乙型病毒性肝炎患者血清HBV DNA與HBeAg、HBsAg的相關性分析

侯　玲，劉　韌，龍訓琴，鄧紅艷，管　雯

(1.四川省成都市西區(qū)醫(yī)院檢驗科　610071；2.成都大學附屬醫(yī)院檢驗科，成都 610000)

乙型病毒性肝炎屬于嗜肝DNA 病毒科，其基因組長約為3.3 kb，是局部雙鏈環(huán)狀DNA[1]。根據世界衛(wèi)生組織報道指出，全球約19.8億乙型病毒性肝炎患者，其中約4億為慢性乙型病毒性肝炎患者，每年因乙型病毒性肝炎引起肝硬化、肝衰竭及原發(fā)性肝細胞癌的死亡人數(shù)約為102萬[2]。乙型病毒性肝炎對全球人類的生命安全造成極大威脅，其仍是目前國內外臨床研究的重要課題。熒光定量聚合酶鏈反應(PCR)法作為常規(guī)乙型病毒性肝炎血清學檢測、影像學檢查及生化學檢查的輔助手段，其對乙型病毒性肝炎患者血清乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)水平的檢測顯得尤為重要，有助于臨床用藥的指導[3-5]。為此，本研究回顧性分析四川省成都市西區(qū)醫(yī)院98例乙型病毒性肝炎患者，通過熒光定量PCR法對其血清HBV DNA水平進行檢測，并通過化學發(fā)光微粒子免疫法對其血清學標志物進行檢測，分析HBV DNA與乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的相關性，為臨床診治提供一定的指導意義，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料將四川省成都市西區(qū)醫(yī)院2015年3月至2017年3月收治的98例乙型病毒性肝炎患者作為研究對象，其中男59例，女39例，年齡25～78歲，平均(43.97±12.97)歲。按照HBeAg水平分為HBeAg陰性組(70例)，HBeAg陽性組(28例)；按照HBsAg水平分為HBsAg陰性組(3例)，HBsAg陽性組(95例)。

1.2方法(1)HBV DNA：通過實時熒光定量PCR技術對患者血清HBV DNA進行檢測，檢測儀器購自美國ABI公司，試劑購自7500型，最低檢測下限為40 U/mL；(2)HBeAg、HBsAg：通過化學發(fā)光微粒子免疫法對其血清學標志物(HBeAg、HBsAg)進行檢測，均在全自動免疫分析儀(購自美國雅培公司，型號為i2000SR)及其配套試劑進行檢測，其中HBeAg高于1.0 S/CO，HBsAg高于0.05 U/mL為陽性結果。

1.3統(tǒng)計學處理數(shù)據錄入SPSS 21.0版統(tǒng)計學軟件進行處理分析，計量資料統(tǒng)計描述用M(P25，P75)表示，兩兩比較行Wilcoxon秩和檢驗，多組組間比較行Kruslal-Wallis秩和檢驗；計數(shù)資料以例或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman秩分析HBV DNA與HBeAg、HBsAg的關系，檢驗水準為α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結　　果

2.1HBV DNA與HBeAg的關系比較HBeAg陰性、陽性兩組中的HBV DNA陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.97，P<0.01)，見表1；HBeAg陰性組與陽性組中的HBV DNA水平(對數(shù)表示)比較，差異有統(tǒng)計學意義(Z=3.74，P<0.01)。相關性分析結果顯示，HBV DNA與HBeAg呈顯著正相關(r=0.46，P<0.01)，不同水平的HBV DNA各組間HBeAg水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(H=7.07，P<0.01)，見表2。

表1　　HBV DNA與HBeAg的關系比較

表2　　不同水平的HBV DNA與HBeAg的關系比較[M(P25,P75)]

2.2HBV DNA與HBsAg的關系比較HBsAg陰性、陽性兩組中的HBV DNA陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.07，P>0.05)；HBsAg陰性組與陽性組中的HBV DNA水平(對數(shù)比較)比較，差異有統(tǒng)計學意義(Z=3.98，P<0.05)，見表3。相關性分析結果顯示，HBV DNA與HBsAg呈顯著正相關(r=0.35，P<0.05)，不同水平的HBV DNA各組間HBsAg水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(H=0.68，P>0.05)，見表4。

