• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    不同苧麻品種根際土壤細菌多樣性

    2018-04-19 01:53:00湯滌洛涂修亮潘國雄汪紅武
    西南農業(yè)學報 2018年3期
    關鍵詞:苧麻根型速效

    湯滌洛,涂修亮,潘國雄,熊 偉,汪紅武

    (1.咸寧市農業(yè)科學院,湖北 咸寧 437100;2.湖北省苧麻工程技術研究中心,湖北 咸寧 437100)

    【研究意義】微生物是地球上多樣性最高的生命形式[1],幾乎分布到地球上的所有生境[2],土壤中微生物數(shù)量龐大是最豐富的微生物資源庫[3],而細菌是土壤中數(shù)量最豐富、分布最廣泛的微生物類群[4],占有絕對優(yōu)勢[5-6]。土壤細菌廣泛參與土壤有機質積累,參與土壤中大多數(shù)養(yǎng)分的轉化[7-8],所以土壤細菌被作為評估土壤環(huán)境變化的指示型標志[9],與土壤理化性質、土壤深度等諸多因素有關[10]?!厩叭搜芯窟M展】傳統(tǒng)的土壤微生物培養(yǎng)方法存在著耗時、工作量大的缺點,并且大多數(shù)土壤微生物是不可培養(yǎng)的,從而導致無法全面了解土壤微生物信息[11]。Illumina高通量測序技術為人們認識土壤微生物多樣性提供了新的契機。Illumina測序技術不僅具有低成本、高通量和低錯誤率的優(yōu)點[12],還能夠快速、簡單、較準確地獲取土壤微生物信息?!颈狙芯壳腥朦c】本研究使用Illumina測序技術開展了不同根型苧麻土壤根際微生物多樣性研究?!緮M解決的關鍵問題】探討苧麻根際土壤細菌與土壤養(yǎng)分的關系,不同根型苧麻土壤細菌多樣性,不同根型苧麻土壤細菌在不同分類水平的優(yōu)勢類群、各類群相對豐度。為苧麻土壤微生物研究、土壤細菌與苧麻生產性狀相關性研究奠定基礎。

    1 材料與方法

    1.1 試驗地概況與試驗材料

    試驗于2016年1-12月在咸寧市農業(yè)科學院崇陽縣白霓鎮(zhèn)山坡地示范基地進行。

    供試苧麻品種分別為湖南中科院麻類研究所的深根型湘苧三號,湖北華中農業(yè)大學的中根型華苧四號,湖南張家界的淺根型黃殼麻。

    1.2 試驗設計

    試驗區(qū)3個處理分別(深根型湘苧三號、淺根型黃殼麻、中根型華苧四號)采用隨機區(qū)組排列,3次重復,共9個小區(qū),其投影面積85 m2(17 m×5 m),種苗全部采用統(tǒng)一繁殖的嫩梢扦插苗,2012年4月移栽。苧麻山坡地管理采用苧麻栽培一般管理方法執(zhí)行。2016年采集不同品種苧麻根際土壤,每個小區(qū)多點取樣充分混勻,每份土樣分為2份,1份測土壤理化性質,1份用于分子生物學研究。

    1.3 測定項目及方法

    1.3.1 土壤成分的測定 土壤理化性質試驗于2016年三麻測產后分別取 0~20 cm土層混合土樣進行分析,分析方法為: 土壤有機質采用重鉻酸鉀-氧化還原滴定外加熱法;土壤速效磷采用 NaHCO3浸提-鉬銻抗吸光光度法;土壤速效氮含量用堿解堿解擴散法;土壤速效鉀采用醋酸銨浸提-火焰光度法測定;pH值用酸度劑測定法進行測定。

    1.3.2 土壤微生物總DNA提取及細菌的高通量測序 采用MOBIO公司的強力土壤 DNA 提取試劑盒提取土壤微生物基因組DNA。所提取的土壤總 DNA 濃度和純度經過核酸定量儀(NanoDrop ND-1000)檢測并純化后送至上海歐易生物公司進行測序。其測序步驟如下:根據(jù)測序區(qū)域的選擇,使用帶 Barcode 的特異引物,KAPA 公司的 HiFi Hot Start Ready Mix 高保真酶進行 PCR,確保擴增效率和準確性。細菌多樣性鑒定對應區(qū)域:16S V3-V4 區(qū),采用引物343F(5'-TACGGRAGGCAGCAG-3')和798R(5'-AGGGTATCTAATCCT-3')PCR 產物使用電泳檢測,檢測后使用磁珠純化,純化后作為二輪 PCR 模板,并進行二輪 PCR 擴增,并再次使用電泳檢測,檢測后使用磁珠純化,純化后對 PCR 產物進行 Qubit 定量。根據(jù) PCR 產物濃度進行等量混樣,并上機測序。

