急性腦出血患者血清TSP-1/2、MMP-2/9水平變化及其與腦血腫量、腦水腫量的關(guān)系

朱明建，陳禮剛，李祥龍，楊福兵

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，四川瀘州646000)

急性腦出血(ACH)后血腫組織周圍常出現(xiàn)水腫，并可在ACH早期時形成，也是導(dǎo)致患者神經(jīng)功能缺損不斷加重的一個重要因素[1]。腦水腫的形成及進展由多種分子機制共同參與，而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)可能也參與其中[2]。MMP成員MMP-2、MMP-9能夠降解機體中血管的基底膜，還可促使中性粒細(xì)胞不斷遷移，使局部的炎癥反應(yīng)不斷加重，最終導(dǎo)致血腦屏障的結(jié)構(gòu)受損而引起腦水腫。有報道指出，MMP表達(dá)還會受到血小板反應(yīng)蛋白(TSP)的調(diào)控，提示血腦屏障被破壞的機制可能還與TSP調(diào)控有關(guān)[3,4]。TSP-1和TSP-2均為TSP家族成員[5]。本研究觀察了ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平變化，并探討其與患者腦血腫量、腦水腫量的相關(guān)性。現(xiàn)報告如下。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2014年9月～2017年9月我院收治的ACH患者95例為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合我國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議上制定的關(guān)于ACH的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②經(jīng)頭顱CT檢查確診；③幕上腦實質(zhì)的出血未進入腦室；④在發(fā)病前無外傷史；⑤無抗凝藥物應(yīng)用史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有腦部腫瘤或其他惡性腫瘤；②血液系統(tǒng)疾??；③存在血管畸形；④神經(jīng)系統(tǒng)功能性缺陷；⑤其他全身性疾病。入組患者男41例、女54例，年齡32～75(54.67±2.34)歲，發(fā)病至入院時間1～10(4.94±0.33)h。合并高血壓74例、糖尿病12例。另選同期我院體檢健康者100例作為對照組，男49例、女51例，年齡30～72(54.59±2.28)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2相關(guān)指標(biāo)觀察

1.2.1血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平分別在對照組體檢當(dāng)日、觀察組入院當(dāng)日抽取空腹靜脈血約4 mL注入抗凝管內(nèi)，4 ℃下3 000 r/min離心15 min，分離血清。采用ELISA法檢測血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9，試劑盒均購自武漢博士德公司，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。

1.2.2ACH患者腦血腫量、腦水腫量在一塊10 cm×10 cm的透明塑料片中根據(jù)CT中比例尺長度，縱橫繪制成垂直交錯的檢測方格，方格邊長1 cm。根據(jù)體視學(xué)原理，方格直線交叉點表示面積為1 cm2。將檢測系統(tǒng)疊放于CT片上，統(tǒng)計落于血腫和四周水腫帶內(nèi)的測點數(shù)目，累加每層血腫或者水腫中的測點數(shù)即為腦血腫量或腦水腫量(mL)。

1.2.3相關(guān)性分析采用Spearman法分析血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平與腦血腫量、腦水腫量的關(guān)系。

2　結(jié)果

觀察組血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于對照組(P均<0.05)，見表1。觀察組腦血腫量、腦水腫量分別為(27.23±8.44)、(20.99±3.65)mL。Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，觀察組血清TSP-1與腦血腫量、腦水腫量均無相關(guān)性(P均>0.05)；TSP-2與腦血腫量呈負(fù)相關(guān)(r=-0.639，P<0.05)，與腦水腫量無相關(guān)性(P>0.05)；MMP-2與腦血腫量無相關(guān)性(P>0.05)，與腦水腫量呈正相關(guān)(r=0.582，P<0.05)；MMP-9與腦血腫量、腦水腫量均呈正相關(guān)(r分別為0.589、0.630，P均<0.05)。

表1　　　　兩組血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

3　討論

血管壁細(xì)胞外基質(zhì)降解增強是ACH發(fā)生的重要病理生理基礎(chǔ)[6,7]。研究證實，MMP參與降解機體各類組織細(xì)胞外基質(zhì)的過程， 能夠不斷降解細(xì)胞外基質(zhì)中含有的層粘連蛋白、纖維連接類蛋白及Ⅳ型膠原，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)蛋白密度降低[8,9]。MMP-2及MMP-9均為MMP家族的重要成員。TSP屬于調(diào)節(jié)型基質(zhì)糖蛋白家族，其是調(diào)控MMP表達(dá)的上游分子。

