探討HLA-B27陽(yáng)性率、TNF-α、CRP水平檢測(cè)對(duì)強(qiáng)直性脊柱炎的診斷價(jià)值

張成亮 ，朱寶林，吳建偉

(江蘇省沭陽(yáng)縣人民醫(yī)院骨科，江蘇宿遷 223600)

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種以慢性炎性反應(yīng)為主的全身性疾病，對(duì)機(jī)體全部的骶髂關(guān)節(jié)均可累及，患者時(shí)常會(huì)出現(xiàn)髖關(guān)節(jié)痛、腰腿痛，夜間疼痛感增加，且伴有晨僵[1]。由于患者普遍隱匿發(fā)病，導(dǎo)致人們對(duì)AS的關(guān)注度較低。目前，在臨床上對(duì)于AS的診斷主要通過(guò)影像學(xué)檢查以及臨床癥狀來(lái)判斷，但疾病早期其骨骼不會(huì)發(fā)生改變，從而使影像學(xué)特征不明顯，其臨床癥狀普遍與多種類風(fēng)濕性疾病相似，因此，在診斷中極易出現(xiàn)誤診與漏診情況[2]。目前對(duì)于AS尚無(wú)特異治療，因此抑制病情發(fā)展的關(guān)鍵在于早期準(zhǔn)確診斷，從而采取合理的治療。據(jù)相關(guān)研究顯示，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、C反應(yīng)蛋白(CRP)作為致炎因子，在AS患者血清中的水平與非AS患者相比均明顯升高[3]。近年來(lái)另有研究發(fā)現(xiàn)，人類白細(xì)胞抗原(HLA-B27)與多種脊柱關(guān)節(jié)病具有一定的相關(guān)性，且臨床已證實(shí)HLA-B27與AS具有密切的相關(guān)性[4]。因此，本研究通過(guò)檢測(cè)HLA-B27陽(yáng)性率、TNF-α以及CRP水平，探討HLA-B27陽(yáng)性率、TNF-α、CRP水平檢測(cè)對(duì)AS的診斷意義，為臨床治療提供客觀依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2015年9月至2017年3月在本院進(jìn)行治療的疑似110例AS患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在腰背疼痛或關(guān)節(jié)疼痛；(2)對(duì)本研究知情同意并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：在本研究前3個(gè)月使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物。經(jīng)過(guò)診斷其中80例符合AS診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，將其作為AS組，其中男59例，女21例，年齡16～48歲，平均(28.34±6.53)歲；剩余30例類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者作為對(duì)照組，其中男21例，女9例，年齡17～49歲，平均(29.53±6.49)歲。兩組患者性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法分別采集兩組患者空腹靜脈血5 mL，使用肝素進(jìn)行抗凝處理。加入30 μL的抗HLA-B27 FITC/CD3PE抗體與60 μL的肝素抗凝全血于測(cè)定管中，將其均勻混合后，室溫避光進(jìn)行15 min染色。加入2 mL的溶血素進(jìn)行離心處理后棄上清液，使用磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌1次，在進(jìn)行離心處理后棄上清液。加入0.5 mL含1%的多聚甲醛PBS懸浮細(xì)胞后將其置于8 ℃的環(huán)境中待檢。使用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HLA-B27陽(yáng)性率，按照試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定其界值，其結(jié)果判定使用HLA-B27軟件獲取15 000個(gè)下?lián)埽ㄟ^(guò)FSC-SSC的參數(shù)組合，區(qū)分以下3個(gè)群體，即外周血白細(xì)胞中的淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞。再設(shè)定1個(gè)CD3+T淋巴細(xì)胞門，進(jìn)行自動(dòng)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞B27的表達(dá)強(qiáng)度，當(dāng)其大于界值為陽(yáng)性，反之為陰性。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)兩組患者血清TNF-α、CRP水平。

1.3觀察指標(biāo)比較兩組患者HLA-B27陽(yáng)性率、血清TNF-α、CRP水平以及HLA-B27、TNF-α、CRP檢測(cè)對(duì)AS診斷的靈敏度、特異度與準(zhǔn)確性。