    1.4 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法

    使用 Trimmomatic 軟件對原始雙端序列進行去雜。去雜后的雙端序列利用 FLASH 軟件進行拼接。同時,利用 usearch 檢測并去除序列中的嵌合體序列。

    測序數(shù)據(jù)進行預處理生成優(yōu)質序列之后,采用 UPARSE 軟件,序列相似度大于或等于 97 %,將序列歸1個OTU(Operational taxonomic units)。使用 QIIME 軟件包挑選出各個 OTU 的代表序列并統(tǒng)計每個OTU中的豐度信息。利用 QIIME 軟件計算Chao1指數(shù)[13]、Shannon指數(shù)[14]和 Simpson 指數(shù)[15]。通過 SPSS 17.0[16]軟件進行相關性分析。

    2 結果與分析

    2.1 不同根型苧麻種植地土肥狀況

    從表 1 可知,不同根型苧麻種植山坡地土壤的有機質、速效氮有顯著性差,且中根型(B)最低。但是中根型(B)速效磷含量在3個品種是最高,并達到顯著性差異。速效鉀含量深根型(A)最高,有機碳淺根型(C)最高,pH值相差不大。

    表1 不同根型苧麻種植山坡地土壤養(yǎng)分比較

    注:數(shù)值為平均數(shù)±標準誤,不同字母表示差異顯著(α=0.05)。下同。

    Note: Data in the table are mean±SE. Different small letters in the same row mean significant difference at 0.05 level among treatments.

    表2不同處理土壤細菌序列讀數(shù)(reads)及OTUs數(shù)

    Table 2 Reads and OTUs numbers of soil bacteria sequences in the different treatments

    處理Treatment序列讀數(shù)ValidreadsOTUs數(shù)OUTs_counts深根型(A)28001±5311a2793±192a中根型(B)28416±4115a2473±153ab淺根型(C)28046±6452a2255±99b

    2.2 土壤樣品測序

    2.2.1 測序 通過測序將9個樣品中原始序列過濾掉低質量的序列后再拼接得到有效序列總數(shù)為278 279,根據(jù)Barcode標簽進行樣品序列拆分,在對初始序列進行去冗余處理后獲得257 100條Reads,然后在97 %相似度下將其聚類為用于物種分類的OTU并統(tǒng)計,得出9個樣品共產生24 268個OTUs,測序讀長在 139~543 bp,平均測序長度在420 bp左右。每個處理的序列讀數(shù)數(shù)量如表2 所示。深根型(A)處理土壤含有最多數(shù)量的OTUs,其次是中根型(B)處理, 淺根型(C)處理OTUs數(shù)量最少。與深根型(A)相比,淺根型(C)處理土壤OUTs數(shù)量減少19.26 %,中根型(B)處理減少14.79 %。

    2.2.2 OUT統(tǒng)計的圖形化展示 Venn 圖可直觀地表現(xiàn)出不同處理間 OTU的重疊情況[11],而不同 OTU 代表不同物種,所以共有的OTU越多表示共有的細菌類群越多。從圖1可以看出,不同處理之間共有的細菌 OTU 數(shù)目為459 個。深根型(A)與中根型(B)共有OTU 數(shù)目最多623個,其次深根型(A)與淺根型(C)OTU 數(shù)目614個,中根型(B)與淺根型(C)OTU 數(shù)目522個。說明深根型(A)與中根型(B)共有的細菌類群最多(圖1)。

    圖1 不同處理土壤細菌Venn圖Fig.1 Venn diagrams of soil bacterial in the different treatments

    2.3 土壤細菌群落多樣性分析

    2.3.1 Alpha 多樣性分析 Alpha 多樣性指數(shù)包括Observed Species、Shannon 指數(shù)、Chao 指數(shù)、Goods Coverage、Simpson 指數(shù)等。Good’s Coverage(Good’s nonparametic Coverage Estimator)指數(shù)用來反映測序深度,首先由 Warren[17]提出;Observed Species 由樣品序列來表征觀測物種的多樣性指數(shù);Chao指數(shù)用來估計群落中實際存在的物種數(shù),其計算方法參見文獻[13]; Shannon指數(shù)反映樣品的多樣性程度,其值越高表明群落物種的多樣性越高;Simpson指數(shù)反映了物種的優(yōu)勢度。本研究在97 %相似度下,選取平均序列為25 010條的序列計算多樣性指數(shù)(表3)。

