肝癌組織miR-196b表達(dá)變化及其與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系

溫萍，陳盛鐸

(湖北省中醫(yī)院花園山院區(qū)，武漢430000)

microRNA(miRNA)是一類由內(nèi)源基因編碼、長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子。近年研究證實(shí)，miRNA通過(guò)調(diào)節(jié)癌基因或抑癌基因表達(dá)，調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化、凋亡，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[1，2]。miR-196b是miRNA家族成員之一，在胃癌、結(jié)直腸癌、肺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)，并且其高表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)，具有促癌基因作用[3]。本研究分析肝癌組織miR-196b表達(dá)變化及其表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)和預(yù)后的關(guān)系，探討miR-196b在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1　臨床資料

1.1基本資料研究對(duì)象為2012年7月～2014年6月湖北省中醫(yī)院花園山院區(qū)收治的首診肝癌患者137例，男109例、女28例，年齡(57.98±10.33)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～80歲；②經(jīng)過(guò)病理檢查、臨床評(píng)估和影像學(xué)檢查確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌；③擬行肝癌切除手術(shù)，術(shù)前未行任何抗腫瘤治療；④術(shù)后隨訪資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①繼發(fā)轉(zhuǎn)移性肝癌；②有肝移植史；③合并其他惡性腫瘤；④存在嚴(yán)重感染；⑤妊娠期或哺乳期婦女。肝功能Child-pugh分級(jí)：A級(jí)110例，B級(jí)27例；ECOG評(píng)分：0分90例，1分38例，2分5例，3分4例；相關(guān)病史：乙肝史109例，肝硬化史79例；腫瘤直徑：≥5 cm 68例，<5 cm 69例；病灶數(shù)量：?jiǎn)伟l(fā)79例，多發(fā)58例；BCLC分期：A期59例，B期29例，C期31例；有靜脈侵犯49例，無(wú)靜脈侵犯88例。術(shù)后采用門診或電話等方式隨訪，隨訪截止至2017年6月30日，隨訪時(shí)間30(1～60)個(gè)月，患者總體生存期(OS)為31(1～60)個(gè)月。本研究經(jīng)湖北省中醫(yī)院花園山院區(qū)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。本研究統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以M(P25～P75)表示，結(jié)果比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)或Kruskal-WallisH秩和檢驗(yàn)。生存分析采用Kaplan-Meier法，生存率比較采用Log Rank檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2癌組織及其癌旁組織miR-196b表達(dá)情況取手術(shù)切除的肝癌組織及其配對(duì)的癌旁正常組織(距腫瘤邊緣3～5 cm)，采用qRT-PCR法檢測(cè)miR-196b表達(dá)，以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-196b相對(duì)表達(dá)量。本組患者肝癌組織miR-196b相對(duì)表達(dá)量為1.853(1.173～4.706)，癌旁正常組織為1.032(0.451～1.886)，二者比較P<0.01。肝癌組織miR-196b相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)為1.853，以此為截?cái)嘀?，肝癌患者miR-196b高表達(dá)者69例、低表達(dá)者68例。

1.3肝癌組織miR-196b表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系見(jiàn)表1。

表1　　　　肝癌組織miR-196b表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系[M(P25～P75)]

1.4癌組織miR-196b表達(dá)與患者OS的關(guān)系69例miR-196b高表達(dá)者與68例低表達(dá)者OS分別為21(1～58)個(gè)月、40.5(4～60)個(gè)月，二者比較P<0.01。

2　討論

研究證實(shí)， miRNA能通過(guò)與靶基因3′端非翻譯序列結(jié)合促進(jìn)靶基因降解或抑制目標(biāo)mRNA翻譯過(guò)程，從而抑制靶基因表達(dá)[4]；能通過(guò)調(diào)控AKT/ERK通路、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化、促癌基因IGF-Ⅱ和IGF-IR表達(dá)以及神經(jīng)白細(xì)胞素等調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、調(diào)亡，影響腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5，6]。miR-196分為具有序列同源性的miR-196a和miR-196b，后者位于同源框蛋白(HOX)A9和HOXA10基因區(qū)間的一個(gè)高度進(jìn)化的保守區(qū)域，定位于人類染色體7p15.2[7]。miR-196b在啟動(dòng)子甲基化不足時(shí)，可導(dǎo)致miR-196b在胃癌組織或胃癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)[8]； miR-196b高表達(dá)還可增加胃癌MKN28細(xì)胞的侵襲能力，其機(jī)制可能與調(diào)控PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路有關(guān)[9]。Yu等[10]研究發(fā)現(xiàn)，miR-196b可通過(guò)HOXA9的異位表達(dá)誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲和遷移；miR-196b過(guò)表達(dá)可提高HOXA10基因的表達(dá)，從而促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲和遷移[11]。以上研究提示，miR-196b可通過(guò)調(diào)控多種通路或蛋白促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖并抑制其凋亡。本研究結(jié)果顯示，肝癌組織miR-196b相對(duì)表達(dá)量明顯高于癌旁正常組織；肝癌組織miR-196b相對(duì)表達(dá)量與腫瘤直徑、靜脈侵犯有關(guān)。提示miR-196b可能作為癌基因參與肝癌的發(fā)生、發(fā)展；miR-196b表達(dá)越高，肝癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移能力越強(qiáng)，與既往研究[8～11]結(jié)果類似。

有研究發(fā)現(xiàn)，多種惡性腫瘤組織miR-196b表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)，miR-196b表達(dá)越高，患者預(yù)后越差[12，13]。Kanno等[14]分析了248例胰腺癌患者miRNA基因表達(dá)矩陣發(fā)現(xiàn)，在胰腺癌組織中miR-196b是上調(diào)幅度最大的miRNA，且其高表達(dá)與患者預(yù)后差有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，肝癌組織miR-196b高表達(dá)者中位OS明顯低于miR-196b低表達(dá)者，說(shuō)明miR-196b高表達(dá)與肝癌患者預(yù)后有關(guān)。其原因可能為miR-196b能通過(guò)調(diào)節(jié)多個(gè)靶基因，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分化、增殖、遷移，進(jìn)而影響肝癌患者病情。有研究發(fā)現(xiàn)，miR-196b表達(dá)下調(diào)可提高患者對(duì)5-氟尿嘧啶的化療敏感性[15]。因此推測(cè)，miR-196高表達(dá)有可能降低肝癌化療藥物敏感性，繼而導(dǎo)致患者預(yù)后不良。

綜上所述， miRNA-196b可促進(jìn)肝癌的發(fā)生及發(fā)展。本研究的不足為樣本量較小、隨訪時(shí)間較短。

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