束后選取上清液進行測定。

（2）對照溶液

將對照樣品研磨成分，經(jīng)過精密稱量后選擇對照化合物10mg放入到錐形瓶內(nèi)，向其中精密加入20mL甲醇，超聲處理10min，結(jié)束后靜置一段時間，然后對溶液進行高速離心處理后選擇上清液，作為藥品測定試驗對照液備用。

2.3分析確定線性關(guān)系

選擇適量制備好的對照液稀釋10倍，以設(shè)定好的色譜條件分別進樣2μL、4μL、6μL、8μL、10μL分析，然后對選擇的15種降壓藥進樣量對峰面積進行線性回歸，確定其線性良好。

2.4色譜峰保留時間

在本實驗確定的色譜條件下，對稀釋后的對照液進行重復(fù)進樣，各色譜峰保留時間基本上均在0.01%～0.1%范圍內(nèi)，證明該流動相系統(tǒng)穩(wěn)定性高。設(shè)定曲克蘆丁保留時間為1，對其他各峰相對保留時間進行計算，降低測定難度。

2.5樣品藥物檢查

選擇提前制備好的待測藥品珍菊降壓片的樣品溶液，按照設(shè)定的色譜條件進行測定，得到色譜圖。對色譜圖進行分析，確定其中出現(xiàn)與氫氯噻嗪對照樣品色譜峰保留時間一致的色譜峰，證明可檢出樣品內(nèi)含有的氫氯噻嗪。

3.結(jié)果分析

為提高樣品藥物有效組分測定結(jié)果可靠性，需要科學(xué)選擇分離條件，即流動相與色譜柱的選擇，保證測定過程的靈敏性和穩(wěn)定性，降低各項因素對測定結(jié)果帶來的影響。并且在制備樣品與對照溶液時，需要盡量在避光條件下，盡量縮短操作時間。

結(jié)束語：

應(yīng)用HPLC對藥物進行檢測，能夠得到可靠的有效組分以及雜質(zhì)含量的準(zhǔn)確數(shù)值，對提高藥物質(zhì)量控制效率具有重要意義。■

參考文獻

[1] 王麗娟，張驪，葉玫，吳成業(yè).采用HPLC法和HPLC-MS/MS法檢測水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物方法比較[J].福建水產(chǎn)，2015，37（05）：378-385.

[2] 劉倩.HPLC在藥物檢測中的應(yīng)用價值分析[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢，2014，12（04）：252-253.

[3] 陳惠玲，封令霞.HPLC檢測中藥中非法添加化學(xué)降壓藥物[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2011，28（S1）：1346-1348.