    表3 不同處理土壤細菌豐富度及多樣性指數(shù)

    表4 土壤細菌群落多樣性指數(shù)與土壤理化因子的相關性分析

    注:*:顯著相關(P<0.05);**:極顯著相關(P<0.01)。

    Note:*:Significant level at 0.05 level; **:Significant level at 0.01 level.

    3個處理中Good’s Coverage指數(shù)大于0.930接近1,表明測序深度基本已經覆蓋樣品中所有的物種。并且深根型(A處理)Observed species顯著高于其他2個處理12.31 %,18.52 %。深根型(A處理)Chao 指數(shù)顯著高于淺根型(C處理)13.86 %,與中根型(B)差異不顯著。深根型(C處理)Shannon指數(shù)顯著高于中根型(B),與淺根型(C處理)差異不顯著。3個處理間的Simpson 指數(shù)差異不明顯。Observed species指數(shù)、Chao 指數(shù)、Shannon指數(shù)、Simpson 指數(shù)總體上呈現(xiàn)深根型(A處理)高于其他2個處理,說明深根型處理土壤細菌種群豐富度、土壤細菌優(yōu)勢度高于其他2種處理。

    2.3.2 細菌多樣性與土壤理化因子的相關性分析 由表4可知,Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)與pH值呈顯著負相關關系,與有機碳呈顯著正相關關系,與有機質、速效氮、速效鉀呈正相關關系,與速效磷呈負相關關系。Chao 指數(shù)與有機碳、pH值呈顯著負相關關系,與有機質、速效氮呈負相關關系,于速效磷、速效鉀呈正相關關系??傮w來看,土壤細菌多樣指數(shù)與有機碳、pH值相關性較高,與速效鉀呈正相關關系。

    2.4 樣品群落組成分析

    2.4.1 細菌門分類水平的比較 在門分類水平上,3種不同根型苧麻根際土壤細菌分布在23個已知細菌門,1個未分類群體。由圖2可知,在3個處理中含量最高的門是擬桿菌門(Bacteroidetes),其深根型(A)、中根型(B)、淺根型(C)相對豐度依次為(平均數(shù)47.39)48.59 %、47.24 %、46.34 %;其次是厚壁菌門(Firmicutes)相對豐度依次為(平均數(shù)36.57)36.18 %、36.84 %、 36.68 %;變形菌門(Proteobacteria)相對豐度依次為(平均數(shù)11.45)10.80 %、11.24 %、12.31 %;而其他菌類比例相對較低,例如放線菌門Actinobacteria,梭桿菌門Fusobacteria,綠菌門Chlorobi等。表明在3 種不同根型苧麻根際土壤細菌中,擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門為三大優(yōu)勢菌群(相對豐度>10 %),三者豐度之和達到95 %以上,而其他細菌類群為非優(yōu)勢菌群。

    圖2 細菌群落門組成Fig.2 Composition of soil bacteria at phylum level

    2.4.2 細菌綱分類水平的比較 在綱的分類水平上,共得到40 個已知的細菌綱。如圖3所示,擬桿菌綱(Bacteroidia),梭菌綱(Clostridia),芽孢桿菌綱(Bacilli),γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria),α-變形菌綱(Alphaproteobacteria),ε-變形菌綱(Epsilonproteobacteria),B-變形菌綱(Betaproteobacteria),放線菌綱(Actinobacteria)類群等在細菌綱中相對豐度較大,相對豐度之和在 3 個處理土壤樣品中均占到土壤細菌總量的 80 %以上。相對豐度>10 %的優(yōu)勢綱為擬桿菌綱(Bacteroidia),梭菌綱 (Clostridia),芽孢桿菌綱(Bacilli);除極少數(shù)相對豐度極低的細菌綱,如熱原體綱(Thermoplasmata)、硝化螺旋菌綱(Nitrospira)、迷蹤菌綱(Elusimicrobia)等在3個處理 中的分布有所差異,其余已知豐度高的優(yōu)勢細菌綱在 3 個不同根型處理中均有分布。