表3　　HBV DNA與HBsAg的關系比較

表4　　不同水平的HBV DNA與HBsAg的關系比較[M(P25,P75)]

續(xù)表4　　不同水平的HBV DNA與HBsAg的關系比較[M(P25,P75)]

2.3丙氨酸氨基轉移酶(ALT)與HBV DNA、HBeAg、HBsAg的相關性根據不同水平ALT水平結果分析顯示，ALT水平高于40 U/L時，各組間HBV DNA水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表5。

表5　　ALT與HBV DNA、HBeAg、HBsAg的相關性[M(P25,P75)]

3　討　　論

目前，診斷與監(jiān)測乙型病毒性肝炎患者的常用手段包括血清學檢查、生化學檢查、影像學診斷、基因型與變異檢測、HBV DNA檢測及病理性診斷[6-7]。其中，血清標志物檢測作為近幾年來診斷乙型病毒性肝炎患者最為常用的指標，其能夠評估人體對乙型肝炎病毒的病程轉化及免疫反應過程[8]。

HBV DNA與HBeAg陽性均是HBV傳染性及復制程度較高的指標。本研究發(fā)現(xiàn)，HBeAg陰性組與陽性組中的HBV DNA陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；HBeAg陰性組與陽性組中的HBV DNA水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。此外，相關性分析結果顯示，HBV DNA與HBeAg的相關性為0.46。相關系數(shù)偏低的原因可能與43例(43.88%)患者存在HBV DNA陽性而HBeAg陰性有關。其次，以不同水平的HBV DNA對HBeAg進行分組，結果顯示，各組間HBeAg水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果提示，高水平的HBeAg與HBV DNA存在密切關系。同時，研究結果亦反映出HBeAg陰性表達并不代表乙型病毒性肝炎患者體內無HBV復制。并且，當HBeAg滴度較高(>180.00 S/CO)時，其與HBV DNA水平才具有較高的一致性，同時其與HBV DNA聯(lián)合檢測更有助于反映病毒復制程度及患者免疫反應狀態(tài)[9-10]。

相比血清標志物檢測，HBV DNA檢測能夠反映患者抗病毒療效與傳染性的程度[11-12]。其中，血清HBsAg作為HBV感染的主要標志物，其在篩查與診斷乙型病毒性肝炎患者中具有較高的評估價值。血清HBsAg是HBV病毒顆粒的表面抗原，其在人體中的滴度變化幅度較大，并且其在急性感染期的患者中水平可高于1 000 U/mL[13]。在抗病毒治療期間，HBV DNA與HBsAg水平均較低時，無法單純根據HBsAg水平來評估HBV DNA的水平。本研究發(fā)現(xiàn)，3例HBsAg陰性患者中存在2例患者HBV DNA陽性表達。分析其原因，可能與HBV S基因變異存在密切聯(lián)系。HBV S基因變異可引起HBsAg抗原位點出現(xiàn)較大變化，使得傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附試驗試劑無法與之結合，進而引起HBsAg陰性的隱匿性乙型肝炎病毒感染發(fā)生，此時其與HBV DNA聯(lián)合檢測則意義重大。既往研究對HBV DNA與血清HBsAg的關系報道尚存爭議[14]。本研究發(fā)現(xiàn)，HBsAg陰性組與陽性組中的HBV DNA陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；HBsAg陰性組與陽性組中的HBV DNA水平的比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。相關性分析結果顯示，HBV DNA與HBsAg呈顯著正相關，以不同水平的HBV DNA對HBsAg進行分組，結果顯示，各組間HBsAg水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結果表明，雖HBV DNA與HBsAg存在一定的相關性，但從不同水平HBV DNA的角度上看，各組間HBsAg水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但因本研究HBsAg檢測線性范圍較小(<240 U/mL)，尚未能夠說明其與HBV DNA的相關性，今后仍需進一步探討。