2　結(jié)　　果

2.1兩組患者HLA-B27陽(yáng)性率比較AS組中80例患者，檢測(cè)出76例患者為HLA-B27陽(yáng)性，其陽(yáng)性率為95%；對(duì)照組30例患者檢測(cè)結(jié)果均為陰性，陽(yáng)性率為0%，兩組HLA-B27陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=144.761，P<0.05)。

2.2兩組患者血清TNF-α、CRP水平比較兩組患者TNF-α、CRP水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1　　兩組患者血清TNF-α、CRP水平比較

2.3單項(xiàng)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AS的診斷價(jià)值比較檢測(cè)TNF-α、CRP水平的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確性均明顯低于HLA-B27檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2　　單項(xiàng)檢測(cè)與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)AS的診斷價(jià)值比較

注：與HLA-B27相比，△P<0.05

3　討　　論

AS是一類主要累及骶髂、脊柱關(guān)節(jié)的慢性炎性反應(yīng)疾病，其病因目前尚不明確，普遍認(rèn)為與環(huán)境和遺傳有關(guān)[6]。在青少年中較為常見(jiàn)，且男性多于女性，起病10年內(nèi)會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的關(guān)節(jié)功能障礙，具有較高的致殘率[7]。由于AS臨床癥狀無(wú)典型特點(diǎn)，而其診斷標(biāo)準(zhǔn)相對(duì)嚴(yán)格，若僅僅依賴影像學(xué)有所顯示時(shí)才就醫(yī)，患者通常已處于疾病中晚期，耽誤了治療時(shí)機(jī)。因此，在AS疾病早期對(duì)其進(jìn)行準(zhǔn)確的判斷具有重要的臨床意義。

TNF-α主要由單核細(xì)胞與巨噬細(xì)胞分泌產(chǎn)生，是介導(dǎo)自身免疫反應(yīng)的重要細(xì)胞因子，具有免疫調(diào)節(jié)作用，同時(shí)在炎性反應(yīng)中起重要作用[8]。據(jù)相關(guān)研究報(bào)道，在AS的發(fā)病機(jī)制中，TNF-α具有重要作用[9]。但本研究結(jié)果顯示，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者與AS患者血清TNF-α水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但均明顯高于正常值。提示TNF-α有可能參與了AS的發(fā)病機(jī)制。但若僅憑TNF-α水平升高來(lái)判定是否患有AS并不可靠。本研究結(jié)果顯示，TNF-α靈敏度僅為53.8%，且特異度較低。CRP為一種典型的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，存在于機(jī)體肝臟，可通過(guò)結(jié)合Fcγ受體清除免疫符合物以及凋亡的細(xì)胞碎片，同時(shí)可刺激單核細(xì)胞表面，調(diào)節(jié)其他免疫反應(yīng)；當(dāng)機(jī)體出現(xiàn)感染、損傷、炎性反應(yīng)時(shí)其水平會(huì)急速升高[10]。從本研究結(jié)果可見(jiàn)，AS患者血清CRP水平與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎相比無(wú)明顯變化。盡管有文獻(xiàn)顯示，CRP與AS的發(fā)生和發(fā)展具有一定關(guān)系，但僅依靠檢測(cè)CRP水平來(lái)診斷AS的靈敏度較低，且特異度也存在一定限制[11-12]，本研究結(jié)果也證實(shí)了這一觀點(diǎn)。HLA-B27是一種顯性遺傳標(biāo)記抗原，在免疫系統(tǒng)中可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)以及調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，同時(shí)可幫助細(xì)胞間相互識(shí)別；HLA-B27分子能夠與機(jī)體自身肽段相結(jié)合，使T細(xì)胞殺傷自身靶細(xì)胞，從而造成組織變性、器官受損[13-14]。多項(xiàng)研究顯示，HLA-B27的表達(dá)與AS具有高度的相關(guān)性，90%以上的AS患者其HLA-B27檢測(cè)均表現(xiàn)為陽(yáng)性，由此可見(jiàn)，檢測(cè)HLA-B27的表達(dá)能夠?yàn)锳S的早期診斷提供重要手段[15]。本研究結(jié)果也顯示，在80例AS患者中，有76例患者檢測(cè)為HLA-B27陽(yáng)性，其陽(yáng)性率可達(dá)到95%，在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中檢測(cè)HLA-B27則均為陰性。HLA-B27陽(yáng)性結(jié)果與臨床確診結(jié)果表現(xiàn)出高度的一致性，可見(jiàn)HLA-B27陽(yáng)性率對(duì)早期診斷AS具有重要的臨床意義。