    圖3 細菌群落綱組成Fig.3 Composition of soil bacteria at class level

    圖4 細菌群落屬組成Fig.4 Composition of soil bacteria at genus level

    2.4.3 細菌屬分類水平的比較 在屬分類水平上共得到289種細菌類群,優(yōu)勢屬(相對豐度>1 %)有18個,如圖4所示,其中含量最高的是Other,在3個處理中相對豐度分別為21.19 %,24.86 %,22.13 %;其次是不可培養(yǎng)細菌(uncultured bacterium),不可培養(yǎng)的擬桿菌屬(unculturedBacteroidalesbacterium),乳酸桿菌屬(Lactobacillus),含糊不清的分類群(Ambiguous taxa),毛螺菌科NK4A136組(Lachnospiraceae NK4A136 group),普雷沃氏菌屬9組(Prevotella 9),不可培養(yǎng)菌屬(uncultured),擬桿菌屬等(Bacteroides),擬普雷沃菌屬(Alloprevotella),葡萄球菌屬(Staphylococcus)。

    3 討 論

    本研究利用 Illumina MiSeq 測序技術通過對16S rRNA 基因的 V3~V4 高變區(qū)的測序分析,成功檢測了不同根型苧麻根際土壤細菌群落結構的多樣性,獲得了較全面的菌群信息。得到有效序列的總數(shù)為278 279,257 100條讀數(shù)(reads),30 664個OTUs。測序讀長在 139~543 bp 之間,平均測序長度在420 bp左右。深根型(A)處理土壤含有最多數(shù)量的OTUs,其次是中根型(B)處理, 淺根型(C)處理OTUs數(shù)量最少。與深根型(A)相比,淺根型(C)處理土壤OTUs數(shù)量減少17.70 %,中根型(B)處理減少10.85 %。

    Venn 圖表明不同處理之間共有的細菌 OTU 數(shù)目為459 個。深根型(A)與中根型(B)共有OTU 數(shù)目最多623個,其次深根型(A)與淺根型(C)OTU 數(shù)目614個,中根型(B)與淺根型(C)OTU 數(shù)目522個。說明深根型(A)與中根型(B)共有的細菌類群最多。

    王伏偉、楊娟等[18-19]的研究表明土壤理化性質對土壤細菌群落組成有顯著的影響。本文Shannon 指數(shù)、Simpson 指數(shù)與PH值呈顯著負相關關系,與有機碳呈顯著正相關關系,與有機質、速效氮、速效鉀呈正相關關系,與速效磷呈負相關關系。Chao 指數(shù)與有機碳、pH值呈顯著負相關關系,與有機質、速效氮呈負相關關系,于速效磷、速效鉀呈正相關關系??傮w來看,土壤細菌多樣指數(shù)與有機碳、pH值相關性較高,與速效鉀呈正相關關系。

    樣品群落組成分析表明每個處理的土壤根際細菌優(yōu)勢門(相對豐度>10 %)、優(yōu)勢綱(相對豐度>10 %)、優(yōu)勢屬(相對豐度>1 %)基本相同。土壤細菌優(yōu)勢門(相對豐度>10 %)擬桿菌門(Bacteroidetes)、厚壁菌門(Firmicutes)和 變形菌門(Proteobacteria);優(yōu)勢綱(相對豐度>10 %)擬桿菌綱(Bacteroidia),梭菌綱 (Clostridia),芽孢桿菌綱(Bacilli);優(yōu)勢屬(相對豐度>1 %)有18個。

    本研究還發(fā)現(xiàn)苧麻根際土壤細菌中還有很多未分類物種,但其功能和特點尚不清楚,有待更深入的研究探索。

    參考文獻:

    [1]Fierer N,Jackson R B. The diversity and biogeography of soil bacterial communities[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, USA,2006,103: 626-631.

    [2]郭良棟.中國微生物物種多樣性研究進展[J].生物多樣性,2012,20(5):572-580.

    [3]蔡晨秋,唐 麗,龍春林. 土壤微生物多樣性及其研究方法綜述[J].安徽農業(yè)科學,2011,39(28):17274-17276.

    [4]周德慶. 微生物學教程[M]. 北京:高等教育出版社,1993:281-282.

    評估城市綜合災害風險,首先要根據(jù)城市災害風險的可接受程度,對城市災害風險的等級進行劃分,構建城市綜合災害風險評語集。具體評價標準如表2所示。

    [5]顧峰雪,文啟凱,潘伯榮,等.塔克拉瑪干沙漠腹地人工植被下土壤微生物的初步研究[J]. 生物多樣性,2000(8): 297-303.