研究證實，正常的細(xì)胞既可分泌MMP，還可形成金屬蛋白酶有關(guān)的組織抑制劑。但發(fā)生ACH后機體的MMP與金屬蛋白酶有關(guān)組織抑制劑的動態(tài)平衡被打破，腦病變組織MMP-2及MMP-9水平明顯上升[10,11]。TSP-1和TSP-2是一組結(jié)構(gòu)及功能均高度相關(guān)的一類調(diào)節(jié)型基質(zhì)糖蛋白有關(guān)家族成員，二者通常是由被激活的血小板和內(nèi)皮細(xì)胞以及神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞所分泌[12]。ACH患者顱內(nèi)由于受到病變區(qū)環(huán)境的刺激，TSP-1和TSP-2的分泌均明顯增加，但TSP-1還具有針對MMP的雙重調(diào)控作用。本研究結(jié)果顯示，觀察組入院當(dāng)日血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均高于對照組；觀察組血清TSP-1與腦血腫量、腦水腫量均無相關(guān)性；TSP-2與腦血腫量呈負(fù)相關(guān)，與腦水腫量無相關(guān)性；MMP-2與腦血腫量無相關(guān)性，與腦水腫量呈正相關(guān)；MMP-9與腦血腫量、腦水腫量均呈正相關(guān)。提示ACH患者血清TSP、MMP水平與腦血腫和腦水腫關(guān)系密切。可能原因是激活的MMP-2、MMP-9攻擊血腦屏障中的基底膜，降解細(xì)胞外基質(zhì)中的各類蛋白成分，破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性，增大血管的通透性，促使毛細(xì)血管中的水分及血漿蛋白不斷外滲，增加細(xì)胞間隙中的水分，最終促進腦血腫和腦水腫的產(chǎn)生[13，14]。

教師可從實驗動物、觀察指標(biāo)和采取水樣等三方面進行一定創(chuàng)新改進。實驗動物可從金魚拓展為水蚤，用水蚤代替金魚有以下好處：成本更低；方便多次重復(fù)實驗；學(xué)生在上個學(xué)期已經(jīng)接觸過水蚤，對水蚤已經(jīng)有一定了解；通過觀察水蚤心率來了解水蚤活動情況，以量化數(shù)據(jù)代替表象觀察更具有說服力。采取水樣方面也可不僅限于附近河水和不同比例不同pH的氨水溶液，也可拓展為含有不同污染物（如殺蟲劑、洗滌劑等）的水樣，幫助學(xué)生更直接體會到水質(zhì)污染對水生小動物的影響。

綜上所述，ACH患者血清TSP-1、TSP-2、MMP-2、MMP-9水平均升高，并與患者腦血腫量及腦水腫量密切相關(guān)。臨床上可將上述指標(biāo)作為監(jiān)測靶點用于輔助評估ACH患者的腦血腫量及腦水腫量。

參考文獻(xiàn)：

[1] 司賢峰.醒腦靜注射液對急性腦出血患者血液細(xì)胞因子水平的影響[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2017,20(1):112-113.

[2] 許登明.二丁酰環(huán)磷腺苷鈣聯(lián)合依達(dá)拉奉治療急性腦出血的療效[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志,2017,4(26):5112-5113.

[3] 曾慶銀.超早期強化降壓治療對基底節(jié)區(qū)腦出血患者血漿MMP-9及神經(jīng)功能的影響[J].醫(yī)學(xué)理論與實踐,2017,30(21):3173-3175.

[4] 何效平,江承平,王柏強,等.抑肽酶對腦出血大鼠凝血酶敏感蛋白的影響[J].中國藥業(yè),2015,24(21):22-24.

[5] 鄭晨宏.靶向CD47及其配體TSP-1/SIRPα在免疫及損傷應(yīng)答中的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2015,21(22):4042-4044.

[7] 陳柏林,邢之華,唐濤,等.益氣活血法對腦出血大鼠腦內(nèi)凝血酶敏感蛋白-1及其受體CD36表達(dá)的影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2011,27(4):342-345.

[8] 郭清保,謝曼麗,楊彥龍,等.腦血疏口服液聯(lián)合依達(dá)拉奉對高血壓腦出血的治療效果及對血清IL-6、IL-1β、MMP-9的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展,2017,17(21):4071-4074.

[9] Gao JB, Tang WD, Wang HX, et al. Predictive value of thrombospondin-1 for outcomes in patients with acute ischemic stroke[J]. Clin Chim Acta, 2015,23(450):176-180.

[10] 盧俏麗,李晨,賈志榮,等.炎癥介質(zhì)hs-CRP、IL-6和MMP-9水平與腦微出血的相關(guān)性研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2017,46(26):3629-3631.

[11] 張方,李文杰.基質(zhì)金屬蛋白酶-9與急性腦出血后腦水腫的相關(guān)性研究[J].中國實用神經(jīng)疾病雜志,2016,19(7):77-79.

[12] 彭形,羅超,肖剛,等.高血壓腦出血患者急性期血清TSP1/2、MMP2/9與腦血腫量及腦水腫量的關(guān)系研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2017,42(12):1649-1650.

[13] 楊洪清,羅飏.基質(zhì)金屬蛋白酶在腦出血發(fā)生發(fā)展中的作用及腦出血治療預(yù)后分析[J].河北醫(yī)藥,2017,39(2):211-213.

[14] Dong XQ, Yu WH, Zhu Q, et al.Changes in plasma thrombospondin-1 concentrations following acute intracerebral hemorrhage[J]. Clin Chim Acta, 2015,23(450):349-355.