ALT作為臨床中評估肝功能的常用指標，其水平明顯上升通常發(fā)生于急性病毒性肝炎患者，水平重度上升通常發(fā)生于慢性肝炎患者，水平輕度上升可見于肝膿腫、肝硬化活動期、心肌梗死、肝癌、心力衰竭及心肌炎等患者[15]。本研究以ALT不同水平對HBV DNA水平進行分層，結果顯示，ALT水平高于40 U/L時，各組間HBV DNA水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果表明，血清HBV DNA水平較高時，乙型病毒性肝炎患者ALT水平較高，提示患者肝損傷的可能較為嚴重。

綜上所述，高水平的HBeAg與HBV DNA存在密切關系，而因HBsAg檢測線性范圍較小(<240 U/mL)，尚未能夠說明其與HBV DNA的相關性，同時血清HBV DNA水平較高時，乙型病毒性肝炎患者ALT水平較高，提示患者肝損傷可能較為嚴重。

[1]李金明，張瑞．常用乙型病毒性肝炎血清學標志物檢測結果報告解釋及臨床應用[J]．中華檢驗醫(yī)學雜志，2012，35(4)：296-300．

[2]YAN L B,ZHU X,BAI L,et al.Mutations in basal core promoter is associated with significant fibrosis in both HBeAg positive and negative treatment-na?ve chronic hepatitis B[J].Clin Res Hepatol Gastroenterol,2017,41(3):296-302.

[3]CHUAYPEN N,SRIPRAPUN M,PRAIANANTATHAVORN K,et al.Kinetics of serum HBsAg and intrahepatic cccDNA during pegylated interferon therapy in patients with HBeAg-positive and HBeAg-negative chronic hepatitis B[J].J Med Virol,2017,89(1):130-138.

[4]林瓊花．乙型肝炎病毒前S1抗原與乙型肝炎標志物聯(lián)合測定臨床意義探討[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2012，9(13)：1668-1669．

[5]閔筱輝，劉婷，張立伐．胸腺肽治療低病毒載量的HBeAg陰性慢性乙型肝炎的隨機對照研究[J]．熱帶醫(yī)學雜志，2013，13(9)：1089-1091．

[6]FERREIRA S D,CHACHS G,SOUZA F F,et al.The HLA-G 14-base pair deletion allele and the deletion/deletion genotype are associated with persistent HBe antigenemia in chronic hepatis B infection[J].Hum Immunol,2017,78(2):166-171.

[7]葉芳麗，張平安，楊相升，等．HBV感染者血清中HBeAg,HBeAb與Pre-S1抗原的相關性研究[J]．現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2012，27(5)：45-46．

[8]PARK Y M,LEE S G.Clinical features of HBsAg seroclearance in hepatitis B virus carriers in South Korea:A retrospective longitudinal study[J].World J Gastroenterol,2016,22(44):9836-9843.

[9]王娜，張淑艷．乙型病毒性肝炎5項檢測結果與HBV-DNA的關系及臨床意義[J]．國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(2)：256-258．

[10]CHIEN T L,WANG J H,KEE K M,et al.Factors predicting HBsAg seroclearance and alanine transaminase elevation in HBeAg-Negative hepatitis B Virus-Infected patients with persistently normal liver function[J].PLoS One,2016,11(12):e0166543.

[11]黃永珍．乙型病毒性肝炎患者的血清標志物檢驗結果分析[J]．檢驗醫(yī)學與臨床，2012，9(11)：1374-1375．

[12]韓建委，劉海雄．HBsAg陽性乙型病毒性肝炎患者HBsAg、HBeAg定量值和HBV-DNA分析[J]．現(xiàn)代實用醫(yī)學，2014，26(5)：591-592．

[13]明翠玲，李婭．乙型肝炎PreS1Ag表達與HBV-DNA、HBeAg相關性研究[J]．中外醫(yī)學研究，2016，14(29)：56-57．

[14]SHEN T,WU W M,DU W H,et al.Positive association between serum apolipoprotein M levels and hepatitis B virus DNA load in HBeAg-negative chronic hepatitis B[J].Lipids Health Dis,2016,15(1):210.

[15]CHUAYPEN N,SRIPRAPUN M,PRAIANANTATHAVORN K,et al.Kinetics of serum HBsAg and intrahepatic cccDNA during pegylated interferon therapy in patients with HBeAg-positive and HBeAg-negative chronic hepatitis B[J].J Med Virol,2017,89(1):130-138.