    [6]趙先麗,周廣勝,周 莉,等.盤錦蘆葦濕地土壤微生物特征分析[J]. 氣象與環(huán)境學報,2006,22(4):64-67.

    [7]吳建峰,林先貴.土壤微生物在促進植物生長方面的作用J].土壤,2003,35(1):18-21.

    [8]陳國華,弭寶彬,李 瑩,等.轉 mapk 雙鏈 RNA 干擾表達載體黃瓜對根際土壤細菌多樣性的影響[J]. 生態(tài)學報,2013,33(4):1091-1097.

    [9]Nacke H, Thürmer A, Wollherr A, et al.Pyrosequenc-ing-based assessment of bacterial community structure along different management types in German forest and grassland soils[J].PLoS ONE,2011(6): 0-17.

    [10]Sharma S K,Ramesh A,Sharma M P,et al.Microbial community structure and diversity as indicators for evaluating soil quality//Lichtfouse E. ed.Biodiversity,Biofuels,Agroforestry and Conservation Agriculture[J]. Springer Netherlands, 2010(5): 317-358.

    [11]曹萬舉, 隋 心,韓士杰,等.分子生物學技術在土壤微生物多樣性中的應用[J]. 生物過程,2013(3):23-28.

    [12]Chen H,Boutros P C. Venn Diagram: a package for the generation of highly-customizable Venn and Euler diagrams in R[J].BMC Bioinformatics,2011,12(1): 35.

    [13]Chao A N. Non-parametric estimation of the number of classes in a population[J]. Scandinavian Journal of Statistics,1984,11(4): 265-270.

    [14]Hill M O.Diversity and evenness: a unifying notation and its consequences[J]. Ecology, 1973,54(2): 427-432.

    [15]Esty W W. The efficiency of Good’s nonparametric coverage estimator[J]. The Annals of Statistics, 1986,14(3): 1257-1260.

    [16]Landau S, Everitt B S. A Handbook of Statistical Analyses Using SPSS[M]. Florida: Chapman & Hall,2004.

    [17]Esty W W. The Efficiency of Good's Nonparametric Coverage Estimator[J]. Annals of Statistics,1986,14(3): 1257-1260.

    [18]王伏偉,王曉波,李金才,等.施肥及秸稈還田對砂姜黑土細菌群落的影響[J]. 中國生態(tài)農業(yè)學報, 2015, 23(10):1302-1311.

    [19]楊 娟,郝志成,張亞平. 基于MiSeq測序分析新疆泥火山土壤細菌群落多樣性[J]. 微生物學通報, 2016,43(12):2609-2618.