綜上所述，TNF-α與CRP可參與AS的發(fā)生和發(fā)展，但仍無(wú)法使用患者血清TNF-α、CRP水平的升高來(lái)診斷患者是否患有AS。通過(guò)對(duì)HLA-B27陽(yáng)性率進(jìn)行檢測(cè)，可對(duì)AS的早期診斷與早期治療提供有效依據(jù)，具有重要的臨床價(jià)值。

[1]ZHAO Y H,CAO Y Y,ZHANG Q,et al.Role of diffusion-weighted and contrast-enhanced magnetic resonance imaging in differentiating activity of ankylosing spondylitis[J].Chin Med J(Engl),2017,130(11):1303-1308.

[2]GAYDUKOVA I Z,REBROV A P,APARKINA A V,et al.Stable high interleukin-17A concentration in patients with ankylosing spondylitis treated with tumor necrosis factor-α inhibitors during a year[J].Ter Arkh,2017,89(4):80-85.

[3]張皖東，曹云祥，葛瑤，等．強(qiáng)直性脊柱炎中醫(yī)辨證分型與免疫炎性反應(yīng)指標(biāo)的相關(guān)性研究[J]．中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2014，20(10)：1384-1387．

[4]張小芳，張運(yùn)剛，李守霞，等．HLA-B27與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究[J]．中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013，23(36)：56-59．

[5]劉波，邱萌．HLA-B27表達(dá)陰性的早中期強(qiáng)直性脊柱炎患者調(diào)查[J]．中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，8(12)：63-64．

[6]WANG M M,XIN L H,CAI G Q,et al.Pathogenic variants screening in Seventeen candidate genes on 2p15 for association with ankylosing spondylitis in a Han Chinese population[J].PLoS One,2017,12(5):e0177080.

[7]劉越，趙艷梅，夏群．強(qiáng)直性脊柱炎的診斷與治療進(jìn)展[J]．中國(guó)矯形外科雜志，2015，23(3)：235-238．

[8]王瑤，楊彪，康煒，等．強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中DcR3、IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平及臨床意義[J]．臨床檢驗(yàn)雜志，2014，32(7)：499-501．

[9]陳銀河，劉曉敏，申才良．腫瘤壞死因子-α基因啟動(dòng)子-238位點(diǎn)基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性Meta分析[J]．中華疾病控制雜志，2014，18(3)：194-199．

[10]劉德芳，晏姣，郭明陽(yáng)，等．類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎濕熱痹阻型患者血清和滑膜液IL-17與ESR,CRP的相關(guān)性研究[J]．中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2014，34(3)：272-275．

[11]龍欣．強(qiáng)直性脊柱炎與血清CRP、TNF-α和TNF-β的關(guān)系[J]．現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38(22)：4712-4713．

[12]張?jiān)迄i，錢邦平，邱勇，等．強(qiáng)直性脊柱炎患者消化功能的影響因素分析及臨床意義[J]．中國(guó)脊柱脊髓雜志，2015，25(9)：799-804．

[13]CHEN B,LI J,HE C R,et al.Role of HLA-B27 in the pathogenesis of ankylosing spondylitis(Review)[J].Mol Med Rep,2017,15(4):1943-1951.

[14]朱笑夏，陶慶文，金玥，等．HLA-B27陽(yáng)性與陰性強(qiáng)直性脊柱炎患者骨密度的對(duì)比分析[J]．中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2016，22(10)：1230-1236．

[15]張志堅(jiān)，袁方，梁飛，等．中國(guó)北方漢族人群中HLA-B27基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)研究[J]．中國(guó)輸血雜志，2012，25(3)：213-216．