    猜你喜歡
    苧麻根型速效
    不同殺螨劑對柑桔紅蜘蛛速效與持效性防治田間試驗
    體外產氣法和尼龍袋法評定苧麻的飼用價值
    土壤速效鉀測定方法的影響因素
    綠色科技(2016年16期)2016-10-11 06:53:51
    苧麻葉面積測定方法比較研究
    懸鈴葉苧麻基因組DNA的六種提取方法比較
    神經根型頸椎病的手術治療
    施用不同有機物料對山地果園紅壤速效氮磷鉀含量的影響
    基于苧麻屬野生近緣種形態(tài)變異類型的系統(tǒng)關系研究
    豫中植煙區(qū)土壤速效養(yǎng)分的空間變異分析
    針藥結合治療神經根型頸椎病32例
    菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 99热全是精品| 免费大片18禁| 最黄视频免费看| 女人久久www免费人成看片| 久久久a久久爽久久v久久| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 日本av手机在线免费观看| 久久久久久久精品精品| 免费观看性生交大片5| 国产精品女同一区二区软件| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产男女内射视频| 视频区图区小说| 国产福利在线免费观看视频| av有码第一页| 久久久久久久久久成人| 国产高清三级在线| 久久精品国产a三级三级三级| 国产 精品1| 99久国产av精品国产电影| 欧美国产精品va在线观看不卡| 婷婷色综合www| 久久精品久久精品一区二区三区| 搡老乐熟女国产| 精品久久蜜臀av无| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 婷婷色麻豆天堂久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 91精品伊人久久大香线蕉| 搡老乐熟女国产| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 成人午夜精彩视频在线观看| 18禁观看日本| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美国产精品va在线观看不卡| 亚洲高清免费不卡视频| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品女同一区二区软件| 欧美少妇被猛烈插入视频| 九色成人免费人妻av| 各种免费的搞黄视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲精品,欧美精品| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产精品不卡视频一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 少妇的逼水好多| 亚洲欧美成人精品一区二区| 在线免费观看不下载黄p国产| 一二三四在线观看免费中文在 | 亚洲av免费高清在线观看| 久久久久久久精品精品| 观看美女的网站| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 九九在线视频观看精品| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产av精品麻豆| 在线天堂最新版资源| 亚洲成色77777| 亚洲性久久影院| 久久久久精品人妻al黑| 久久久国产精品麻豆| 另类亚洲欧美激情| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 欧美+日韩+精品| 国产在线免费精品| 全区人妻精品视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 成人二区视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 成人二区视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产亚洲一区二区精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲精品国产av成人精品| av在线播放精品| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲成人手机| 国产老妇伦熟女老妇高清| 99九九在线精品视频| 日韩免费高清中文字幕av| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久青草综合色| 在线观看免费高清a一片| 国产综合精华液| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 色婷婷av一区二区三区视频| 中国三级夫妇交换| 大码成人一级视频| xxx大片免费视频| 国产成人91sexporn| 各种免费的搞黄视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲国产av影院在线观看| 18在线观看网站| 免费观看av网站的网址| 国产成人精品久久久久久| 中文天堂在线官网| 一级片免费观看大全| 精品福利永久在线观看| 中文天堂在线官网| 寂寞人妻少妇视频99o| 成人毛片60女人毛片免费| 一级,二级,三级黄色视频| 国产熟女欧美一区二区| 日韩一区二区视频免费看| 在线观看一区二区三区激情| 十八禁高潮呻吟视频| 高清毛片免费看| 亚洲精品一区蜜桃| 男女午夜视频在线观看 | 欧美xxⅹ黑人| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产精品人妻久久久久久| 国产成人一区二区在线| 成年人免费黄色播放视频| 亚洲成色77777| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲一码二码三码区别大吗| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲第一区二区三区不卡| 成人毛片60女人毛片免费| 2022亚洲国产成人精品| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 日本午夜av视频| a级毛片在线看网站| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美日韩成人在线一区二区| 黄色配什么色好看| 一级片免费观看大全| 色吧在线观看| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲av.av天堂| 亚洲成国产人片在线观看| 日本wwww免费看| 日日撸夜夜添| 精品一区在线观看国产| 成人影院久久| 91精品国产国语对白视频| 老司机影院成人| 国产精品久久久久成人av| 久久午夜福利片| 亚洲综合精品二区| 精品久久久精品久久久| 亚洲av免费高清在线观看| 大香蕉久久网| 欧美+日韩+精品| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 捣出白浆h1v1| 久久国产精品大桥未久av| 插逼视频在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产不卡av网站在线观看| 在线天堂中文资源库| 黄色一级大片看看| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 日本wwww免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 咕卡用的链子| 99久国产av精品国产电影| 天堂俺去俺来也www色官网| 高清毛片免费看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 人妻一区二区av| 九九在线视频观看精品| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 天天操日日干夜夜撸| 国产精品无大码| 一区二区av电影网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产视频首页在线观看| 综合色丁香网| 9191精品国产免费久久| 咕卡用的链子| 麻豆乱淫一区二区| 男女午夜视频在线观看 | 一级,二级,三级黄色视频| 视频区图区小说| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲成人手机| 麻豆精品久久久久久蜜桃| tube8黄色片| 久久这里有精品视频免费| 考比视频在线观看| 在线天堂中文资源库| 亚洲成人av在线免费| 久久人妻熟女aⅴ| 波多野结衣一区麻豆| 女人精品久久久久毛片| 国产综合精华液| 国产精品久久久久久精品电影小说| 18禁观看日本| 国产伦理片在线播放av一区| 精品熟女少妇av免费看| 五月伊人婷婷丁香| 色哟哟·www| 午夜91福利影院| 国产精品国产三级国产专区5o| 日日啪夜夜爽| 日韩成人伦理影院| 精品熟女少妇av免费看| 人体艺术视频欧美日本| 视频在线观看一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久小说| 日韩中文字幕视频在线看片| 中国国产av一级| 9191精品国产免费久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产成人欧美| 欧美精品高潮呻吟av久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 婷婷色麻豆天堂久久| 久久久久视频综合| 国产精品一区二区在线不卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产乱来视频区| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99国产精品免费福利视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日本与韩国留学比较| 日韩中文字幕视频在线看片| 黄色毛片三级朝国网站| 国产日韩欧美视频二区| 夜夜爽夜夜爽视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 成人手机av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲精品国产av成人精品| 另类精品久久| 成年女人在线观看亚洲视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产成人a∨麻豆精品| 婷婷色av中文字幕| a级片在线免费高清观看视频| 日本免费在线观看一区| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产亚洲最大av| 97人妻天天添夜夜摸| 一个人免费看片子| 久久久久久久久久久免费av| 亚洲天堂av无毛| 搡老乐熟女国产| a级毛色黄片| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线天堂最新版资源| 五月玫瑰六月丁香| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩在线高清观看一区二区三区| 美女大奶头黄色视频| 草草在线视频免费看| 高清av免费在线| 最近手机中文字幕大全| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 国产欧美亚洲国产| 婷婷色麻豆天堂久久| 一级a做视频免费观看| 99九九在线精品视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 伦理电影大哥的女人| 精品久久蜜臀av无| av不卡在线播放| 精品亚洲成国产av| 老司机影院毛片| 我的女老师完整版在线观看| 高清不卡的av网站| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品不卡视频一区二区| freevideosex欧美| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 亚洲精品456在线播放app| 国产探花极品一区二区| 亚洲精品自拍成人| 97在线视频观看| a 毛片基地| 两个人免费观看高清视频| 波野结衣二区三区在线| av福利片在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久久国产精品麻豆| 人人妻人人澡人人看| 国产精品三级大全| av电影中文网址| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 久久久久久人人人人人| 十八禁网站网址无遮挡| 26uuu在线亚洲综合色| 在线观看免费高清a一片| av在线app专区| 国产精品一区二区在线观看99| 国产国语露脸激情在线看| 亚洲高清免费不卡视频| 少妇的逼水好多| 免费观看a级毛片全部| 国产精品久久久久成人av| 男女午夜视频在线观看 | 桃花免费在线播放| 精品久久久精品久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产免费福利视频在线观看| 一级毛片 在线播放| 咕卡用的链子| videos熟女内射| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 日本爱情动作片www.在线观看| 内地一区二区视频在线| 天堂中文最新版在线下载| 精品久久国产蜜桃| 激情视频va一区二区三区| 亚洲久久久国产精品| 男人操女人黄网站| 免费观看性生交大片5| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲四区av| 国产色爽女视频免费观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久久久视频综合| 亚洲国产精品成人久久小说| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 熟妇人妻不卡中文字幕| 一级,二级,三级黄色视频| 国产成人免费无遮挡视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 色网站视频免费| 国产一区亚洲一区在线观看| av女优亚洲男人天堂| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 少妇的逼好多水| 亚洲五月色婷婷综合| 人体艺术视频欧美日本| 中国三级夫妇交换| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 亚洲国产看品久久| 亚洲av中文av极速乱| 成人漫画全彩无遮挡| 美女视频免费永久观看网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 最近最新中文字幕免费大全7| 热99国产精品久久久久久7| 久久av网站| 美女国产视频在线观看| 国产精品国产三级国产专区5o| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲综合精品二区| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| freevideosex欧美| 亚洲精品久久午夜乱码| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久青草综合色| 国产精品国产av在线观看| 女人精品久久久久毛片| 亚洲av综合色区一区| 精品人妻偷拍中文字幕| 美女内射精品一级片tv| 国产成人一区二区在线| 777米奇影视久久| 婷婷成人精品国产| 久久免费观看电影| 亚洲精品国产av成人精品| 丝袜喷水一区| 五月伊人婷婷丁香| 日韩 亚洲 欧美在线| 最近中文字幕2019免费版| 精品一区在线观看国产| 久久精品国产a三级三级三级| 在线观看免费日韩欧美大片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久毛片免费看一区二区三区| 一级毛片 在线播放| 亚洲精品456在线播放app| 1024视频免费在线观看| 99九九在线精品视频| 久久这里有精品视频免费| 中国三级夫妇交换| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩在线高清观看一区二区三区| 色吧在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 黄片无遮挡物在线观看| 大香蕉97超碰在线| 国产av码专区亚洲av| 黄色怎么调成土黄色| 精品亚洲成国产av| 国产精品 国内视频| tube8黄色片| 久久99蜜桃精品久久| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品无大码| 久久午夜福利片| 考比视频在线观看| 欧美bdsm另类| 久久久久精品性色| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 女性被躁到高潮视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 最近手机中文字幕大全| 蜜桃在线观看..| 国产一区二区在线观看av| 熟女人妻精品中文字幕| 免费看光身美女| 亚洲国产欧美在线一区| 成人二区视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品免费大片| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 在线看a的网站| 国精品久久久久久国模美| 久久毛片免费看一区二区三区| 日本vs欧美在线观看视频| 曰老女人黄片| 国产一区二区激情短视频 | 秋霞伦理黄片| 中文天堂在线官网| 在线观看免费高清a一片| 精品一区二区三卡| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产在视频线精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美精品国产亚洲| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲av欧美aⅴ国产| 最近手机中文字幕大全| 国产探花极品一区二区| 午夜激情久久久久久久| 久久久久久人人人人人| 交换朋友夫妻互换小说| 国产1区2区3区精品| 午夜视频国产福利| 精品一区二区免费观看| 最近的中文字幕免费完整| 成人亚洲欧美一区二区av| 制服人妻中文乱码| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久99精品国语久久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美激情国产日韩精品一区| xxx大片免费视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 街头女战士在线观看网站| 免费观看无遮挡的男女| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 亚洲精品久久午夜乱码| 久久久久久久久久成人| 成人影院久久| tube8黄色片| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产精品无大码| 国产精品蜜桃在线观看| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久人人人人人| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 亚洲av在线观看美女高潮| 色婷婷av一区二区三区视频| tube8黄色片| 精品久久国产蜜桃| 国产成人午夜福利电影在线观看| 久久ye,这里只有精品| 国产精品人妻久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 国产在线视频一区二区| 黄色毛片三级朝国网站| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产成人av激情在线播放| 亚洲性久久影院| 日本爱情动作片www.在线观看| 成年人免费黄色播放视频| 综合色丁香网| 五月开心婷婷网| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产一区二区激情短视频 | 各种免费的搞黄视频| 成年女人在线观看亚洲视频| av天堂久久9| 免费看光身美女| 大码成人一级视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 黑人高潮一二区| 两个人免费观看高清视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久精品免费免费高清| av片东京热男人的天堂| 九九爱精品视频在线观看| 成人国语在线视频| 青春草视频在线免费观看| 久久久精品94久久精品| 91成人精品电影| 日韩中文字幕视频在线看片| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 9热在线视频观看99| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲精品色激情综合| 成人综合一区亚洲| 婷婷色综合大香蕉| 免费黄网站久久成人精品| 成人黄色视频免费在线看| 丝袜在线中文字幕| 中文欧美无线码| 飞空精品影院首页| 亚洲精品视频女| 久久久精品区二区三区| 18在线观看网站| 婷婷色av中文字幕| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜精品国产一区二区电影| av福利片在线| 高清毛片免费看| 国产麻豆69| 一个人免费看片子| 2018国产大陆天天弄谢| 日韩欧美一区视频在线观看| 街头女战士在线观看网站| 免费黄网站久久成人精品| 视频区图区小说| 日本91视频免费播放| 桃花免费在线播放| 欧美97在线视频| 中国国产av一级| 看免费成人av毛片| 美女内射精品一级片tv| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 韩国高清视频一区二区三区| 国产精品无大码| 中文字幕免费在线视频6| 亚洲国产av影院在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲欧洲日产国产| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产av国产精品国产| 免费高清在线观看日韩| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产精品一二三区在线看| 日日啪夜夜爽| 黑人高潮一二区| 赤兔流量卡办理| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲成人av在线免费| 国产片特级美女逼逼视频| 18在线观看网站| 久久久久久久大尺度免费视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产淫语在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲四区av| 国产黄色免费在线视频| 中文字幕亚洲精品专区| 成人国产av品久久久| 国产成人精品无人区| 国产精品国产三级国产专区5o| 香蕉国产在线看| 高清毛片免费看| 大片电影免费在线观看免费| 久久亚洲国产成人精品v| 国产av国产精品国产| 永久免费av网站大全| 亚洲图色成人| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产免费福利视频在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲美女搞黄在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品一区蜜桃| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 美女大奶头黄色视频| 男女午夜视频在线观看 | av.在线天堂| 18禁观看日本| 精品第一国产精品| 天天操日日干夜夜撸| 高清在线视频一区二区三区| xxxhd国产人妻xxx| 亚洲一区二区三区欧美精品| 午夜影院在线不卡|